呼吸道九聯(lián)檢、血清降鈣素原聯(lián)合痰培養(yǎng)與藥敏分析在小兒急性呼吸道感染診治中的應(yīng)用

陳華俊

（防城港市第一人民醫(yī)院，廣西壯族自治區(qū) 防城港 538021）

0 引言

小兒急性呼吸道感染是由細菌、病毒以及其他非特異性病原體引起的氣管、支氣管及肺部感染性疾病，是小兒住院的常見疾病之一。如不及時診治，會導(dǎo)致呼吸系統(tǒng)癥狀傾向性地延續(xù)到成人并發(fā)展為慢性疾病[1]，因此，快速準確的區(qū)分不同病原體感染并提供相對應(yīng)的藥敏試驗及用藥后療效觀察的實驗室指標，對于小兒急性呼吸道感染的診治尤為重要。本文將對呼吸道感染病原體的檢測方法及炎性指標進行分析，綜合論述呼吸道九聯(lián)檢、血清降鈣素原聯(lián)合痰培養(yǎng)與藥敏分析在小兒急性呼吸道感染診治中的應(yīng)用價值。

1 呼吸道感染病原體的檢測方法

近年來，隨著新的致病性病原體不斷的發(fā)現(xiàn)，相應(yīng)的檢測方法也在不斷的更新，為臨床呼吸道疾病的診治提供了有力的依據(jù)。目前常見呼吸道病原體的檢測方法包括。

1.1 病原體分離培養(yǎng)

痰液的病原體培養(yǎng)主要用于呼吸道感染的病因診斷，合格的痰標本要求白細胞數(shù)>25個/低倍視野，鱗狀上皮細胞<10個/低倍視野，或白細胞/鱗狀上皮細胞>2.5/1。定量培養(yǎng)菌量≥107cfu/mL可判定為致病菌。細菌培養(yǎng)一般選用血平板、巧克力平板、中國藍/麥康凱培養(yǎng)基。

病毒分離培養(yǎng)法目前仍是病毒鑒定的經(jīng)典方法。病毒分離培養(yǎng)方法分為三種：動物培養(yǎng)、雞胚培養(yǎng)和組織細胞培養(yǎng)。組織細胞培養(yǎng)因為操作相對簡單、成本相對較低而被廣泛采用。病毒培養(yǎng)常選用猴腎或人胚腎細胞、二倍體細胞株、Hela、HepG2細胞、犬腎傳代細胞和雞胚接種，如：流感病毒常采用MDCK細胞分離，腺病毒和呼吸道合胞病毒采用HEP2細胞分離等[2]，通過電子顯微鏡、細胞病變效應(yīng)、凝血實驗、凝血抑制實驗、中和實驗和空斑形成實驗進行鑒定。

傳統(tǒng)病原菌培養(yǎng)方法費時，其檢測時間為4-5天，且有的病原菌生長緩慢、有的是苛養(yǎng)菌、有的病原菌極難培養(yǎng)、還有少數(shù)無法培養(yǎng)或者致病力很強的病原菌。病毒培養(yǎng)由于實驗條件要求較高，培養(yǎng)周期較長且操作繁瑣，在普通實驗室應(yīng)用受限。但現(xiàn)階段，臨床主要采用半自動及自動化微生物分析系統(tǒng)進行痰檢驗，自動化程度更高，覆蓋病原菌面積更寬，準確快速鑒定病原菌的同時，報告結(jié)果更完整，包括藥物敏感性，臨床可通過藥敏試驗選擇合適的抗菌藥物。病原菌分離培養(yǎng)是鑒別呼吸道病原菌類型的金標準，因此，痰培養(yǎng)仍有不可取代的地位。

1.2 血清學(xué)檢測

血清學(xué)檢查是診斷呼吸道病原體感染的主要手段。其檢測機理主要是通過已知的標準抗原或由患者標本分離出的新病原作為抗原與患者血清結(jié)合產(chǎn)生抗原抗體反應(yīng)，在臨床診斷和流行病學(xué)的調(diào)查中普遍使用。

1.2.1 血凝抑制試驗

某些呼吸道病毒的血凝素能選擇性地使某種或某幾種動物的紅細胞發(fā)生凝集，當存在血凝素特異性抗體時，可阻止血細胞發(fā)生凝集，稱為血凝抑制(HemagglutjnationInhibition，HI)。血凝抑制試驗用于流感、副流感、腸道病毒、腺病毒的檢測中，微量法血凝抑制試驗是WHO在流感監(jiān)測工作中推薦使用的標準方法。該方法影響因素為病毒表面的特異性紅細胞抑制物質(zhì)，所需病毒較多。

1.2.2 中和實驗

用已知抗體血清和待測病毒懸液混合，室溫下作用一段時間后接種敏感細胞，經(jīng)培養(yǎng)后觀察細胞病變效應(yīng)或紅細胞吸附現(xiàn)象是否消失，即特異性抗體能否中和相應(yīng)病毒的感染性。

1.2.3 固相膜免疫實驗

利用硝酸纖維素膜、玻璃纖維素膜和尼龍膜等作為載體,金元素、硒元素和酶促底物置于載體上，抗原和抗體通過穿流或橫流的形式在載體上反應(yīng) ,常用的實驗方式有免疫層析實驗、免疫滲濾實驗、酶聯(lián)免疫斑點實驗、免疫印跡法等。呼吸道病原體的抗原或抗體皆可通過此方法檢測 ，但因其特異性較差，且易受血清質(zhì)量的影響，因此應(yīng)用并不普遍。

1.2.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）

用已知的抗原 (抗體)包被在聚苯乙烯微孔上，和待測的抗體(抗原)、酶標的抗原(抗體 )進行反應(yīng)，通過洗滌分離，繼而加入酶促底物顯色，根據(jù)呈色的強弱，判定待測物的有無或多少。該方法是臨床實驗室通過檢測抗原抗體診斷病原體感染應(yīng)用最廣泛的技術(shù)，ELISA方法操作簡單，2-3h即可獲得檢測結(jié)果，不需要昂貴的儀器，適合于大批量標本檢測，靈敏度和特異性較好。但ELISA檢測結(jié)果易受許多因素影響，如標本中抗原濃度太高可能導(dǎo)致假陰性；血清中非特異性IgG濃度高或含有類風濕因子，或固相包被的抗原純度不夠，則可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果。

1.2.5 化學(xué)發(fā)光免疫分析法(Chemiluminescence Ⅰmmunoassay,CLIA)

化學(xué)發(fā)光免疫分析是將具有高靈敏度的化學(xué)發(fā)光測定技術(shù)與高特異性的免疫反應(yīng)相結(jié)合，是繼放射免疫分析、酶免分析、熒光免疫分析和時間分辨熒光免疫分析之后發(fā)展起來的一項新的免疫測定技術(shù)。如果將化學(xué)發(fā)光物質(zhì) (如吖啶酯)直接用于標記抗原或抗體，稱為化學(xué)發(fā)光標記免疫分析，如果采用酶 (辣根過氧化酶或堿性磷酸酶)標記抗原或抗體 ，將化學(xué)發(fā)光物質(zhì)作為酶的底物 (魯米諾，金剛烷)，稱為化學(xué)發(fā)光酶免疫分析。趙宗瑞等采用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光檢測呼吸道合胞病毒IgM抗體，該方法及試劑精密性良好，與臨床診斷標準符合率較好[3]?；瘜W(xué)發(fā)光法具有高靈敏度、高特異性、快捷方便等特點，但一般需大型儀器設(shè)備，成本較高，因此，此法用于呼吸道病原體的檢測并不廣泛。

1.2.6 免疫熒光技術(shù)(熒光抗體技術(shù))

免疫熒光技術(shù)是標記免疫技術(shù)中發(fā)展最早的一種的技術(shù)，目前受到較多關(guān)注[4]。該技術(shù)建立于免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)之上。利用熒光素(異硫氰酸熒光素)標記抗體，用熒光顯微鏡觀察有無顯熒光的抗原抗體復(fù)合物存在。測定方式分為直接法和間接法，間接法的敏感度比直接法高5~10倍。該方法是呼吸道病原體，特別是新發(fā)高致病性病原體檢測的常用方法。呼吸道九聯(lián)檢的基本原理，是用間接免疫熒光法確定呼吸道感染患兒血清標本中的特異性IgM抗體。IgM抗體是個體發(fā)育過程中最早合成和分泌的抗體，是初次體液免疫應(yīng)答中最早出現(xiàn)的抗體,提示新近發(fā)生感染，是近期感染的一個有效標志物。呼吸道九聯(lián)檢是用間接免疫熒光法檢測呼吸道肺炎支原體、肺炎衣原體、嗜肺軍團菌、Q熱立克次體、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、副流感病毒共 9種呼吸道病原體IgM 抗體。該方法是無放射性污染，具有高度的特異性、敏感性，操作簡便、快捷，可同時檢測九種病原體，覆蓋面廣，成本低，只需配備相應(yīng)的熒光顯微鏡，無需大型儀器設(shè)備，易于推廣，其對小兒急性呼吸道感染的診治指導(dǎo)性強[5-7]。

1.3 分子生物學(xué)(核酸擴增法)

核酸擴增法主要是通過指定的DNA引物片段擴增檢測相應(yīng)病原體的DNA，其特點是具有高效的特異性、敏感性，對多種病原體的檢測普遍有效。其中聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)就是一種行之有效的檢測手段，對不易培養(yǎng)和不適合在培養(yǎng)基上生長的病毒可使用 PCR檢測技術(shù)。PCR檢測技術(shù)在過去十幾年里飛速發(fā)展，已廣泛應(yīng)用于臨床實驗室的常規(guī)檢測，因此利用核酸檢測技術(shù)已成為呼吸道病原體體外診斷的新方向。核酸檢測技術(shù)在保證高靈敏度和特異度的基礎(chǔ)上，大大縮短了檢測時間，國際上圍繞其建立了多種較為成熟的呼吸道病原體檢測方法。

1.3.1 實時熒光定量PCR

以傳統(tǒng)PCR技術(shù)為基礎(chǔ)發(fā)展起來的實時熒光定量PCR，使核酸檢測從定性分析發(fā)展到定量分析，開創(chuàng)了核酸檢測分析的新局面。目前，實時熒光定量PCR已成為呼吸道病原體核酸檢測的最主要方法。相對于傳統(tǒng)PCR，熒光定量PCR檢測呼吸道病原體有如下優(yōu)點：①定量檢測可隨時監(jiān)控病毒擴增情況；②建立了一個封閉式反應(yīng)檢測環(huán)境，大大減少了交叉污染的可能性，同時具有很高的靈敏度及特異度，且所需標本量極??；③檢測時間較傳統(tǒng)PCR短。

1.3.2 多重PCR技術(shù)

多重PCR是在同一PCR體系里加入兩對或兩對以上引物，同時擴增出多個核酸片段的PCR，一次多重PCR可同時檢測、鑒別出多種病原體，在臨床混合感染的鑒別診斷上具有其獨特的優(yōu)勢和很高的實用價值。如王玉月[8]等報道的九種常見呼吸道病原體副流感病毒 1、2、3型、肺炎支原體、肺炎衣原體、呼吸道合胞病毒、腺病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒的檢測。近年來，多重熒光定量PCR已成為呼吸道病毒檢測的研究熱點。該方法在一個反應(yīng)體系中可同時實現(xiàn)定量檢測和高通量檢測的目的。Fang等[9]利用一步多重實時定量PCR法可同時檢測乙型流感病毒，甲型 H1N1、H3N2、H5N1流感病毒，其檢測靈敏度可達101~102copies/mL體外轉(zhuǎn)錄RNA。436例咽拭子標本的陽性檢出率達59.86%(261/436)，同時用病毒分離培養(yǎng)法進行復(fù)檢，其陽性檢出率僅為43.35%，這也說明多重實時定量PCR的靈敏度要高于傳統(tǒng)的病毒分離培養(yǎng)。

1.3.3 靶序列富集多重PCR技術(shù)

該技術(shù)的原理是首先利用低濃度的靶序列特異性引物經(jīng)巢式PCR擴增富集目標序列，然后引入一對高濃度的通用超級引物對目標序列進行大量擴增，并在此過程中以生物素標記PCR產(chǎn)物。該技術(shù)能在一次反應(yīng)中對多種靶序列進行高度敏感和特異的擴增與檢測并實現(xiàn)對所有目標序列進行均勻、同效率的擴增。此外，Han等將靶序列富集多重PCR的多重擴增技術(shù)和液相芯片檢測技術(shù)有機結(jié)合，建立了常見呼吸道病原體的分子鑒別診斷平臺，將擴增的高效性和檢測的高效性相結(jié)合，非常適合于對多種病原體核酸的快速檢測。王鑫磊等[10]報道了鮑曼不動桿菌等14種病原體的檢測。

1.3.4 恒溫擴增芯片法

利用具有鏈置換功能的聚合酶在恒溫(65℃)條件下進行反應(yīng),使用熒光染料摻入法進行實時熒光檢測。擴增陽性的樣品會產(chǎn)生類似實時熒光的“S”形擴增曲線,進一步完成對靶基因的擴增和檢測。該方法具有特異性和敏感性更高、試劑耗量低、病原體覆蓋面廣等優(yōu)勢,具備了對呼吸道感染性疾病的快速診斷能[11-14]?？递砼宓萚15]報道了對13種常見呼吸道感染病原體包括肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、鮑曼不動桿菌、嗜肺軍團菌、肺炎支原體、肺炎衣原體等的檢測。

1.3.5 懸浮陣列技術(shù)

該技術(shù)采用靶序列富集多重PCR結(jié)合多功能懸 浮陣列檢測平臺對毒進行定量分析。由于該技術(shù)開始僅使用少量的特異性引物擴增，隨后經(jīng)超級引物進行大量的放大，提高了敏感度和特異度，基本實現(xiàn)了對所有目標片段以相同的效率進行擴增，從而達到對多種病毒核酸定量檢測的目的。xTAG檢測板技術(shù)也屬于懸浮陣列技術(shù)。FDA可同時檢測和鑒定12種特定呼吸道病毒的xTAG呼吸道病毒檢測板。xTAG是首個批準上市的可同時檢測和區(qū)別A型流感病毒H1和H3亞型的呼吸道病毒檢測板，同時也是首個被用于檢測確定的人類偏肺病毒檢測板。

核酸擴增法敏感性強、特異性高，在呼吸道病原體的核酸檢測中具有較高的實用價值，但其對大量不同的病原體快速檢測和鑒別的能力較差。另外其缺點還在于運用的檢測儀器昂貴，對檢測空間、環(huán)境等條件和操作技術(shù)人員的要求相對較高，且需要驗收及準入才可以開展該項目的檢測，因此該方法的推廣，特別在基層醫(yī)院的應(yīng)用受到了一定的限制[16]。

2 呼吸道感染的炎性指標

呼吸道感染病原體在體內(nèi)繁殖或產(chǎn)生毒素，誘發(fā)呼吸道感染的發(fā)生和發(fā)展，隨著病原體及其代謝產(chǎn)物不同程度的擴散，引發(fā)炎癥或器官功能障礙?？旖萦行У难仔员O(jiān)測指標有利于臨床采取相應(yīng)的抗感染治療，影響患者的預(yù)后，對臨床具有重要價值。目前臨床常用的炎性指標主要包括以下幾類。

2.1 白細胞（WBC）計數(shù)及分類

WBC是外周血的有核細胞，通過不同方式不同機制消滅病原體，參加免疫反應(yīng)，產(chǎn)生抗體，是機體抵抗病原微生物等異物入侵的主要防線，所以臨床多用WBC計數(shù)及分類作為診斷和鑒別感染類型的常規(guī)指標。其增高見于大部分化膿性細菌引起的感染，減少見于病毒性感染，病毒性感染時常將淋巴細胞計數(shù)作為參考指標。白細胞計數(shù)及分類檢測速度快，價格低廉，容易被患者接受。但是人體血液中WBC基礎(chǔ)值個體差異大，且WBC總數(shù)易受運動、日間變化、精神、藥物等多種因素影響，所以WBC計數(shù)用于病原體感染性疾病的診斷敏感性不夠，單憑借血常規(guī)的變化作為診斷病原體感染的依據(jù)具有一定局限性。

2.2 C反應(yīng)蛋白（CRP）

CRP是人體肝臟細胞所合成分泌的一種急性時相反應(yīng)蛋白，是臨床上運用較為廣泛的感染診斷指標之一，在機體受到多種感染或組織細胞受損等非感染因素時，均可引起CRP升高，并且上升較為迅速，在炎癥反應(yīng)發(fā)生后的5-8h就有可能呈現(xiàn)出來。在評價感染所致的炎癥反應(yīng)方面，CRP不僅可作為敗血癥預(yù)示和預(yù)后的指標，還常用來幫助鑒別細菌和病毒感染。正常情況下CRP在人體血液中含量甚微，而在細菌感染、炎癥、組織損傷、手術(shù)創(chuàng)傷等應(yīng)激狀態(tài)下顯著升高。研究顯示急性損傷和感染后6-12h CRP即可明顯升高，36-50h達峰值，最高可至百倍及1000倍以上[17]，且與炎性反應(yīng)和組織損傷的程度呈正比，《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第七版）》中也指出多數(shù)患者外周血CRP升高，其進行性上升是重型、危重型患者的臨床預(yù)警指標。大多數(shù)病毒感染的患者值較低，<2~4mg/L，但在部分病毒感染（尤其是病毒性腦膜炎患者）時其水平可有較明顯上升。目前CRP已經(jīng)作為醫(yī)院急診常規(guī)檢測項目，是診斷全身細菌性感染的重要標志物，動態(tài)觀察CRP可作為細菌感染合理使用抗生素、療效及治愈判斷的指標。陳銳等[18]的研究顯示，小兒急性呼吸道感染早期階段，CRP水平增高,接受相應(yīng)治療后逐步降低,提示CRP可作為判定急性呼吸道感染程度的主要指標之一。但由于CRP在細菌感染初期血清升高不明顯，不利于臨床做出快速診斷，且在心血管疾病、創(chuàng)傷等狀態(tài)下也可升高，因此，CRP對感染缺乏特異性。

2.3 血清淀粉樣蛋白A（SAA）

SAA是一個高度異質(zhì)性蛋白，由肝細胞產(chǎn)生，其核心的臨床價值在于對病毒性感染的鑒別，可作為診斷病毒、細菌感染的敏感指標。在細菌感染性疾病中，SAA的敏感性高于CRP，上升早、幅度大，尤其是在急性細菌感染早期，檢測SAA的優(yōu)勢更加顯著；在病毒感染性疾病中，SAA顯著升高，根據(jù)其升高的程度或與其他指標聯(lián)合運用，可以提示細菌性或病毒性感染，彌補了目前常用炎癥標志物不能提示病毒感染的不足。SAA作為新一代出現(xiàn)的炎癥感染指標，聯(lián)合CRP、血常規(guī)的診斷，是判斷病毒感染，監(jiān)測病程及用藥療效的優(yōu)選血清學(xué)指標。應(yīng)當注意的是，SAA是非特異性的炎癥標志物，需要在結(jié)合臨床其他證據(jù)的前提下，進行相應(yīng)的臨床診斷。

2.4 紅細胞沉降率（ESR）

ESR反映的是紅細胞的沉降速度，實質(zhì)為血漿纖維蛋白原和免疫球蛋白的聚集，是一種非特異性的檢查指標。當機體發(fā)生炎性反應(yīng)時，ESR在2~3 d后即會出現(xiàn)升高，其原因可能為：急性細菌性感染時，血中α1胰蛋白酶、α2巨球蛋白、CRP、轉(zhuǎn)鐵蛋白、纖維蛋白原等增多，這些炎性反應(yīng)趨化物均可導(dǎo)致紅細胞聚集，從而使紅細胞沉降加快，ESR數(shù)值增加，有時高達100 mm/h以上，因此臨床上將其作為疾病是否在活動期的檢測指標。ESR在炎性反應(yīng)控制后，下降速度較慢，一般需要幾周時間才能正常，且易受到年齡、性別、紅細胞數(shù)量、個體大小、溫度、抗凝劑多少等的影響，特異性和敏感性低，臨床應(yīng)用存在局限性。

2.5 白介素 6（IL-6）

IL-6是一種具有多種生物活性的細胞因子，由212個氨基酸殘基 組成，主要參與急性期炎癥反應(yīng)。在感染、應(yīng)激與創(chuàng)傷等刺激下由活化的T細胞、B細胞及巨噬細胞等大量分泌。IL-6可對內(nèi)皮細胞與炎性細胞產(chǎn)生直接的激活作用，可加速炎癥反應(yīng)的速度，對組織器官造成損害。IL-6參與許多疾病的發(fā)生和發(fā)展，炎癥、病毒感染、自身免疫疾病等均可導(dǎo)致其血清水平升高，而且它的變化比CRP更早，細菌感染時IL-6迅速升高，PCT在2h后增加，而CRP在6h后才迅速增加，因此可用來輔助急性感染的早期診斷。有研究表明，在臨床癥 狀出現(xiàn)前2d，血液中IL-6水平已大幅增加，故早期陽性率較高，對于早期評估感染嚴重程度具有重要價值[19]。此外，IL-6水平與患者感染嚴重程度和預(yù)后密切相關(guān)，《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第七版）》中指出外周血炎癥因子IL-6進行性上升是重型、危重型的臨床預(yù)警指標，因此動態(tài)觀察IL-6水平有助于了解感染性疾病的進展和對治療的反應(yīng)。

2.6 降鈣素原（PCT）

PCT作為血清降鈣素(CT)的前肽物質(zhì)，由甲狀腺 C細胞分泌產(chǎn)生 ，是一種由116個氨基酸組成的糖蛋白。與傳統(tǒng)的炎癥指標 WBC、CRP等比較，PCT在感染發(fā)生僅2h后即可提示系統(tǒng)感染的存在，并能區(qū)分細菌感染還是病毒感染。炎癥反應(yīng)釋放的 PCT 可以被細菌毒素如內(nèi)毒素直接誘導(dǎo)產(chǎn)生，也可由細胞介導(dǎo)的宿主反應(yīng)如白細胞介素-1、腫瘤壞死因子-α、白細胞介素-6間接誘導(dǎo)產(chǎn)生，但此誘導(dǎo)過程可以被病毒感染時機體釋放的細胞因子和干擾素阻斷，所以病毒性感染患者的PCT水平一般都很低。當患者出現(xiàn)細菌、真菌感染時，機體的降鈣素原水平會出現(xiàn)明顯的上升。但在病毒感染與非感染性炎癥反應(yīng)時機體的降鈣素原水平僅會出現(xiàn)輕度上升或無顯著變化。細菌性肺炎患者的PCT水平高于病毒、不典型病原體（軍團菌除外）和結(jié)核菌導(dǎo)致的肺炎，PCT水平與肺炎的嚴重程度呈正相關(guān)，其鑒別病毒性疾病的敏感性和特異性均高于傳統(tǒng)標志物（WBC、CRP、ESR等）。可見，PCT對細菌性及非細菌性感染具有早期診斷及鑒別診斷的價值[20]。

連續(xù)監(jiān)測PCT水平有助于了解患者的感染情況，指導(dǎo)運用抗生素。目前，國內(nèi)外許多學(xué)者就PCT在血清中的濃度指導(dǎo)使用抗生素進行了一系列的研究，并形成了一整套PCT指導(dǎo)抗生素使用的治療策略[21]?？蓽p少抗生素的使用比例和時間，減少抗生素的濫用，減少耐藥菌群的產(chǎn)生[22-23]。PCT含量反映了細菌感染的程度并作為評價病情嚴重程度的重要指標之一，目前，國內(nèi)外部分醫(yī)院依據(jù)PCT檢測結(jié)果對小兒急性呼吸道感染患者合理應(yīng)用抗生素：當PCT<0.25ng/mL,不主張應(yīng)用抗生素；而PCT≧0.5ng/mL，則主張針對性應(yīng)用抗生素。因此，血清PCT檢測，能為臨床對患兒早期診治和合理用藥提供重要依據(jù)。

3 總結(jié)

綜上所述，小兒急性呼吸道感染的病原體及炎性指標檢測的方法層出不窮，各有優(yōu)缺。引起小兒急性呼吸道感染常見病原體種類有病毒、支原體、衣原體和細菌等，對藥物敏感性各不同。因此，確定病原體種類是個體化治療的依據(jù)。病原體檢測的方法有病原體分離培養(yǎng)及鑒定、血清學(xué)試驗、核酸檢測等[24]。病原體分離培養(yǎng)及鑒定是診斷 呼吸道感染的金標準，痰培養(yǎng)與藥敏分析鑒定是呼吸道感染常用的病原體檢測方法,仍有其不可取代的地位。核酸檢測成本、設(shè)備和人員要求高，基層實驗室難普及，且檢測病原體特異性抗原易受采集標本質(zhì)量的影響，陽性率低于病原體分離培養(yǎng)[25]，因此存在一定的漏診風險。血清學(xué)檢測中，呼吸道九聯(lián)檢病原體IgM抗體檢測較其他血清學(xué)檢測方法具有簡便、快捷、經(jīng)濟，特異性高等優(yōu)點，已廣泛應(yīng)用于小兒急性呼吸道感染的診斷中。在呼吸道感染炎性指標中，PCT、CRP、IL-6水平的變化較其他炎性指標對于早期判斷急性上呼吸道感染患兒是否為細菌感染更有指導(dǎo)意義，同時還可作為評估預(yù)后的指標。研究表明，PCT、CRP、IL-6的敏感度與特異度均較高，但PCT的敏感度與特異度相對更高,且陽性與陰性預(yù)測率均明顯高于其他兩項 ，動力學(xué)研究表明，PCT、IL-6和CRP在機體感染時出現(xiàn)的時機不同，PCT早于CRP，但晚于IL-6，同時PCT峰值更寬，消退更緩慢。且PCT的約登指數(shù)較其余兩項炎癥標志物相比有明顯增加，表明PCT對細菌感染性疾病的診斷價值明顯優(yōu)于其余兩項，PCT作為判斷是否為細菌感染的指標特異度更好，真實度更高[26-28]?？傊琍CT對診斷細菌性和非細菌性感染有重要價值。但細菌性感染是否合并病毒或支原體等的感染，非細菌性感染中病毒和支原體等的鑒別，還需做IgM抗體檢測, 臨床的治療仍需病原體的鑒定與藥敏分析作為參考依據(jù)。因此，病原體分離培養(yǎng)中的痰培養(yǎng)與藥敏分析、血清學(xué)檢測中的呼吸道九聯(lián)檢及炎性指標中的降鈣素原聯(lián)合檢測應(yīng)用，對小兒急性呼吸道感染的診斷和治療具有重要的參考價值。