對血型血清學(xué)檢查中疑難血型進(jìn)行判斷及處理的方法

戰(zhàn)振宇，李曉陽

（吉林通化市第二人民醫(yī)院 檢驗科，吉林 通化）

0 引言

ABO 血型系統(tǒng)是最早的血型系統(tǒng)，發(fā)現(xiàn)時間早于1900年，是對臨床輸血有重要意義的血型系統(tǒng)。在ABO 血型檢測中，常受多種因素干擾，使判斷和處理變得復(fù)雜化和不合理化，影響臨床輸血的安全，而一般干擾因素限于年齡、性別、遺傳或者疾病類型和治療方式方法等，以至于顯示出血型正反定型不一致的情況。正確的血型鑒定不僅是保證輸血安全性的前提，也是避免出現(xiàn)錯誤血型定型導(dǎo)致溶血性輸血異常反應(yīng)，造成受血者生命安全受到威脅的關(guān)鍵[1-2]。血型是一個龐大而復(fù)雜的系統(tǒng)，也正因為血型定型和檢查的復(fù)雜性，從而加大了判斷和處理的難度，因此需要不斷找尋和更新血型判斷和處理方法，持續(xù)保證臨床輸血的安全性。本次研究主要探究血型血清學(xué)檢查中疑難血型進(jìn)行判斷及處理的方法，依據(jù)疑難血型（ABO）產(chǎn)生原因整理分析正確有效的疑難血型鑒別和處理方法，保證血型鑒別準(zhǔn)確性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

經(jīng)過倫理委員會批準(zhǔn)，同意抽取我院55 例疑難血型標(biāo)本進(jìn)行研究調(diào)查，研究時間為2018 年10 月至2019 年11 月。其中男25 例，女30 例，年齡在23～56 歲，平均（41.84±4.59）歲，其中疑難血型標(biāo)本中存在的疾病類型或健康者科室種類包括5 例健康體檢者、4 例孕產(chǎn)婦、2 例肺癌患者、2 例甲狀腺功能亢進(jìn)患者、6 例外科手術(shù)患者、7 例自身免疫性溶血性貧血患、12 例白血病患者、13 例胃腸道惡性腫瘤患者、4 例多發(fā)性骨髓瘤患者。

1.2 儀器與試劑

檢查與鑒別儀器與試劑包括ABO、RhD 血型定型檢測卡（長春博迅生物試劑有限公司生產(chǎn)）；抗人球蛋白檢測卡（長春博迅生物試劑有限公司生產(chǎn)—用于抗人球蛋白交叉配血）；抗人球蛋白檢測卡（長春博迅生物試劑有限公司—用于不規(guī)則抗體篩查）；血型血清學(xué)用離心機（長春博迅生物試劑有限公司）；免疫微柱孵育器（長春博迅生物試劑有限公司）；單克隆抗A、抗B 血型定型試劑（長春博訊生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司）等[3-4]。

1.3 標(biāo)本

所有采集標(biāo)本均為無凝塊、無溶血的ED-TA-K2抗凝血（輸血前72 h 內(nèi)抽?。?/p>

1.4 方法

1.4.1 定型前準(zhǔn)備

首先嚴(yán)格核對采集標(biāo)本的標(biāo)簽，仔細(xì)核查試劑最佳使用期和保質(zhì)期（杜絕使用過期試劑），復(fù)檢ABO 血型。了解采集標(biāo)本患者的身份、疾病史（輸血史、家族史等）、過敏史、病程、臨床診斷及治療情況；排除判斷和處理方法不當(dāng)或試劑操作手法等影響ABO 血型定型的不確定因素。

1.4.2 規(guī)范化采集血樣

二次采集血液樣本（規(guī)范化），凝膠卡采用不同批號區(qū)分，包括反定紅細(xì)胞。二次檢測疑難血型（ABO 血型）正反定型。

1.4.3 實驗步驟

采用ABO、RhD 血型定型檢測卡（長春博迅生物試劑有限公司生產(chǎn)），同時標(biāo)注好序號。將血型標(biāo)本離心后，取紅細(xì)胞懸液0.8%（壓積紅細(xì)胞片配成）；依次加入凝膠卡（各50 μL）第1～4 孔中；待檢者血漿（各50 μL）加入第5～6 孔中；將反定A1、B 型紅細(xì)胞配制成0.8%的濃度，依次加入（各50 μL）第5～6 孔中。采用血型血清學(xué)用離心機（長春博迅生物試劑有限公司—用于離心血型標(biāo)本）離心5 min，速度依次為2 min，900 r/min 和3 min，1500 r/min。離心后取出卡片判定結(jié)果（肉眼判讀）。

1.4.4 結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)

陽性：血型標(biāo)本離心后，紅細(xì)胞抗原和血清抗體形成的抗原抗體復(fù)合物，在微柱凝膠表面有浮現(xiàn)或少許復(fù)合物懸浮在膠中。

陰性：被檢紅細(xì)胞抗原沒有相應(yīng)抗體可以結(jié)合，未顯現(xiàn)出特異性復(fù)合物（抗原和抗體結(jié)合物），凝膠微孔可通過紅細(xì)胞（被檢的單個紅細(xì)胞），沉于凝膠底部[5-6]。

2 結(jié)果判讀及分析處理

24 例血型標(biāo)本的血清抗體水平下降、10 例紅細(xì)胞抗原減弱、4 例冷凝集素、4 例人為因素、4 例血漿因素、7 例不規(guī)則抗體、1 例亞型、1 例弱D 血型。

2.1 血清抗體水平下降、冷凝集素

離心后，凝膠中懸浮狀態(tài)呈分散狀或沉于底部（反定型實驗中的紅細(xì)胞）。處理方法：增加血漿用量；延長反應(yīng)時間，將凝膠卡在室溫下放置15 min 后再離心。

冷凝集素呈陽性或弱陽性。處理方法：將凝膠卡在37 ℃的免疫微柱孵育器放置15 min 后，離心后若正反定型相符則為冷凝集素。

2.2 紅細(xì)胞抗原減弱、不規(guī)則抗體

離心后，正定型實驗中的紅細(xì)胞分散在凝膠中間，逐漸趨于底部（抗原變?nèi)酰?。處理方法：增加紅細(xì)胞懸液濃度。

反定型實驗微柱凝膠卡均呈陽性或弱陽性。處理方法：將凝膠卡在37 ℃的免疫微柱孵育器放置15 min 后，排除冷凝集素后再行不規(guī)則抗體檢查。

2.3 血漿因素、人為因素、弱D 血型、亞型

異常免疫球蛋白可造成正反定型實驗?zāi)z卡均呈陽性或弱陽性。處理方法：采用生理鹽水洗滌三遍，再配制成紅細(xì)胞懸液進(jìn)行實驗。

配制紅細(xì)胞濃度不合適；標(biāo)本放置時間過久被細(xì)菌污染。處理方法：按照操作程序重新進(jìn)行實驗。

凝膠卡第3 孔（抗D）瀑布狀分布于凝膠中（紅細(xì)胞）。處理方法：依照《全國臨床檢驗技術(shù)規(guī)范》中的方法進(jìn)行確認(rèn)。

正定型實驗中，分散于凝膠中間（紅細(xì)胞），或呈拖尾狀或呈混合外觀。處理方法：依照《全國臨床檢驗技術(shù)規(guī)范》中的方法再行確認(rèn)。

3 討論

本次研究的55 例血型標(biāo)本中，存在例數(shù)最多的是由于血清抗體水平下降造成的，而此類標(biāo)本中，有超過半數(shù)的都是50 歲以上的老年人（老年人免疫力下降、抗體減弱）。在鑒定老年病例時，可加大血清量，保持4 ℃以下的溫度保存抗原抗體，或者延長其反應(yīng)時間等來保證血型正反定型的一致性。疑難血型（ABO 血型）是復(fù)雜的血型系統(tǒng)，本次研究檢測的結(jié)果顯示，55 例血型標(biāo)本（ABO），經(jīng)過正確定型試驗操作可得，24 例血型標(biāo)本的血清抗體水平下降、10 例紅細(xì)胞抗原減弱、4 例冷凝集素、4 例人為因素、4 例血漿因素、7 例不規(guī)則抗體、1 例亞型、1 例弱D 血型[7-8]。而影響ABO 血型鑒定的因素有很多，但是血型鑒定是臨床輸血的基礎(chǔ)和關(guān)鍵，也是患者的基本保證，因此血型鑒定是臨床中非常重要的臨床診斷基礎(chǔ)，如何有效避免血型鑒定干擾因素影響，提高血型鑒定準(zhǔn)確性和可靠性是臨床界一直探究和關(guān)注的話題。保證臨床輸血安全性的首要條件就是正確鑒定紅細(xì)胞血型，減少個體差異影響和相關(guān)疾病或年齡、免疫力影響等因素的干擾，盡力規(guī)范血型鑒定操作方法，避免造成正反定型差異。綜上所述，微柱凝膠技術(shù)檢查血型血清的結(jié)果更加具有特異性和直觀性、清晰性，能將常規(guī)儀器和試劑檢查未發(fā)現(xiàn)的問題清楚展示出來，并結(jié)合正確有效的處理方法鑒定疑難血型，找出合理分析方法，使復(fù)定血型操作變得規(guī)范化，以保證臨床輸血的安全性和可靠性，具有一定的臨床價值。