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    結(jié)核感染T細胞斑點試驗、結(jié)核分枝桿菌抗體檢查應用于肺結(jié)核患者診斷中的價值對比

    2021-01-04 11:32:40黃銀娜
    中國醫(yī)學創(chuàng)新 2020年35期
    關鍵詞:斑點預測值結(jié)核

    黃銀娜

    肺結(jié)核是由結(jié)核分枝桿菌感染肺部導致的常見慢性傳染性疾病[1]。隨著病情的進展,可引起呼吸困難、氣促、咯血,嚴重者可危及生命,故對該疾病進行早期診斷、治療尤為重要[2-3]。臨床診斷肺結(jié)核的金標準為痰涂片、痰培養(yǎng)尋找結(jié)核分枝桿菌,但該檢查耗時、費力,且陽性率低,易漏診、誤診,耽誤治療[4]。目前結(jié)核感染T 細胞斑點(T-SPOT.TB)試驗主要通過檢測結(jié)核患者機體內(nèi)活化的特異性T 細胞,可對潛伏期、疑似結(jié)核的患者進行篩查[5]。結(jié)核分枝桿菌抗體(TB-Ab)檢查通過檢測機體血清中所含的IgG 抗體,但對于處于靜止期、既往感染結(jié)核桿菌后產(chǎn)生抗體仍存留于機體亦檢測陽性率[6-7]。為尋找快速、可靠的早期診斷肺結(jié)核患者的方法,本研究選取120 例患者作為研究對象,探討T-SPOT.TB 試驗與TB-Ab 檢查對肺結(jié)核診斷價值,現(xiàn)報道如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 選取2018 年6-12 月本院收治的活動性肺結(jié)核患者80 例作為肺結(jié)核組。納入標準:明確診斷為肺結(jié)核患者[8];年齡>18 歲;臨床資料完整。排除標準:合并其他呼吸系統(tǒng)疾病患者;既往未接受系統(tǒng)抗結(jié)核藥物治療。另選取同期本院收治的非結(jié)核病患者40 例作為對照組。所有患者及家屬均知情同意并簽署知情同意書,本研究已經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。

    1.2 方法 所有患者均進行TB-Ab 檢查與T-SPOT.TB試驗。

    1.2.1 T-SPOT.TB 試驗 選取真空采血管(含肝素抗凝)采集患者約8 mL 外周靜脈血,充分混勻后室溫(18~25 ℃)保存4 h 內(nèi)進行送檢,嚴格按照使用說明操作,首先分離單個核細胞(PBMCs),其次是單個核細胞洗滌和計數(shù),然后制備工作濃度細胞懸液,將細胞懸液和抗原加入微孔培養(yǎng)板進行培養(yǎng)。選擇TB 特異性ESAT-6(抗原A)、CFP-10(抗原B)肽段作為刺激原。孵化后,選擇PBS 洗滌微孔板并加入酶標抗體,再洗滌微孔板加入底物反應液,最后采用ELISPOT 讀板儀對斑點數(shù)進行閱讀、統(tǒng)計。陽性診斷標準,其中ESAT-6(A 孔)、CFP-10(B孔)任一孔內(nèi)檢測出現(xiàn)以下情況之一即診斷陽性:(1)對照孔內(nèi)斑點數(shù)≥6 時且抗原A 或B 孔斑點數(shù)≥2×(空白對照孔斑點數(shù));(2)對照組孔內(nèi)斑點數(shù)<6 時,且(抗原A 或B 孔斑點數(shù))-(空白對照孔斑點數(shù))≥6。如果上述標準不符合且陽性質(zhì)控對照孔正常時檢測結(jié)果為陰性。檢測試劑盒由英國牛津大學生產(chǎn),上海復興醫(yī)藥股份有限公司提供,各檢測步驟按照說明書嚴格規(guī)范執(zhí)行。

    1.2.2 TB-Ab 檢查 采用膠體金免疫層析技術(shù)檢測患者血清、血漿或外周血中的結(jié)核分枝桿菌抗體IgG,各檢測步驟按照說明書嚴格規(guī)范執(zhí)行,加入標本及稀釋液,仔細觀察顯色情況,明確檢測結(jié)果。結(jié)果判斷標準:(1)反應孔中顯現(xiàn)紅色質(zhì)控線(C)和紅色檢測線(T)的為陽性,說明檢出結(jié)核分枝桿菌IgG 抗體;(2)反應孔中只顯現(xiàn)紅色質(zhì)控線(C)為陰性,說明未檢出結(jié)核分枝桿菌IgG 抗體;(3)反應孔中未顯現(xiàn)紅色質(zhì)控線(C),結(jié)果無效,表示操作失誤或試劑失效,應進行重復檢測。檢測試劑盒北京健乃喜生物技術(shù)有限公司。

    1.3 觀察指標 計算并比較T-SPOT.TB 試驗與TB-Ab 檢查診斷肺結(jié)核的靈敏度、特異度、診斷準確率、陽性預測值及陰性預測值。比較肺結(jié)核組中涂陽、涂陰結(jié)核患者與對照組T-SPOT.TB 試驗斑點計數(shù)。

    1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 20.0 軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析,計量資料用()表示,比較采用t 檢驗;計數(shù)資料以率(%)表示,比較采用χ2檢驗。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結(jié)果

    2.1 兩組一般資料 肺結(jié)核組男48 例,女32 例;平均年齡(52.12±5.01)歲。其中涂陽肺結(jié)核34例,涂陰肺結(jié)核46 例。對照組男27 例,女13 例;平均年齡(54.62±3.03)歲,其中肺部感染23 例,慢性支氣管炎6 例,慢性阻塞性肺疾病5 例,其他疾?。òǚ伟⒑粑莱鲅?、病毒性感冒等)6 例。兩組性別、年齡比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05),具有可比性。

    2.2 T-SPOT.TB 試驗診斷結(jié)果 120 例患者中陽性72 例,陰性48 例。其診斷的靈敏度87.50%(70/80)、特異度95.00%(38/40)、診斷準確率90.00%(108/120)、陽性預測值97.22%(70/72)、陰性預測值79.17%(38/48)。見表1。

    表1 T-SPOT.TB試驗診斷結(jié)果 例

    2.3 TB-Ab 檢查診斷結(jié)果 120 例患者中陽性62例,陰性58 例。其診斷的靈敏度67.50%(54/80)、特異度80.00%(32/40)、準確度71.67%(86/120)、陽性預測值87.10%(54/62)、陰性預測值55.17%(32/58)。見表2。

    表2 TB-Ab檢查診斷結(jié)果 例

    2.4 兩種檢查方法診斷效能比較 T-SPOT.TB 試驗診斷肺結(jié)核的靈敏度、特異度、診斷準確率、陽性預測值及陰性預測值均高于TB-Ab 檢查,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表3。

    2.5 涂陽、涂陰結(jié)核患者與對照組T-SPOT.TB 試驗斑點計數(shù)比較 涂陽、涂陰結(jié)核患者T-SPOT.TB試驗A、B 孔內(nèi)斑點計數(shù)均高于對照組,其中涂陽結(jié)核患者均高于涂陰患者,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表4。

    表3 兩種檢查方法診斷效能比較 %

    表4 涂陽、涂陰結(jié)核患者與對照組T-SPOT.TB試驗斑點計數(shù)比較[個,()]

    表4 涂陽、涂陰結(jié)核患者與對照組T-SPOT.TB試驗斑點計數(shù)比較[個,()]

    *與涂陽組比較,P<0.05;#與涂陰組比較,P<0.05。

    3 討論

    肺部是結(jié)核分枝桿菌感染人群最常累及的臟器之一,當機體免疫功能下降后,??蓪е路谓Y(jié)核[9-10]。世界衛(wèi)生組織于2016 年對全球確診為肺結(jié)核患者進行統(tǒng)計,總數(shù)約1 040 萬,而中國肺結(jié)核發(fā)病人數(shù)高居世界第三位[11]。而實際結(jié)核分枝感染人數(shù)遠超過該數(shù)值,大部分患者感染后無明顯臨床癥狀,導致漏診、誤診,嚴重影響肺結(jié)核的治療[12]。因此如何早期快速、準確的診斷肺結(jié)核,對該疾病的病情進展、預后意義重大。細菌學檢查仍是肺結(jié)核診斷的金標準,但結(jié)核菌涂片檢測靈敏度較低,易引起漏診,而結(jié)核菌培養(yǎng)周期需6~8 周,均較為局限[13]。而TB-Ab 檢查、T-SPOT.TB 試驗具有操作簡單、快速、可重復性等優(yōu)勢,目前均廣泛用于臨床,但兩者在臨床中選擇存在爭議[14]。本研究選取120 例研究對象進行分析,比較T-SPOT.TB 試驗與TB-Ab 檢查對肺結(jié)核的診斷價值,旨在為臨床選擇提供一定價值。

    T-SPOT.TB 試驗屬于細胞免疫檢查技術(shù),患者受結(jié)核桿菌感染后,機體外周T 淋巴細胞參與免疫應答,受結(jié)核桿菌特異抗原激活后,即轉(zhuǎn)化為效應T 淋巴細胞,可分泌γ-干擾素,而T-SPOT.TB 試驗則通過酶聯(lián)免疫斑點法進行斑點計數(shù)推測機體是否存在分泌γ-干擾素的效應T 淋巴細胞,以此診斷機體是否感染結(jié)核桿菌[15-16]。TB-Ab 檢查體液免疫檢查技術(shù),患者受結(jié)核桿菌感染后,機體將產(chǎn)生一組免疫球蛋白,而TB-Ab 檢查則通過免疫應答機制檢測機體抗結(jié)核免疫反應,以此診斷機體是否感染結(jié)核桿菌[17]。

    本研究結(jié)果顯示T-SPOT.TB 試驗診斷肺結(jié)核的靈敏度為87.50%、特異度為95.00%、診斷準確率為90.00%、陽性預測值為97.22%、陰性預測值為79.17%;TB-Ab 檢查診斷肺結(jié)核的靈敏度為67.50%、特異度為80.00%、診斷準確率為71.67%、陽性預測值為87.10%、陰性預測值為55.17%。說明T-SPOT.TB 試驗與TB-Ab 檢查對肺結(jié)核均具有較高的診斷價值,且T-SPOT.TB 試驗診斷效能更高,與文獻[18-19]結(jié)果基本一致。TB-Ab 檢查屬于體液免疫檢查技術(shù),機體感染結(jié)核分枝桿菌后,由于該細菌的胞壁上38 kD 蛋白抗原定位于菌壁質(zhì)膜上,可有效刺激淋巴B 細胞而產(chǎn)生相應的抗體。而TB-Ab 檢查則通過純化的結(jié)核分枝桿菌胞壁蛋白38 kD 抗原,檢測出相應的IgG 抗體判斷結(jié)果。但可由于患者既往感染過結(jié)核桿菌、機體存在免疫抗體造成假陽性,還可因為患者自身體質(zhì)導致假陰性,從而降低診斷靈敏度、特異度。T-SPOT.TB試驗屬于細胞免疫檢查技術(shù),機體遭結(jié)核分枝桿菌感染后,體內(nèi)免疫淋巴T 細胞則被激活,可產(chǎn)生一系列免疫反應,而T-SPOT.TB 試驗采用酶聯(lián)免疫斑點法可有效地檢測肺結(jié)核患者所含的活化的特異性T 淋巴細胞,可減少卡介苗接種、其他分枝桿菌所致的假陽性結(jié)果,對潛伏期、疑似結(jié)核患者的篩查價值更高。

    本研究結(jié)果顯示,涂陽肺結(jié)核患者T-SPOT.TB試驗A、B 孔斑點計數(shù)均高于涂陰肺結(jié)核患者與對照組(P<0.05),與向瑜等[20]研究結(jié)果基本一致。這一結(jié)果可能提示T-SPOT.TB 試驗斑點計數(shù)越多,則肺結(jié)核的活動程度可能越高,通過斑點計數(shù)可有助于區(qū)別肺結(jié)核的活動程度。

    綜上所述,與TB-Ab 檢查比較,T-SPOT.TB 試驗對肺結(jié)核的診斷價值更高;T-SPOT.TB 試驗斑點計數(shù)越多,則肺結(jié)核的活動程度可能越高,對臨床篩查提供一定理論依據(jù)。

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