肝癌干細(xì)胞抗原致敏的DC-CTL 對肝癌的抑制作用探討

黃嵐

（武漢平安好醫(yī)醫(yī)學(xué)檢驗實驗室 湖北 武漢 430000）

在中國，原發(fā)性肝細(xì)胞癌的發(fā)生率較高。其特點為容易轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)、發(fā)病隱匿、預(yù)后差等等。相關(guān)文獻(xiàn)指出[1]，癌瘤的發(fā)生發(fā)展和疾病耐藥、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移主要因素為病患體內(nèi)有癌瘤干細(xì)胞（CSCs）。雖然說這種細(xì)胞數(shù)目極少，但難以全面消滅。結(jié)合實際情況，本文全面探究肝癌細(xì)胞抗原致敏DC-CTL 針對于肝癌抑制作用情況，現(xiàn)將具體結(jié)果報告如下。

1.資料與方法

1.1 試驗主要試劑以及儀器設(shè)備

實驗使用人AB 血清（Gibco 公司生產(chǎn)）、DMEM 細(xì)胞培養(yǎng)基、GTT-551、細(xì)胞因子白細(xì)胞介素、腫瘤壞死因子（美國Peprotech公司生產(chǎn)）、抗人CD3 單克隆抗體、CD8 單克隆抗體、CD133-PE（美國BD 公司生產(chǎn)）、流式細(xì)胞儀（美國貝克曼公司生產(chǎn)）、自動化磁性細(xì)胞設(shè)備（德國Miltenyi 公司生產(chǎn)）、磁性細(xì)胞分選設(shè)備、BABL/c 實驗小鼠30 只（由上海斯萊克動物實驗有限公司提供），動物周齡為4.0 ～5.0 周，體重為18.0 ～20.0g。

1.2 實驗方法

實施CSCs 分選工作。取用經(jīng)診斷明確為肝細(xì)胞癌者的肝臟組織，樣本來源以及時間為2018 年1 月—5 月來我院就診的50例肝癌疾病患者。利用0.9%氯化鈉溶液加入劑量為100U/ml 慶大霉素完成清洗。針對于組織切塊處理。在此其中加入胰蛋白酶液體。將其放到孵化箱中完成孵化。消化，時間為4h。過濾。制備成單細(xì)胞懸液。加入0.9%氯化鈉溶液離心處理。使用高糖培養(yǎng)基加入AB 血清，將其接種到孔板內(nèi)。就此完成了細(xì)胞分選工作，就此制備出了單細(xì)胞懸液。其能夠和CD133 抗體磁珠實現(xiàn)交聯(lián)，在此之后分選。收集好相關(guān)細(xì)胞，制備成為單細(xì)胞懸液，等待使用。使用相關(guān)設(shè)備對CSCs 開展測定工作。取得CSCs 和肝癌細(xì)胞抗原。有效培養(yǎng)CSCs 以及肝癌細(xì)胞抗原致敏的DC-CTL。將30 只小鼠分為CSCs 抗原致敏小組、肝癌細(xì)胞抗原致敏組以及0.9%氯化鈉溶液組。每組10 只。分析結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo)

抑瘤率=（對照組腫瘤重量均值-實驗組腫瘤質(zhì)量均值）/對照組腫瘤重量均值×100.00%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

本實驗使用SPSS20.0 專業(yè)統(tǒng)計學(xué)軟件，對數(shù)據(jù)內(nèi)的相關(guān)數(shù)據(jù)進行t檢驗以及單因素方差分析。當(dāng)P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 抗原致敏DC-CTL 針對于實驗裸鼠肝癌抑制效果

和0.9%氯化鈉溶液組相較而言，CSCs 抗原致敏小組以及肝癌細(xì)胞抗原致敏組針對于腫瘤抑制效用顯著。CSCs 抗原致敏小組癌瘤抑制率比肝癌細(xì)胞抗原致敏組高，P＜0.05，詳細(xì)見表1。

表1 抗原致敏DC-CTL 針對于實驗裸鼠肝癌抑制效果

2.2 抗原致敏DC 培養(yǎng)情況

當(dāng)DC 培養(yǎng)到9d 時，于顯微鏡下完成觀察。DC 表現(xiàn)為貼壁生長，且呈現(xiàn)為圓形。外表存在樹突狀表現(xiàn)，使用相關(guān)設(shè)備，對于DC 表面標(biāo)記物情況進行測定，用于表明該物質(zhì)為成熟的化樹突狀細(xì)胞。

2.3 流式細(xì)胞設(shè)備測定CSCs

經(jīng)檢測，CD133 表達(dá)率為85%。證明分選成功。

2.4 CIK 培養(yǎng)工作

在開展擴增以前，實驗樣本的CD3+/CD8+水平具體為48.0%。當(dāng)誘導(dǎo)擴增到9d 時，CIK 內(nèi)的CD3+/CD8+達(dá)85.0%。細(xì)胞數(shù)目隨著誘導(dǎo)時間增加呈現(xiàn)出擴增勢態(tài)。

3.討論

在機體對抗腫瘤機制中，細(xì)胞免疫必不可少。細(xì)胞免疫為T細(xì)胞介導(dǎo)下，細(xì)胞免疫中的CD3+/CD8+T 細(xì)胞[2]。發(fā)揮識別以及消除癌瘤細(xì)胞效用。而DC 則為機體中能力最高的是抗原遞呈細(xì)胞，這種細(xì)胞可以體現(xiàn)出激活T 細(xì)胞的作用。利用此法針對具有抗原特異性的CTL 加以誘導(dǎo)處理，在這種情況下，機體擁有了抗腫瘤的免疫能力。在對抗原進行致敏處理之后，DC 細(xì)胞增殖活性和與抗原識別能力均有所增加[3]。和CTL 一并培養(yǎng)之后，細(xì)胞間相互作用能夠推進上述兩者增殖成熟，可令CTL 抗瘤效用增加，加大輸注細(xì)胞與共刺激分子呈遞抗原特異性，加速樹突細(xì)胞分泌IL-2 水平量。CD133 屬于CSCs 的經(jīng)典式標(biāo)記物質(zhì)。本文中，利用科學(xué)有效的方式篩選出了人CSCs，成功獲取抗原物質(zhì)。并在病患外周血中對單體核細(xì)胞完成了分離、擴增和誘導(dǎo)，形成CSCs 抗原致敏DC 和CIK[4]。同時把CSCs 看做是靶標(biāo)。經(jīng)開展MTT實驗的方式，有效觀察自身靶向性，有效消除CSCs[5]。在CIL 內(nèi)含有高水平CTL。

本次實驗研究結(jié)果證實：DC-CTL 針對于肝臟惡性腫瘤細(xì)胞能夠發(fā)揮出殺傷效用，CSCs 抗原致敏CSCs 清除治療，意義重大。