石墨化炭黑/氨基（GCB/NH2）復(fù)合SPE小柱在食用林產(chǎn)品農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用

曾永明　陳松武　蒙芳慧　馮沁雄　蔣貴友

【摘 要】農(nóng)藥殘留檢測(cè)前處理的相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)分析方法均采用有機(jī)溶劑提取、弗羅里矽柱（Florisil）凈化。文章采用正己烷+丙酮提取，石墨化炭黑/氨基（GCB/NH2）復(fù)合SPE小柱富集、凈化，建立了食用林產(chǎn)品中有機(jī)氯類(lèi)、菊酯類(lèi)多殘留農(nóng)藥的檢測(cè)前處理方法。經(jīng)該樣品前處理方法進(jìn)行樣品前處理，6種有機(jī)氯類(lèi)、菊酯類(lèi)農(nóng)藥的平均回收率在81%～98%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD在0.5%～4.5%，檢測(cè)中沒(méi)有色譜峰干擾情況，回收率高，重復(fù)性好。

【關(guān)鍵詞】食用林產(chǎn)品;固相萃取;檢測(cè);富集;凈化

【中圖分類(lèi)號(hào)】TS207.53 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1674-0688（2020）07-0098-03

廣西食用林面積達(dá)275萬(wàn)hm2，約占全區(qū)森林總面積的16%，據(jù)統(tǒng)計(jì)2017年全區(qū)食用林產(chǎn)品產(chǎn)量約1 530萬(wàn)t，產(chǎn)值近1 400億元[1]，可見(jiàn)，廣西的食用林產(chǎn)品產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有相當(dāng)規(guī)模，已經(jīng)成為我國(guó)食用林產(chǎn)品主產(chǎn)區(qū)。廣西特色食用林產(chǎn)品主要有板栗、核桃、竹筍、肉桂、八角、木耳、香菇、銀杏、油茶等。在特優(yōu)食用林種植和生長(zhǎng)過(guò)程中，其病蟲(chóng)害的防治主要依賴(lài)于化學(xué)農(nóng)藥，在有效控制病蟲(chóng)害的同時(shí)，也在一定程度上造成了生態(tài)環(huán)境的污染，農(nóng)藥殘留問(wèn)題較為突出。目前，食用林產(chǎn)品質(zhì)量安全問(wèn)題日益受到政府、社會(huì)的密切關(guān)注和高度重視，食品安全問(wèn)題是廣大消費(fèi)者極為敏感和關(guān)切的。為加強(qiáng)食用林產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管，必須按照無(wú)公害食用林產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督要求，加大特優(yōu)經(jīng)濟(jì)林種植和生長(zhǎng)過(guò)程中用藥監(jiān)督力度及食用林產(chǎn)品農(nóng)藥殘留檢測(cè)力度，使廣西食用林產(chǎn)品達(dá)到無(wú)公害綠色食品生產(chǎn)要求，確保人民群眾“舌尖上的安全”。

目前，相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[2-4]分析方法及有關(guān)文獻(xiàn)[5-11]食用林產(chǎn)品多殘留農(nóng)藥分析檢測(cè)方法的前處理大多存在操作煩瑣、自動(dòng)化程度低、工作量大、提取凈化效率低、使用大量溶劑及溶劑揮發(fā)物毒害檢測(cè)人員等缺點(diǎn)。本文研究在相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[2-4]及有關(guān)文獻(xiàn)[5-11]分析方法的基礎(chǔ)上，大膽采用正己烷+丙酮（3+1）混合溶劑提取，石墨化炭黑/氨基（GCB/NH2）復(fù)合SPE小柱富集、凈化，建立了食用林產(chǎn)品中有機(jī)氯類(lèi)、菊酯類(lèi)多殘留農(nóng)藥檢測(cè)的前處理方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備

MS 3 basis旋渦混合器（IKA儀器有限公司）;VM24固相萃取裝置（博納艾杰爾科技有限公司）;GC-2010Plus氣相色譜儀（日本島津公司），配備電子捕獲ECD檢測(cè)器，色譜柱：SH-Rtx-1（30 m×0.25 mm×0.25 um毛細(xì)色譜柱）;離心機(jī)TD5A-WS（湘儀離心機(jī)儀器有限公司）;WNV-10G氮吹儀（博納艾杰爾科技有限公司）。

1.2 試劑與材料

正己烷為色譜純，丙酮（重蒸），無(wú)水硫酸鈉為分析純（650 ℃灼燒4 h），氯化鈉為優(yōu)級(jí)純（140 ℃烘烤4 h），水為二級(jí)以上蒸餾水。提取混合溶劑為正己烷+丙酮（3+1）。CNWBOND石墨化炭黑/氨基（GCB/NH2）復(fù)合SPE小柱（500 mg/500 mg，6 mL/30 pcs）。

6種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品分別為五氯硝基苯（Quintozene）、三氯殺螨醇（Dicofol）、甲氰菊酯（Fenpropathrin）、氯氟氰菊酯（Cyhalothrin）、氯氰菊酯（Cypermethrin）、氰戊菊酯（Fenvalerate）購(gòu)于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科學(xué)監(jiān)測(cè)研究所，濃度均為100μg/mL。

1.3 混合工作液的配制

混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制：分別吸取上述農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液200μL于10 mL容量瓶中，用正己烷稀釋定容，配制成各農(nóng)藥組分質(zhì)量濃度均為2μg/mL的混合工作溶液，貯存在4 ℃冰箱中備用。檢測(cè)時(shí)通過(guò)稀釋混合工作溶液得到0.005、0.010、0.020、0.040、0.080μg/mL共5個(gè)濃度點(diǎn)的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液[5]，隨樣品進(jìn)行氣相色譜分析。

1.4 樣品的提取

準(zhǔn)確稱(chēng)取10 g（精確至0.01 g）經(jīng)60 ℃烘干的均勻試樣，置于50 mL離心管中（補(bǔ)充適量水分;做加標(biāo)回收時(shí)，在此步驟完成后添加目標(biāo)物），加入20 mL提取溶劑：正己烷+丙酮（3+1），加入3 g氯化鈉，用MS3basis旋渦混合器提取3 min，將離心管放入離心機(jī)，在4 000 r/min離心5 min，吸取上清液到另一離心管中;再加入10 mL提取溶劑：正己烷+丙酮（3+1），用MS3basis旋渦混合器重復(fù)提取3 min，同樣在4 000 r/min離心5 min，合并兩次提取液，在40 ℃水浴氮吹濃縮至少于5 mL，待凈化。

1.5 樣品的富集凈化和定容

首先向CNWBOND石墨化炭黑/氨基（GCB/NH2）復(fù)合SPE小柱（500 mg/500 mg，6 mL）中填充高約2 cm的無(wú)水硫酸鈉，放入VM24固相萃取裝置中進(jìn)行固相萃取操作。在固相萃取柱中，以1.0 mL/min流速加入正己烷+丙酮（3+1）、體積為6.0 mL潤(rùn)洗SPE小柱進(jìn)行活化。以1.5 mL/min流速加入待凈化樣品溶液于CNWBOND石墨化炭黑/氨基（GCB/NH2）復(fù)合SEP小柱中進(jìn)行富集。洗脫：以1.5 mL/min流速，依次用25 mL正己烷+丙酮（3+1）進(jìn)行洗脫，收集洗脫液。濃縮定容：將收集的洗脫液在水浴40 ℃下氮吹濃縮至近干，用正己烷溶解定容為2.0 mL，過(guò)0.2μm濾膜，裝瓶待測(cè)。

1.6 色譜條件

毛細(xì)色譜柱：SH-Rtx-1（30 m×0.25 mm×0.25μm），載氣：高純氮?dú)猓?9.999%），載氣流量：1.0 mL/min，吹掃3.0 mL/min，ECD Ni-63檢測(cè)器，檢測(cè)器溫度：280 ℃，進(jìn)樣口溫度：250 ℃，進(jìn)樣方式：分流自動(dòng)進(jìn)樣[5]（分流比10∶1），進(jìn)樣量：1.0μL，升溫程序：180 ℃保持4.00 min、以15 ℃/min升到200 ℃保持1.00min、以30 ℃/min升到250 ℃保持25.00 min、以40 ℃/min升到280 ℃保持10.00 min，定量方法：峰面積外標(biāo)法定量[5]。

2 結(jié)果與分析

2.1 6種有機(jī)氯類(lèi)、菊酯類(lèi)農(nóng)藥的分離效果

取0.02 mg/L標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，按照上述色譜條件測(cè)定，6種有機(jī)氯類(lèi)、菊酯類(lèi)農(nóng)藥均得到了良好的分離效果[5]，出峰順序依次為五氯硝基苯（7.288 min）、三氯殺螨醇（9.221 min）、甲氰菊酯（14.906 min）、氯氟氰菊酯（17.056 min）、氯氰菊酯-1（23.027 min）、氯氰菊酯-2（23.486 min）、氯氰菊酯-3（23.924 min）、氰戊菊酯（28.079 9 min），得到色譜圖如圖1所示。

2.2 線(xiàn)性范圍及相關(guān)系數(shù)

取配置好的混合工作液，各濃度點(diǎn)分別為0.005、0.010、0.020、0.040、0.080μg/mL，按上述色譜條件進(jìn)樣分析，在最佳色譜條件下，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)[10]，用GC-2010Plus氣相色譜儀工作站再解析分析分別得出6種有機(jī)氯類(lèi)、菊酯類(lèi)農(nóng)藥的線(xiàn)性方程（見(jiàn)表1）。6種化合物的線(xiàn)性范圍為0.005～0.080μg/mL、相關(guān)系數(shù)（R2）為0.999 1～0.999 9。

2.3 方法的回收率與精密度

在確知不含農(nóng)藥殘留的食用林產(chǎn)品樣品（核桃、竹筍、肉桂、八角及油茶）中，分別添加五氯硝基苯（Quintozene）、三氯殺螨醇（Dicofol）、甲氰菊酯（Fenpropathrin）、氯氟氰菊酯（Cyhalothrin）、氯氰菊酯（Cypermethrin）、氰戊菊酯（Fenvalerate）6種有機(jī)氯類(lèi)、菊酯類(lèi)農(nóng)藥，經(jīng)過(guò)氣相色譜分析得到各農(nóng)藥含量為0.01 mg/kg的3個(gè)重復(fù)樣品，在使用本研究的樣品前處理方法進(jìn)行樣品前處理，3個(gè)分別添加相同濃度的樣品回收率和精密度詳見(jiàn)表2中6種有機(jī)氯類(lèi)、菊酯類(lèi)農(nóng)藥的添加實(shí)驗(yàn)結(jié)果：6種有機(jī)氯類(lèi)、菊酯類(lèi)農(nóng)藥的平均回收率為81%～98%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.5%～4.5%，檢測(cè)中沒(méi)有色譜峰干擾情況，回收率高，重復(fù)性好。

3 結(jié)論與討論

目前，農(nóng)藥殘留檢測(cè)前處理的相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[2-4]分析方法及有關(guān)文獻(xiàn)[5-11]均采用有機(jī)溶劑提取、弗羅里矽柱（Florisil）凈化，沒(méi)有富集過(guò)程，大多存在操作煩瑣、自動(dòng)化程度低、工作量大、提取凈化效率低、使用大量溶劑（大于100 mL）及溶劑揮發(fā)物毒害檢測(cè)人員等缺點(diǎn)，本研究采用的凈化小柱為上海安譜實(shí)驗(yàn)科技公司生產(chǎn)的CNWBOND石墨化炭黑/氨基（GCB/NH2）復(fù)合SPE小柱（500 mg/500 mg，6 mL），富集、凈化效果好，使用溶劑約60 mL，樣品回收率高（平均回收率為81%～98%），實(shí)驗(yàn)精度好（相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.5%～4.5%）?？梢?jiàn)，本研究采用的固相萃取凈化、富集是食用林產(chǎn)品中有機(jī)氯類(lèi)、菊酯類(lèi)多殘留農(nóng)藥檢測(cè)前處理方法中首選的凈化方法，該方法可以人工批量操作，大大減輕了工作量，完全滿(mǎn)足食用林產(chǎn)品中多農(nóng)藥殘留檢測(cè)的前處理要求;同時(shí)，通過(guò)對(duì)有機(jī)氯類(lèi)、菊酯類(lèi)農(nóng)藥進(jìn)行了加標(biāo)回收認(rèn)證實(shí)驗(yàn)，均取得了較好的回收率和精度。

參 考 文 獻(xiàn)

[1]劉曉玲，陳松武，蒙芳慧，等.廣西食用林產(chǎn)品質(zhì)量安全現(xiàn)狀及對(duì)策[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2018，19（10）：270-271.

[2]GB/T 5009.146—2008，植物性食品中有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥多種殘留量的測(cè)定[S].

[3]GB/T 5009.19—2008，食品中有機(jī)氯農(nóng)藥多組分殘留量的測(cè)定[S].

[4]NY/T 761—2008，蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥多殘留的測(cè)定[S].

[5]何繼東.固相萃取-定量濃縮在蔬菜水果農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用[J].安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)，2016，22（1）：75-76.

[6]陸英洲，陸德勝.固相萃取-氣相色譜法檢測(cè)食品中農(nóng)藥殘留方法的研究[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2011，21（9）：2185-2186.

[7]翟碩莉，張秀豐.固相萃取-氣相色譜法檢測(cè)桃中多種農(nóng)藥殘留量[J].衡水學(xué)院學(xué)報(bào)，2018，20（1）：8-12.

[8]孟玲芝，劉坤，劉榮光，等，固相萃取技術(shù)在農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用[J].吉林農(nóng)業(yè)，2018（12）：55.

[9]陳華鳳，陳霞，劉剛，等.固相萃取技術(shù)在茶葉農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用[J].四川農(nóng)業(yè)科技，2018（6）：45-46.

[10]段麗村，周建于，李佳欣，等.固相萃取-氣相色譜法檢測(cè)血清中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的研究[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2016，35（12）：1606-1610.

[11]湯富彬，陳宗懋，羅逢健，等.固相萃取-氣相色譜法檢測(cè)茶葉中的有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量[J].分析試驗(yàn)室，2007（2）：43-47.