一例應(yīng)用腺苷核苷類(lèi)似物GS-441524對(duì)貓傳染性腹膜炎進(jìn)行抗病毒治療分析

王麗新吳豐劉海超胡格陳大鵬

(1.北京農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院，北京 102200；2.北京天空之城寵物醫(yī)院，北京 100071)

貓傳染性腹膜炎(FIP)是一種致命疾病，發(fā)生于世界各地的家庭飼養(yǎng)及野生動(dòng)物。FIP是由貓冠狀病毒(FCoV)特異性位點(diǎn)突變而來(lái)的，貓冠狀病毒(FCoV)發(fā)生在2個(gè)不同的病理類(lèi)型，可以區(qū)分其生物學(xué)行為，但不是其形態(tài)。一些作者[1,3,4]對(duì)這2種病理類(lèi)型使用不同的名稱(chēng)，盡管二者都屬于同一病毒物種。貓腸冠狀病毒(FECV)在多貓環(huán)境中非常普遍，并且具有高度的傳染性——幾乎100%的貓從脫落的貓的糞便中接觸到FECV就會(huì)受到感染。然而感染大多是無(wú)癥狀的，或只引起輕度和短暫的腹瀉[2]。相反，貓傳染性腹膜炎病毒(FIPV)不是通過(guò)糞便—口腔途徑傳染的，而是由一小部分感染貓的無(wú)毒性FECV突變而產(chǎn)生的，然后導(dǎo)致致命疾病貓傳染性腹膜炎(FIP)[5-7]。臨床癥狀有厭食癥、嗜睡、體重減輕、發(fā)熱等，眼部和神經(jīng)體征，如步態(tài)異?；蚓癞惓?，都是非特異性[2,8,9]。目前尚不清楚哪些確切的基因攜帶導(dǎo)致FIPV發(fā)展的突變。由于使用新藥物治療貓的FIP有希望的結(jié)果已經(jīng)發(fā)表，GS-441524是能夠直接阻斷病毒的復(fù)制，來(lái)達(dá)到治療目的。目前這一類(lèi)藥物在市場(chǎng)上未商品化，須向國(guó)外進(jìn)口，國(guó)內(nèi)對(duì)于這個(gè)藥物的研究暫時(shí)空白，據(jù)調(diào)查，在臨床上此藥物價(jià)格昂貴，難以大量應(yīng)用在臨床中，主人在沒(méi)有寵物保險(xiǎn)下很難付得起費(fèi)用。對(duì)此，只向此藥物的臨床結(jié)果做研究，為以后研究GS-441524藥物在臨床試驗(yàn)中奠定基礎(chǔ)，也希望能夠使費(fèi)用降低，普遍應(yīng)用于臨床，挽救貓傳染性腹膜炎的疾病。

1 案例情況

喬巴，美國(guó)短毛貓，2個(gè)月，雄性，未絕育，主人從貓舍購(gòu)買(mǎi)到家中飼養(yǎng)28d，家中無(wú)其它寵物，臨床檢查食欲不振、嗜睡、眼睛游離，被毛色澤光亮，脊柱明顯，體溫39.5℃，體重1.3kg，腹部觸診波動(dòng)感明顯，腹圍增大，疑似貓傳染性腹膜炎，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢查。

2 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果與診斷

2.1 血常規(guī)及血液生化

血常規(guī)結(jié)果見(jiàn)表1；血液生化指標(biāo)結(jié)果見(jiàn)表2。由表1可見(jiàn)，喬巴淋巴細(xì)胞數(shù)參考值范圍，血紅蛋白、平均血紅蛋白濃度、紅細(xì)胞、紅細(xì)胞壓積明顯低于參考值，該結(jié)果有貧血的現(xiàn)象，可能跟最近食欲不佳、伴有病毒感染導(dǎo)致。由表2可見(jiàn)，總蛋白(TP)偏高，白球比A/G=0.5<0.8，這一指標(biāo)有效判定患有FIP風(fēng)險(xiǎn)較高，進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室RT-PCR檢測(cè)。

表1 血常規(guī)檢查報(bào)告

表2 血液生化檢查報(bào)告

2.2 腹部B超超聲波檢查與腹水穿刺

腹部超聲顯示(見(jiàn)圖1)，腹部回聲增強(qiáng)，腹水大量，未見(jiàn)腹腔腸系淋巴結(jié)明顯增大；膀胱內(nèi)未見(jiàn)明顯異常影像；左腎與右腎表面不光滑，皮質(zhì)回聲不均，髓質(zhì)環(huán)征，腎周有不均質(zhì)回聲結(jié)構(gòu)。均未見(jiàn)腎盂積液；肝臟回聲均勻，膽囊內(nèi)未見(jiàn)明顯異?；芈暎黄⑴K回質(zhì)均勻。

圖1 腹部超聲影像

腹水穿刺出來(lái)的液體呈黃綠色粘稠狀(見(jiàn)圖2)，進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢查，呈大量單核巨噬細(xì)胞，無(wú)其它細(xì)胞，李凡他試驗(yàn)結(jié)果呈陽(yáng)性(見(jiàn)圖3)。

圖2 腹水 圖3 李凡他試驗(yàn)

2.3 RT-PCR檢測(cè)

RT-PCR檢測(cè)(見(jiàn)圖4、圖5)出含有貓冠狀病毒，經(jīng)過(guò)序列對(duì)比，未發(fā)現(xiàn)明顯存在的特異性位點(diǎn)突變，患有貓傳染性腹膜炎(FIP)風(fēng)險(xiǎn)一般。

圖4 貓冠狀病毒

圖5 貓傳染性腹膜

綜合以上結(jié)果診斷，A/G比小于0.8，對(duì)診斷貓傳染性腹膜炎有很大指導(dǎo)作用，B超檢測(cè)含有腹水，淋巴結(jié)腫大，RT-PCR檢測(cè)出貓冠狀病毒。

3 治療方案

3.1 用藥療程

由于喬巴生化檢測(cè)總蛋白低且患有貧血癥狀，先進(jìn)行輸液療法，主人每天帶過(guò)來(lái)輸液，在進(jìn)行輸液4d后，喬巴精神好轉(zhuǎn)，食欲增強(qiáng)，4d后結(jié)束輸液，并在此期間使用核苷類(lèi)似物GS-441制劑，按4mg·kg-1給藥，每天持續(xù)給藥，連續(xù)12周，前4周每周檢查1次，后續(xù)癥狀減緩改為每月檢查1次，觀察用藥療效。(無(wú)明顯異常)在給藥期間患貓(除了前4d靜脈滴注)均在家中注射藥物。

3.2 用藥療效對(duì)比

3.2.1 患貓?bào)w重變化

從連續(xù)給藥之后，前4周每周稱(chēng)重1次，后續(xù)癥狀減緩改為每月稱(chēng)重，表3為采集的體重變化，由于為幼貓，時(shí)間長(zhǎng)些才能夠看出來(lái)體重的增加，從就診的1.3kg增至2.8kg，并且腹部明顯縮小，有緊實(shí)感。

表3 患貓用藥后每周、月平均體重的變化

3.2.2 患貓每次復(fù)查血液的血常規(guī)及生化指標(biāo)

連續(xù)給藥之后，每次血液血常規(guī)復(fù)查的結(jié)果，由表4可見(jiàn)，白細(xì)胞總數(shù)在逐漸下降恢復(fù)至正常范圍內(nèi)，中性粒細(xì)胞數(shù)也有所下降，到第3周后明顯趨于正常水平，平均血紅蛋白濃度持續(xù)增高，紅細(xì)胞在用藥之后恢復(fù)到正常水平。血液中的細(xì)胞數(shù)在連續(xù)給藥12周趨于正常范圍。

表4 患貓用藥后每周、月血常規(guī)檢查報(bào)告

續(xù)表 患貓用藥后每周、月血常規(guī)檢查報(bào)告

連續(xù)給藥后，每次復(fù)查血液生化的結(jié)果，由表5可見(jiàn)，主要可見(jiàn)白球比逐漸從0.5上升至正常水平，其它指標(biāo)均在正常范圍。

表5 患貓用藥后每周、月血液生化檢查報(bào)告

3.2.3 患貓每次復(fù)查B超檢查結(jié)果

從表6結(jié)果可見(jiàn)，患貓腹水逐漸減少，腹膜回聲逐漸恢復(fù)正常，淋巴結(jié)腫大恢復(fù)正常。

表6 患貓每月B超檢查結(jié)果

4 討論

貓患有傳染性腹膜炎時(shí)，常有2種類(lèi)型，干性和濕性，患有干性傳染性腹膜炎的貓?jiān)谠\斷上較濕性困難，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)只能采取患貓的糞便進(jìn)行PCR檢測(cè)，但這樣的檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確率只有5%可能性，確診干性FIP的貓，臨床特征表現(xiàn)為前期暴瘦，食欲并不減退，嗜睡，但體重仍然沒(méi)有增加，腹腔沒(méi)有積液，血液檢查會(huì)出現(xiàn)高球蛋白癥，淋巴數(shù)和粒細(xì)胞數(shù)減少，可能存在氮質(zhì)血癥(在沒(méi)有積液的貓中更常見(jiàn))或肝臟酶活性增加[10]?；加袧裥訤IP的貓，主要特征腹圍增大，食欲不振，嗜睡，血液常伴有貧血，白球比<0.8，低白蛋白血癥(在有積液的貓中更常見(jiàn))、高膽紅素血癥(在有積液的貓中更常見(jiàn))，以及根據(jù)器官受累情況，RT-PCR顯示陽(yáng)性，李凡他實(shí)驗(yàn)顯示陽(yáng)性[11]。在本次病例中，患貓沒(méi)有表現(xiàn)出高膽紅素癥，肝臟指標(biāo)正常，其它指標(biāo)均表現(xiàn)出患有濕性腹膜炎的風(fēng)險(xiǎn)，確診為貓傳染性腹膜炎。

在之前很長(zhǎng)一段時(shí)間對(duì)于這種疾病并無(wú)任何藥物可以緩解并救治，文獻(xiàn)中通常為如何確診、如何檢查，對(duì)于治療無(wú)任何效果，近2a出現(xiàn)2種藥物，3C類(lèi)蛋白酶抑制劑GC376和核苷類(lèi)似物GS-441524在治療貓傳染性腹膜炎中有顯著療效[12-14]。國(guó)外學(xué)者研究利用GS-441524藥物治療貓傳染性腹膜炎的顯示有神經(jīng)癥狀的療效[15]，對(duì)4例神經(jīng)FIP的研究采用5mg·kg-1的劑量治療，治療時(shí)間和隨后的劑量根據(jù)臨床反應(yīng)增加。劑量為5mg·kg-1，SC，1次/d，持續(xù)12～14周，足以治療2例受影響較輕的神經(jīng)FIP病例。但在臨床受影響最嚴(yán)重的貓中，以5mg·kg-1劑量重復(fù)療程只會(huì)改善臨床癥狀，一旦停止治療，臨床癥狀就會(huì)迅速消退。這種治療失敗促使病例4的劑量從5mg·kg-1逐步上升到10mg·kg-1。體外50%有效濃度(EC50)的GS-441524，以防止病毒細(xì)胞病變的作用，在0.8μM，完全抑制病毒復(fù)制在10μM和部分抑制在1μM[15]?？梢?jiàn)GS-441524這種藥物臨床上還是可以應(yīng)用，這將在治療FIP中邁出重大一步。

本病例在這12周里，只有在前4d進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)液補(bǔ)充輸液，除維持肝臟指標(biāo)的口服藥物之外未使用其它任何生物制劑，只注射了GS-441524，在第2周就明顯控制住貧血，腹水減少，各項(xiàng)指標(biāo)趨于正常，平日飲食也是高蛋白食物，此次效果明顯可見(jiàn)，但用藥時(shí)長(zhǎng)以及停藥之后如何護(hù)理避免復(fù)發(fā)還有待進(jìn)一步研究。