添加不同比例的抗菌肽替代飼用抗生素對肉雞生長性能、血清免疫指標(biāo)及腸道菌群的影響

吳 東，楊家軍，吳義景，周 芬，夏倫志，江喜春，陳麗園，朱洪龍

(安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所//畜禽產(chǎn)品安全工程安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥 230031)

抗菌肽廣泛分布于自然界的動(dòng)物、植物和微生物當(dāng)中，是帶有正電荷的小分子多肽[1]。迄今為止，已經(jīng)分離鑒定出的抗菌肽多達(dá)2 800余種，它們通常由10～50個(gè)氨基酸組成[2]，近年來，抗菌肽因其作用機(jī)制獨(dú)特，已經(jīng)作為新型抗微生物藥物被廣泛應(yīng)用到家禽生產(chǎn)中。在肉雞養(yǎng)殖過程中，抗菌肽不僅對雞的生長性能、抗病能力和免疫發(fā)育等具有較好的促進(jìn)作用[3]，還可以維護(hù)腸道內(nèi)環(huán)境的動(dòng)態(tài)平衡，調(diào)節(jié)腸道的生理機(jī)能[4]。本試驗(yàn)研究抗菌肽替代飼用抗生素對肉雞生長性能、血清免疫指標(biāo)和腸道菌群的影響，為選擇適宜的飼用抗生素替代物提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

15%鹽霉素、50%吉他霉素預(yù)混劑由安徽某飼料有限公司提供，抗菌肽由河南某有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與分組

試驗(yàn)選用0日齡青腳麻雞360只，公母各半，隨機(jī)分為3組：對照組和試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組，每個(gè)組120只，設(shè)4個(gè)重復(fù)(圈)，每個(gè)重復(fù)30只(公母各半)；試驗(yàn)期60 d。試驗(yàn)分2個(gè)階段：0～21d階段和22～60 d階段；0～21 d階段，對照組在基礎(chǔ)日糧中添加15%鹽霉素450 g/t+50%吉他霉素100 g/t，試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組分別在基礎(chǔ)日糧中添加抗菌肽100 g/t、抗菌肽200 g/t；22～60 d階段，對照組在基礎(chǔ)日糧中添加50%吉他霉素20 g/t，試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組分別在基礎(chǔ)日糧中添加抗菌肽100 g/t、抗菌肽200 g/t。

1.3 試驗(yàn)日糧及飼養(yǎng)管理

本試驗(yàn)于2019-05-07在安徽省農(nóng)科院畜牧所東山試驗(yàn)?zāi)翀鲞M(jìn)行。試驗(yàn)每個(gè)重復(fù)單圈飼養(yǎng)，試驗(yàn)期間自由采食粉料，自由飲水,按常規(guī)程序進(jìn)行免疫和雞舍消毒。試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.4 測定指標(biāo)及方法

1.4.1生長性能指標(biāo)測定

試驗(yàn)雞在0日齡、21日齡和試驗(yàn)結(jié)束時(shí)進(jìn)行空腹稱量各重復(fù)雞體重和各重復(fù)飼料消耗量，統(tǒng)計(jì)各組平均日增重、日采食量和料增重比。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

1.4.2血清免疫指標(biāo)測定

測定于試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每重復(fù)選取2只(1公1母)體重相近的雞，翅靜脈采血，3 000 r/min離心15 min，分裝血清，于-20℃保存?zhèn)溆?；進(jìn)行血清中免疫球蛋白IgA、IgG和IgM含量測定。

1.4.3腸道菌群的測定

每重復(fù)選取2只雞(1公1母)，于無菌操作臺(tái)中取腸道內(nèi)容物0.5 g于10 ml的滅菌離心管中，加入無菌生理鹽水4.5 ml，用漩渦混合儀混勻后進(jìn)行10-5～10-9倍比稀釋，每個(gè)稀釋度3個(gè)重復(fù)，乳酸桿菌和大腸桿菌分別在MRS瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)基購自杭州天和微生物試劑有限公司。細(xì)菌計(jì)數(shù)采用平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，最終以每克腸道內(nèi)容物中細(xì)菌個(gè)數(shù)的對數(shù)lg(CFU/g)表示。

1.5 數(shù)據(jù)分析處理

利用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，Duncan氏法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同比例的抗菌肽替代飼用抗生素對肉雞生長性能的影響

由表2可知,與抗生素組相比，0～21日齡,肉雞日增重和料增重比試驗(yàn)各組間差異都不顯著(P>0.05)。22～60日齡，與對照組相比，日增重試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組分別增加了10.88%(P<0.05)、7.22%(P<0.05);料增重比試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組分別降低了2.60%(P>0.05)、8.18%(P<0.05)。試驗(yàn)全期，與對照組相比，日增重差異不顯著(P>0.05)；料增重比試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組分別降低了1.66%(P>0.05)、7.05%(P<0.05)。

表2 不同比例的抗菌肽替代飼用抗生素對肉雞生長性能的影響

2.2 不同比例的抗菌肽替代飼用抗生素對肉雞血清免疫指標(biāo)的影響

由表3可知，與對照組相比，肉雞血清中IgA含量試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組分別提高了72.15%(P<0.01)、70.25%(P<0.01)；肉雞血清中IgG含量試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組分別提高了168.25%(P<0.05)、114.56%(P<0.05)；肉雞血清中IgM含量試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組和對照組之間差異不顯著(P>0.05)。

表3 不同比例的抗菌肽替代飼用抗生素對肉雞血清免疫指標(biāo)的影響

2.3 不同比例的抗菌肽替代飼用抗生素對肉雞腸道菌群的影響

由表4可知，肉雞腸道中大腸桿菌含量試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組與對照組差異不顯著(P>0.05)；肉雞腸道中乳酸桿菌含量試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組比對照組分別增加9.11%(P<0.05)、0.22%(P>0.05)。

表4 不同比例的抗菌肽替代飼用抗生素對肉雞腸道菌群的影響

3 討論

3.1 不同比例的抗菌肽替代飼用抗生素對肉雞生長性能的影響

穆洋等[5]將昆蟲源桑蠶抗菌肽、昆蟲源天蠶抗菌肽和動(dòng)物源與昆蟲源雜合抗菌肽3種不同的抗菌肽添加到1日齡AA肉雞的日糧中，結(jié)果顯示，與空白對照組和抗生素組相比，添加3種抗菌肽的試驗(yàn)組肉雞的平均日增重顯著提高、料重比顯著降低。孫全友等[6]研究結(jié)果表明,飼糧中添加200 mg/kg抗菌肽，與對照組相比42日齡肉仔雞平均日增重提高7.96%(P<0.05)，料肉比降低5.85%(P<0.05)。劉莉如等[7]研究表明，飼糧中添加350 mg/kg抗菌肽可以顯著提高海蘭褐蛋用仔公雞的生產(chǎn)性能。Bao等[8]，李波等[9]，姚遠(yuǎn)等[10]研究表明，抗菌肽可以提高肉雞生長性能。本試驗(yàn)中,與抗生素組相比，添加100～200 g/t抗菌肽組22～60 d肉雞日增重都顯著增加，料增重比都有一定程度的降低；0～60 d日增重、料增重比都有一定程度的改善，這與上述報(bào)道基本一致。說明抗菌肽可以提高肉雞生長性能。

3.2 不同比例的抗菌肽替代飼用抗生素對肉雞血清免疫指標(biāo)的影響

Bao等[11]在羅曼褐雞的飲用水中添加雞腸道抗菌肽CIAMP(1 μg/ml)，結(jié)果顯示，試驗(yàn)組雞的血漿中IgG和IgM的含量顯著升高。呂尊周等[12]將480只30周齡海賽克斯褐殼蛋雞隨機(jī)分為4組，在3組試驗(yàn)組日糧中分別添加200、400、600 mg/kg枯草芽孢桿菌天然抗菌肽，為期4周，發(fā)現(xiàn)3組試驗(yàn)組血清中的免疫球蛋白IgA、IgG和IgM以及補(bǔ)體C3的含量均有不同程度的提高。本試驗(yàn)中,與抗生素組相比，添加抗菌肽使肉雞血清中IgA含量極顯著提高，IgG含量顯著提高。這與上述報(bào)道基本一致。說明在動(dòng)物機(jī)體內(nèi)，抗菌肽不僅可以促進(jìn)免疫器官的發(fā)育，還可通過激活免疫細(xì)胞、招募免疫因子和調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)等多種方式增強(qiáng)機(jī)體先天性免疫和獲得性免疫，增強(qiáng)機(jī)體抵御病原感染的能力[13-15]。

3.3 不同比例的抗菌肽替代飼用抗生素對肉雞腸道菌群的影響

腸道微生物菌群是禽類消化系統(tǒng)的一個(gè)重要組成部分，大腸桿菌是動(dòng)物腸道的正常菌群，但其中有一些菌株是致病菌，含量過高時(shí)往往引起動(dòng)物疾病。而乳酸桿菌能夠增強(qiáng)動(dòng)物體內(nèi)的免疫力，是動(dòng)物體內(nèi)的有益菌，它們的生長對有害菌在空間、營養(yǎng)上又有屏蔽競爭作用，同樣抑制有害菌在腸道的定植和生長。動(dòng)物腸道內(nèi)充滿正常菌群和致病菌群，它們之間的動(dòng)態(tài)平衡影響著宿主免疫系統(tǒng)活動(dòng)及生長發(fā)育等正常生理功能[16]。姚遠(yuǎn)等[10]給固始雞飼喂添加了天蠶素抗菌肽的飼料，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，飼料中添加500 mg/kg的天蠶素能夠有效降低雞腸道內(nèi)大腸桿菌和沙門菌數(shù)量，并提高乳酸菌數(shù)量。劉莉如等[17]在海蘭褐蛋用仔公雞的日糧中添加不同劑量的天蠶素抗菌肽，42 d后發(fā)現(xiàn)，不同水平的抗菌肽均能有效降低腸道致病菌的數(shù)量，同時(shí)高劑量抗菌肽組能顯著增加腸道益生菌雙歧桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量，以350 mg/kg劑量為佳。Choi等[4]的研究結(jié)果表明,飼糧中添加60 mg/kg抗菌肽可以顯著抑制肉仔雞腸道中的有害腸道微生物數(shù)量。孫全友等[18]研究表明,抗菌肽能顯著降低肉雞盲腸中大腸桿菌和沙門菌的含量和極顯著提高乳酸桿菌和雙歧桿菌的含量；本試驗(yàn)中肉雞腸道中大腸桿菌含量添加100～200 g/t抗菌肽與抗生素組相比差異不顯著，與上述報(bào)道不一致，這可能與添加的種類和劑量不同有關(guān)；添加100 g/t抗菌肽肉雞腸道中乳酸桿菌含量比添加抗生素組顯著增加，這與上述報(bào)道基本一致。腸道內(nèi)的乳酸桿菌能夠增強(qiáng)宿主的免疫能力，產(chǎn)生的乳酸可以降低腸道內(nèi)的pH值，阻止有害菌對腸道的入侵，進(jìn)一步改善雞腸道的微生態(tài)環(huán)境，有益于雞的健康，進(jìn)而提高肉雞的生長性能。

4 結(jié)論

肉雞日糧中添加100 g/t或200 g/t抗菌肽替代抗生素后，其生長性能、血清免疫指標(biāo)及腸道菌群等性能指標(biāo)都要一定程度的改善。