雞血藤地榆黃酮提取物清除羥自由基作用的研究

林弘 林國(guó)衛(wèi)

摘要：以雞血藤和地榆為材料，采用超聲波輔助浸提法提取黃酮，并用分光光度法測(cè)定其含量，將提取的黃酮進(jìn)行羥自由基清除作用試驗(yàn)。結(jié)果表明雞血藤黃酮提取率為3.49%，雞血藤地榆混合物黃酮的提取率為4.56% ，羥自由基的清除率的IC50值分別是0.4188mg/ml和0.1448mg/ml。雞血藤地榆黃酮的提取液具有更好的羥自由基的清除效果。

關(guān)鍵詞：雞血藤;地榆;黃酮;羥自由基

【中圖分類(lèi)號(hào)】R97 ? ? ? ? ? ? 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A ? ? ? ? ? ? 【文章編號(hào)】2107-2306（2021）13--01

雞血藤為豆科植物，其干燥藤莖是一味中國(guó)傳統(tǒng)活血化瘀的中草藥。它味苦微甘，具有降血壓和抗脂質(zhì)過(guò)氧化的雙重功效，其根及莖具有活血舒筋，養(yǎng)血調(diào)經(jīng)的功效[1] 。地榆是薔薇科植物，屬多年生草本植物，根入藥，性微寒、味苦，它具有止血涼血、清熱解毒 、收斂止瀉及抑制多種致病微生物和腫瘤的作用[4]。因黃酮類(lèi)化合物是雞血藤和地榆的主要生理活性物質(zhì)，所以研究其黃酮類(lèi)化合物具有重要意義。

在黃酮類(lèi)化合物的提取研究方法中因?yàn)槌曁崛》ň哂兴俣瓤?、能耗低、不破壞有效成分的特點(diǎn)，所以文以超聲波輔助乙醇浸提法提取黃酮，并進(jìn)一步探討它們對(duì)羥自由基的清除作用。

1.材料與試劑

1.1材料：雞血藤、地榆購(gòu)于百草堂中藥店。

1.2試劑與儀器

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（BR 上海展云化工有限公司） 無(wú)水乙醇（AR 西隴化工股份有限公司 ）、硫酸亞鐵（AR 西隴化工股份有限公司 ）、水楊酸（AR 中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑公司）、亞硝酸鈉（AR國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）、硝酸鋁（AR上海實(shí)驗(yàn)試劑有限公司）。

RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）、DHG-914DA電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）、UV-2012PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（尤尼柯儀器有限公司）、SHB-III循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）、AL104電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）、HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋（國(guó)華有限公司）。

2方法

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：精密稱(chēng)取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10mg，用75%的乙醇定容至100ml容量瓶中。得到0.1mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。采用Rice-Evans C.A.的方法制作標(biāo)準(zhǔn)曲線[5]。在510nm的波長(zhǎng)下測(cè)定吸光值，以對(duì)照蘆丁濃度c（mg/ml）為橫坐標(biāo)，以吸光度（A）作為縱坐標(biāo)，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.2黃酮的提取

將材料粉碎，雞血藤地榆按4：3混合，恒溫干燥后待用。稱(chēng)取材料10g于三角瓶中，按料液比1：20（w/v）加入200ml 60%的乙醇，超聲波提取條件為200W 60℃ 2hr。過(guò)濾后將濾渣重新提取一次。合并兩次濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收乙醇，得到浸膏，用95%的乙醇稀釋定容至100ml，即為樣品液[6-7]。

2.3黃酮的測(cè)定

取上述樣品液1mL用60%乙醇定容至10ml。將樣品液替代標(biāo)準(zhǔn)溶液按2.1的方法測(cè)定，得到OA值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中，計(jì)算樣品液質(zhì)量濃度C[8]?？傸S酮提取率計(jì)算公式為：W=C·F·V/（1000·M）·100% ? ? ? （1）

其中C為樣品液質(zhì)量濃度，F(xiàn)為溶液的稀釋倍數(shù)，V為溶液的體積，M為樣品的質(zhì)量。

2.4 回收率實(shí)驗(yàn)

精密量取樣品液1.0 ml，加入蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品1.0 ml，參照樣品測(cè)定方法，測(cè)定吸光度，求出回收率為99.94%。

2.5羥自由基的清除率

根據(jù)fenton反應(yīng)體系：H202+Fe2+ ? ?Fe3++OH-+.OH ?來(lái)進(jìn)行試驗(yàn)，得出數(shù)據(jù)。先取8根試管分別加入硫酸亞鐵，水楊酸，乙醇，樣品液，蒸餾水，過(guò)氧化氫，放在37℃下反應(yīng)30分鐘，在510nm的波長(zhǎng)下測(cè)吸光度[9]。清除率計(jì)算公式如下：

清除率=[A0-（AX-AX0）]/A0*100% ? ? ? ? ? （2）

其中A0為空白對(duì)照溶液吸管度，AX為樣品液吸光度，AX0為不加過(guò)氧化氫樣品液的本底吸光度[10]。

3、結(jié)果與討論

3.1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

根據(jù)測(cè)定不同濃度蘆丁對(duì)照品的吸光度值，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，試對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，測(cè)得濃度與吸光度的關(guān)系曲線的回歸方程式：y=8.7286x - 0.0016，相關(guān)系數(shù)R2=0.9989。

3.2黃酮的提取率

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程和提取率的公式（1），經(jīng)計(jì)算雞血藤樣液總黃酮含量為0.349mg/ml，提取率為3.49%;雞血藤地榆總黃酮含量為0.456mg/ml，提取率為4.56%。

3.3羥自由基的清除率

依照2.5的方法，測(cè)得A0、AX、AX0，根據(jù)計(jì)算公式（2），得到樣液羥自由基的清除率以及IC50 值[2-3]。

樣液濃度0.1396mg/ml時(shí)，清除率為19.7%，樣液濃度0.2792mg/ml）時(shí)，清除率為34.5%，樣液濃度0.4188mg/ml時(shí)，清除率為 50.1%。雞血藤黃酮提取液清除羥自由基的半效值IC50=0.4188mg/ml。

混合物黃酮樣液為0.0228mg/ml時(shí)，清除率為8.3%;樣液為0.0684mg/ml時(shí)，清除率為24.3%;樣液為0.2052mg/ml時(shí)，清除率為70.5%。樣液濃度為0.1448mg/ml時(shí)，清除率為50%，即IC50值=0.1448mg/ml。

4討論

采用超聲波輔助乙醇浸提法提取黃酮的效果顯著，雞血藤地榆提取物中含有豐富的黃酮類(lèi)化合物，提取率為4.56%。

雞血藤黃酮提取液清除羥自由基的半效值為0.4188mg/ml，雞血藤地榆黃酮提取液清除羥自由基的半效值為0.1448mg/ml。與維生素C的IC50值0.23mg/ml[11] 比較：雞血藤黃酮的IC50>維生素C的IC50值>雞血藤地榆黃酮IC50，說(shuō)明雞血藤地榆混合物具有優(yōu)于Vc 的清除羥自由基的功效。以上研究結(jié)果為中藥雞血藤地榆的應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。

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課題 江西省教育廳科技項(xiàng)目，編號(hào)：GJJ13709