茶炭疽病菌的生物學(xué)特性研究

劉 榮，周爽爽，韋玲冬，李永波

（黔南民族師范學(xué)院-生物科學(xué)與農(nóng)學(xué)院，貴州都勻 558000）

茶是貴州地區(qū)主要的經(jīng)濟(jì)作物之一，在貴州都勻、遵義、石阡等多地都有種植，隨著今年來溫室效應(yīng)影響，茶炭疽病菌的發(fā)生越發(fā)嚴(yán)重，是茶樹的主要病害之一，在福建、浙江等產(chǎn)茶區(qū)也發(fā)生較為嚴(yán)重。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，該病發(fā)生嚴(yán)重地區(qū)，茶樹會大量落葉，對來年春茶的產(chǎn)量帶來影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

單孢分離茶炭疽病菌病葉，獲得茶炭疽病菌菌株C6，用PDA試管斜面培養(yǎng)保存于4℃冰箱[1]。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 溫度對茶炭疽病菌生長的影響

設(shè)置溫度梯度時，采用10℃、15℃、20℃、25℃、30℃和35℃等6個溫度梯度。25℃培養(yǎng)到菌絲未長滿培養(yǎng)皿時，打取菌落邊緣菌絲[2]，用十字交叉法劃線，每個溫度5個重復(fù)，放置于25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每隔24h測一次菌落直徑，直至有生長最快的長滿皿。

1.2.2 pH對茶炭疽病菌生長的影響

用滅過菌KCl-HCl，Na2HPO4-NaOH的緩沖溶液將培養(yǎng)基調(diào)成4、5、6、7、8和9等6個pH梯度，方法同上1.2.1。

1.2.3 碳源對茶炭疽病菌生長的影響

以PDA培養(yǎng)基作為對照，以等質(zhì)量碳元素的蔗糖、乳糖、麥芽糖置換PDA中的等質(zhì)量碳源葡萄糖，配制成四種培養(yǎng)基[3]，方法同上1.2.1。

1.2.4 氮源對茶炭疽病菌生長的影響

以查氏培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，其中加入等質(zhì)量氮元素的氮源為牛肉膏、蛋白胨、硝酸銨、酵母浸膏，制成四種不同氮源培養(yǎng)基[3]，方法同上1.2.1。

1.2.5 光照對茶炭疽病菌生長的影響

③健康教育:選擇自制問卷方式對患者的相關(guān)病情和知識的認(rèn)知情況進(jìn)行調(diào)查,要結(jié)合調(diào)查的結(jié)果對患者開展相關(guān)干預(yù),根據(jù)患者的文化程度和性格特點(diǎn)等,為患者制定合乎患者自身實(shí)際的健康教育方案。靈活的選擇健康教育的形式,比如為患者進(jìn)行面對面的交流,幫助患者發(fā)放健康教育手冊,通過QQ和微信等方式推送,也可為患者選擇采用講座的形式進(jìn)行健康教育。健康教育的內(nèi)容,須使患者了解病情出現(xiàn)的機(jī)制,對于患者進(jìn)行管理方法、行為矯正等相關(guān)的宣教,要是患者明確對于鼻出血的相關(guān)預(yù)防措施,做好相關(guān)用藥指導(dǎo),還要積極構(gòu)建良好和諧的護(hù)患關(guān)系,以便于可以最大程度上促進(jìn)患者的康復(fù)和保健。

設(shè)置光照分別為全光照、全黑暗以及12h光暗交替條件下培養(yǎng)[4][5]。方法 1.2.1。

1.2.6 溫度對茶炭疽病菌孢子萌發(fā)的影響

用無菌水配制孢子懸浮液，濃度大約為104/ml，放置于10、15、20、25、30和35℃6個溫度條件培養(yǎng)，5個重復(fù)，觀察孢子的萌發(fā)，每2h觀察1次，每次取200ul制片選100個孢子，記錄萌發(fā)率[6][7]。

1.2.7 濕度對茶炭疽病菌孢子萌發(fā)的影響

以蒸餾水中孢子的萌發(fā)率為對照，分別控制為60%、70%、80%、90%、95%和100%等6個[6][7][8]，方法同1.2.6。

1.2.8 pH對茶炭疽病菌孢子萌發(fā)的影響

用Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液配制4、5、6、7、8和9等6個不同pH，用相應(yīng)的緩沖液制孢子懸浮液[6][7][9]，方法同1.2.6。

2 結(jié)果與分析

2.1 溫度對茶炭疽病菌生長的影響

5天后數(shù)據(jù)統(tǒng)計表明（圖1），炭疽病菌在6個溫度下均能夠生長，其在25℃生長速度最快，5天菌落平均直徑7.78cm；在10℃下生長最慢，5天僅1.34cm；表明其最適溫度為25℃。

圖1 不同溫度茶炭疽病菌生長速度

2.2 pH對茶炭疽病菌生長的影響

25℃恒溫培養(yǎng)，茶炭疽病菌在6個pH下均能夠生長（圖2），5天后數(shù)據(jù)統(tǒng)計表明，pH6時生長最快，5天菌落平均直徑7.32cm；在pH 7生長速度次之，5天菌落平均直徑為6.39cm；在pH5，pH8時生長也較好，表明pH6為其最適生長酸堿度。

圖2 不同pH茶炭疽病菌生長速度

2.3 碳源對茶炭疽病菌生長的影響

25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，5天后的菌落直徑（圖3），在PDA上長的最快，可以達(dá)到7.48cm，在PSA上次之，7.12cm，對乳糖的利用率最低；表明PDA和PSA都是比較適合其生長的培養(yǎng)基。

圖3 不同碳源茶炭疽病菌生長速度

2.4 氮源對茶炭疽病菌生長的影響

5天后數(shù)據(jù)統(tǒng)計表明（圖4），在酵母浸膏的培養(yǎng)基生長的菌落平均直徑為6.68 cm，生長速度最快；牛肉膏的培養(yǎng)基6.26 cm，次之；兩種沒有顯著差異，在以硝酸銨的培養(yǎng)基上生長最慢，為4.42 cm；其它三種氮源培養(yǎng)基生長相比差異顯著。表明酵母浸膏和牛肉膏都是比較適合的氮源。

圖4 不同氮源茶炭疽病菌生長速度

2.5 光照條件對茶炭疽病菌生長的影響

三組光照試驗(yàn)，生長速度差異不顯著，表明光照對其生長沒有影響。

2.6 溫度對茶炭疽病菌孢子萌發(fā)的影響

茶炭疽病菌孢子在6個溫度均能萌發(fā)（圖5），觀察計數(shù)后發(fā)現(xiàn)25℃萌發(fā)最多，萌發(fā)率為82%；而35℃萌發(fā)率最低，僅10%；20℃和30℃萌發(fā)率較高，分別為70%和67%，根據(jù)數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析孢子在這兩個溫度下的萌發(fā)率無明顯差異；10℃萌發(fā)率較低才22%。這些統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明25℃為其萌發(fā)的最適溫度，且茶炭疽病菌孢子的萌發(fā)率低溫略高于高溫。

圖5 不同溫度下茶炭疽病菌孢子的萌發(fā)率

2.7 濕度對茶炭疽病菌孢子萌發(fā)的影響

試驗(yàn)結(jié)果，在試驗(yàn)的空氣相對濕度中，茶炭疽病菌孢子僅能夠在空氣濕度為95%或以上才能萌發(fā)，且萌發(fā)率較低，12h后，空氣濕度為95%萌發(fā)率僅6%，空氣濕度為100%萌發(fā)率15%；但其在水中萌發(fā)率可達(dá)80%，表明濕度對茶炭疽病菌孢子萌發(fā)的影響極大。

2.8 pH對茶炭疽病菌孢子萌發(fā)的影響

茶炭疽病菌的孢子在6個pH下均能萌發(fā)（圖6），數(shù)據(jù)統(tǒng)計表明，在pH6時萌發(fā)率最高，可以達(dá)到95%；pH7時次之，可達(dá)到92%；在pH5和pH8時，孢子的萌發(fā)率也較高，均超過80%；表明中性偏微性條件孢子萌發(fā)的很好。

圖6 不同pH下茶炭疽病菌孢子的萌發(fā)率

3 結(jié)論與討論

炭疽病為植物上一類重要病害，在茶、蘋果、辣椒等植物上均有報道，但由茶炭疽菌引起的茶炭疽病，該病原菌菌絲生長受碳源、氮源、pH和溫度等的影響，該菌最適碳源和氮源培養(yǎng)基分別為PDA和酵母浸膏培養(yǎng)基；茶炭疽病在25℃生長最快，表明25℃為其最適生長溫度；在pH6生長最快，表明pH6為其最適生長酸堿度；其生長以及孢子的萌發(fā)均不受光照條件或黑暗條件的影響。其孢子萌發(fā)率最高的溫度為25℃，為其最適萌發(fā)溫度，且孢子萌發(fā)在低溫比偏高溫的萌發(fā)率高；但孢子對濕度要求極高，需在空氣濕度達(dá)到95%以上才能萌發(fā)，在液態(tài)水中萌發(fā)率較高；說明雨季適合茶炭疽病菌孢子的萌發(fā)；中性至微堿性或微酸性條件下有較高的萌發(fā)率；根據(jù)對茶炭疽菌生物學(xué)特性研究結(jié)果在綜合防治中有參考價值，研究表明在選擇茶園時應(yīng)該選擇疏松肥沃、排水良好的土壤，避免排水不暢造成茶園濕度過大有利于茶炭疽病病菌孢子的萌發(fā)，從而加重病害的發(fā)生為害程度；另外，在茶樹的種植過程中要避免過度密植，讓茶樹間有合適的通風(fēng)透光條件，降低濕度；第三，雖然酸性條件有利于孢子萌發(fā)，但不利于菌落生長，特別不利于產(chǎn)孢，可能酸性土壤種植茶樹有利于控制炭疽病的發(fā)生。本研究對茶炭疽病病原菌的生長以及孢子萌發(fā)等生物學(xué)特性進(jìn)行了研究，為推測其發(fā)生、流行規(guī)律以及防治提供了一定的理論依據(jù)，但該病具體的田間防治方法還需進(jìn)一步研究。