慢性淋巴細(xì)胞白血病免疫表型及預(yù)后研究進(jìn)展

曾雪嬌，龐楠楠，張瑞，謝仁古麗·阿里木，馬佳佳，趙宇，曲建華通訊作者)

(新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院 血液科，新疆 烏魯木齊)

0 引言

慢性淋巴細(xì)胞白血病(chronic lymphocytic leukemia， CLL)是一種惡性程度低的異質(zhì)性淋巴細(xì)胞疾病，以外周血及骨髓中與成熟的淋巴細(xì)胞相近的淋巴細(xì)胞增多為主要表現(xiàn)。具有獨(dú)特的細(xì)胞形態(tài)、免疫表型、細(xì)胞遺傳學(xué)及分子生物學(xué)特點(diǎn)。慢性淋巴細(xì)胞的精確診斷無論是對于治療方案選擇、預(yù)后評價(jià)及發(fā)病機(jī)制研究均有相當(dāng)重要的意義。隨著流式細(xì)胞技術(shù)的快速發(fā)展，分析慢性淋巴細(xì)胞表面抗原的表達(dá)，進(jìn)而判斷慢性淋巴細(xì)胞白血病的診斷，分級，預(yù)后與微小殘留有重要意義。免疫表型已成為診斷血液病的重要檢測手段?，F(xiàn)對慢性淋巴細(xì)胞白血病免疫分型研究進(jìn)展做一說明。

1 慢性淋巴細(xì)胞白血病的診斷

慢性淋巴細(xì)胞白血病是一種成熟B 淋巴細(xì)胞克隆增殖性腫瘤，以淋巴細(xì)胞在外周血、骨髓、脾臟和淋巴結(jié)等聚集為特征。主要發(fā)生于老年人群，國外文獻(xiàn)報(bào)道慢性淋巴細(xì)胞白血病中位發(fā)病年齡在65～70 歲，國內(nèi)李增軍等人研究報(bào)道，中國的慢性淋巴細(xì)胞白血病發(fā)病中位年齡60 歲。其診斷要求符合以下3 條[1]：①外周血B 淋巴細(xì)胞≥5×109/L，淋巴細(xì)胞比例≥50%；②形態(tài)為小的成熟B 細(xì)胞為主，也可見幼稚淋巴細(xì)胞，但比例≤55%；③典型的免疫表型：CD5、CD19、CD79a、CD23、CD43 陽性，sIgM 或IgM和IgD 弱陽性，呈現(xiàn)單克隆κ 或λ，CD20、CD22、CD11c 弱陽性，CD10、FMC7、CyclinD1 陰性。慢性淋巴細(xì)胞白血病國際預(yù)后指數(shù)(CLL/IPI)的積分為4-5 分，其他B-CLPD 為0-2 分。

2 慢淋免疫表型研究進(jìn)展

慢淋細(xì)胞上的抗原是細(xì)胞在分化為各種譜系、各種階段及細(xì)胞活化過程中基因表達(dá)的產(chǎn)物，有序的出現(xiàn)或缺失在細(xì)胞表面。運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)與單克隆抗體結(jié)合檢測慢性淋巴細(xì)胞白血病的細(xì)胞表面上的免疫標(biāo)志， 從客觀上明確細(xì)胞的來源及分型，進(jìn)一步運(yùn)用細(xì)胞分類定量分析，為臨床判斷慢性淋巴細(xì)胞白血病的預(yù)后、細(xì)胞的移植成功率以及存活率都提供了非常重要的參照性數(shù)據(jù)， 指導(dǎo)臨床診療[2]。下面本文將從診斷價(jià)值，預(yù)后價(jià)值，新近發(fā)現(xiàn)這三個(gè)方面分類敘述慢性淋巴細(xì)胞白血病的相關(guān)免疫表型。

2.1 有診斷意義的免疫分型

2.1.1 CD79a

CD79 a 是B 淋巴細(xì)胞的功能蛋白之一，是B 淋巴細(xì)胞抗原受體的組成，對B 淋巴細(xì)胞有極大的特異性，表達(dá)于B 淋巴細(xì)胞分化的原始階段直到B 細(xì)胞分化成熟的漿細(xì)胞階段。但在慢性淋巴細(xì)胞白血病的表達(dá)率較低，CD79a 在絕大多數(shù)急性淋巴細(xì)胞白血病中表達(dá)陽性，可作為這兩種疾病鑒別標(biāo)志。具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

2.1.2 CD5

作為T 細(xì)胞抗原之一的CD5 抗原，被認(rèn)為在慢淋中與B 細(xì)胞進(jìn)入激活狀態(tài)有關(guān)。需要注意的是，CD5 陰性但CD19 和 CD20 陽性的病人，在進(jìn)行免疫分型診斷時(shí)應(yīng)十分謹(jǐn)慎，即使沒有CD5 免疫表型的可疑病例，表達(dá)時(shí)并不能輕易否認(rèn)慢淋的診斷。Indmdar[3]等 發(fā)現(xiàn)7%～20% 的CLL 患者缺乏CD5 的 表達(dá)，Efstathiou S[4]等認(rèn)為CD5 陰性的病人病變程度較輕，預(yù)后較CD5陽性的病人好。Folke S 提出cD19/cD20/cD5 可成為慢性淋巴細(xì)胞白血病的確診依據(jù)。而K. V[5]發(fā)現(xiàn)7%-20% 的慢淋患者都缺乏CD5 的表達(dá)。以上都為CD5 在慢淋的診斷中的重要地位提供依據(jù)。

2.1.3 CDl9

CD19 大多分布于除漿細(xì)胞外的B 細(xì)胞發(fā)育的每個(gè)時(shí)段，是B細(xì)胞的重要標(biāo)志，與B 細(xì)胞的分化、活化、增殖和抗體產(chǎn)生有關(guān)[6]。CD19 分布于除效應(yīng)B 細(xì)胞以外的B 細(xì)胞發(fā)育的各個(gè)時(shí)期，具促進(jìn)B 細(xì)胞激活的作用。CLL 的細(xì)胞抗原存在一定的異質(zhì)性。目前越來越多的研究者提出CD5 和CDl9 雙陽性的B 細(xì)胞群很有可能就是慢淋的細(xì)胞群[7-8]。

2.1.4 CD22

CD22 是淋巴細(xì)胞表面特定的糖蛋白，屬于免疫球蛋白超家族。它表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中幾乎全部的B 細(xì)胞，并促進(jìn)了B 細(xì)胞的分化。CD22 作為一種黏附分子及信號傳遞因子，在下調(diào)B 淋巴細(xì)胞活化閾值中發(fā)揮作用。Cesano 等人[9]研究表明，CD22 有診斷和治療白血病及淋巴瘤的潛在用途。

2.1.5 CD20

表達(dá)于所有B 細(xì)胞的表面的CD20 分子，是B 細(xì)胞的標(biāo)志性的抗原，是區(qū)別B 細(xì)胞的免疫表型，其作用也與B 細(xì)胞的活化和增殖分化過程密切相關(guān)。FMC-7 在大部分慢淋細(xì)胞中并不表達(dá)，但在其他的B 細(xì)胞相關(guān)增殖性疾病中則異常表達(dá)，或可成為慢淋與其他B 淋巴增殖性疾病的鑒別依據(jù)，而且多數(shù)資料顯示FMC-7和CD20 往往同時(shí)表達(dá)[10]。

2.1.6 CD10

以往認(rèn)為CD10 是急性淋巴細(xì)胞白血病的相同抗原，在淋巴細(xì)胞進(jìn)行分化中，它表達(dá)在前B 細(xì)胞及生發(fā)中心的B 細(xì)胞上，而有數(shù)據(jù)表明，前B-CLL 表達(dá)CD10 大概在75% 左右[11]。正常人的外周血大多數(shù)是T 淋巴細(xì)胞，正常不表達(dá)CD10 抗原。所以可以通過對于CD10 的檢測，來對反應(yīng)性的增生及B 細(xì)胞性的慢淋進(jìn)行鑒別診斷。

本文針對絕熱加速量熱儀在測試樣品反應(yīng)過程中存在熱電偶動(dòng)態(tài)特性和爐體加熱系統(tǒng)動(dòng)態(tài)響應(yīng)滯后等問題,提出了一種對其進(jìn)行動(dòng)態(tài)補(bǔ)償?shù)姆椒?通過仿真進(jìn)行了絕熱反應(yīng)過程中影響因素分析,并利用PSO算法搜索優(yōu)化出動(dòng)態(tài)補(bǔ)償器參數(shù),最后,通過標(biāo)準(zhǔn)樣品實(shí)驗(yàn)對該方法進(jìn)行了驗(yàn)證,實(shí)驗(yàn)補(bǔ)償效果與仿真結(jié)果相吻合,表明對絕熱加速量熱儀中的熱電偶動(dòng)態(tài)特性和爐體加熱系統(tǒng)動(dòng)態(tài)響應(yīng)進(jìn)行補(bǔ)償能有效提高絕熱性能,減小在動(dòng)力學(xué)參數(shù)求取過程中所產(chǎn)生的誤差,研究成果對化學(xué)反應(yīng)機(jī)理研究和化學(xué)品熱安全評估具體重要意義。

2.2 有預(yù)后價(jià)值的免疫分型

2.2.1 CD38

CD38 是白細(xì)胞活化相關(guān)抗原，多數(shù)表達(dá)于活化T 細(xì)胞、漿細(xì)胞、前B 細(xì)胞、單核細(xì)胞、胸腺細(xì)胞、造血干/祖細(xì)胞等細(xì)胞中，而成熟的循環(huán)細(xì)胞缺少或低表達(dá)CD38。CD38 與白血病及其疾病的預(yù)后息息相關(guān)。Ibrahim 等人的研究表明[12]，43%的慢淋患者中，CD38 表達(dá)為陽性，但是其表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系目前仍不十分顯著。Thunberg 等人的研究[13]顯示CD38 的表達(dá)與預(yù)后不相關(guān)；Damle NR 等認(rèn)為CD38 陽性是一個(gè)預(yù)后不良的標(biāo)志。KroberA 等學(xué)者的研究[14]則提出，運(yùn)用CD38 表達(dá)與否來進(jìn)行分組，分析預(yù)后或無法獲得明確的結(jié)果。且有相關(guān)研究表明，慢淋細(xì)胞上CD38 可隨著疾病的進(jìn)展發(fā)生變化[15]。筆者推測，CD38 可能在慢淋中不是獨(dú)立的預(yù)后指標(biāo)。

2.2.2 CD23

CD23 是B 淋巴細(xì)胞激活后，獲得的細(xì)胞表面標(biāo)志。CLL 病人CD23 的表達(dá)和疾病發(fā)展及生存期減低有關(guān)。[16]在非疾病狀態(tài)下的淋巴細(xì)胞中，CD23 的表達(dá)較低，而在慢淋活化的B 細(xì)胞中，CD23 的表達(dá)則異常增高。相關(guān)研究表明，慢淋患者CD23 陰性提示預(yù)后不良。[17]推測CD23 可用以明確慢淋白血病患者的又一重要預(yù)后指標(biāo)。

2.2.3 CD13

CD13 可在B 淋巴細(xì)胞增殖性疾病中表達(dá)，多數(shù)提示預(yù)后不良。Nakase k[18]等人研究說明了抗原CDl3，CDl4，CD33 可在B細(xì)胞相關(guān)增殖性疾病中表達(dá)。推測CDl3，CDl4，CD33 等髓系抗原與B-CLL 的發(fā)生相關(guān)。

2.3 新發(fā)現(xiàn)的相關(guān)免疫分型

2.3.1 CD200

CD200 是一種糖蛋白，有免疫抑制的作用。在多種腫瘤細(xì)胞中均過表達(dá)。其中，在急性髓系白血病，多發(fā)性骨髓瘤及慢性淋巴細(xì)胞白血病中均有CD200 的過表達(dá)。Dorfman[19]等采用免疫組化的方法分析了10 例MCL 患者，他們的CD200 表達(dá)均呈陰性。CD200 的缺失不僅見于MCL，也可見于其他成熟B 淋巴細(xì)胞增殖性疾病。[20]Palumbo[21]等報(bào)道，CD200 在79 例CLL 患者中高表達(dá)，而在14 例MCL 患者中，11 例患者CD200 表達(dá)為陰性，另3 例患者CD200 陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)小于20% 且為低表達(dá)；而在其他類型的B-CLPD 患者中( 如FL、MZL) 也呈現(xiàn)低表達(dá)?？梢奀D200 可能取代CD23 作為診斷慢性淋巴細(xì)胞白血病的又一重要且更具有標(biāo)記性的免疫標(biāo)記。

2.3.2 CD148

CDl48 是一種受體型蛋白酪氨酸磷酸酶( protein tyrosine phosphatase)，也稱DEP-1，在中性粒細(xì)胞，巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及成纖維細(xì)胞有較強(qiáng)的表達(dá)?？梢哉{(diào)節(jié)細(xì)胞周期，抑制細(xì)胞生長。 特別對淋巴細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞。 Miquet[22-23]等人報(bào)道， MCL患者 CDl48 表達(dá)強(qiáng)度明顯高于 CLL、小淋巴細(xì)胞淋巴瘤( SLL)患者，并提出中等或者強(qiáng)表達(dá) CDl48 可以排除 CLL，支持 MCL確診。在王曼等人的研究中， B- PLL 的 CDl48 以及 CD200 的表達(dá)差異與 MCL 存在相似之處，7 例患者 CDl48 均陽性，中位 熒 光 強(qiáng) 度( MFI)376.3(108.3～1132.0)， CD200 僅4 例 陽 性， MFI17.8(11～141.6)。提示CD148 可成為診斷慢性淋巴細(xì)胞白血病的新的免疫標(biāo)記進(jìn)一步研究。

2.3.3 CD160

CDl60[24-25]是一種免疫球蛋白樣活化NK 細(xì)胞受體，主要表達(dá)在NK 細(xì)胞和細(xì)胞毒性T 細(xì)胞亞群，而正常B 淋巴細(xì)胞和EBV 轉(zhuǎn)化的B 淋巴細(xì)胞系并不表達(dá)。新近有研究發(fā)現(xiàn)[26]，CDl60 與CLL發(fā)病密切相關(guān)。少量臨床研究顯示，CDl60 在CLL 中高表達(dá)。

2.3.4 CD86

CD86 是一種屬于B-7 家族的免疫球蛋白樣單體，多表達(dá)于樹突狀細(xì)胞、活化B 淋巴細(xì)胞及活化T 淋巴細(xì)胞表面。在CLL細(xì)胞與免疫細(xì)胞( 如CD86) 之間起著重要的通訊作用，從而為CLL 細(xì)胞提供免疫逃逸機(jī)制的條件，介導(dǎo)CLL 的發(fā)病。Ferenc Takács[27]等人的研究表明，CD86 表達(dá)較高的 CLL 細(xì)胞具有更高的增殖率，同時(shí) CD86 和 CD23 表達(dá)之間呈正相關(guān)(P＜0.05)，兩者相關(guān)性可能來源于 LI-4 的分泌。相關(guān)臨床資料分析表明，CD86 高表達(dá)的患者血清淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)較低(P＜0.04)。這可能說明CD86 分子通過激活和消耗免疫系統(tǒng)來干擾CLL 患者的免疫系統(tǒng)。同時(shí)提示CD86 陽性可能是慢淋預(yù)后不良的提示。

2.3.5 CD56

CD56 是的T 淋巴細(xì)胞上一類抗原，可在T 淋巴細(xì)胞病理性增殖性疾病中表達(dá)。CD56 的異常高表達(dá)與CLL 細(xì)胞的增殖率正相關(guān)，可能與無病生存期與總體生存期的減低有相關(guān)性，今后可能成為CLL 預(yù)后不良的提示[28]。

2.3.6 CD34

CD34 是表達(dá)于造血干/祖細(xì)胞表面的跨膜糖蛋白。CD34 作為往往作為遞質(zhì)參與淋巴細(xì)胞歸巢及初期的淋巴細(xì)胞再循環(huán)，以此補(bǔ)充外周T，B 淋巴細(xì)胞。研究人員[29]運(yùn)用FISH 方法比較了60 例慢淋患者與對照組B 細(xì)胞分化初期的CD34+細(xì)胞數(shù)量。兩者雖無明顯差異，但法宣慢淋患者CD34+細(xì)胞中的染色體畸變的概率比CD19+細(xì)胞更高，將CD34 表達(dá)水平作為慢淋預(yù)后參考或可成為指導(dǎo)慢淋治療及預(yù)后評估的新思路。

2.3.7 CD45

CD45 在所有白細(xì)胞上都有表達(dá)，稱為白細(xì)胞共同抗原，廣泛存在于白細(xì)胞表面，是細(xì)胞膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)鍵分子，對于淋巴細(xì)胞的成熟與信號傳導(dǎo)中有關(guān)鍵意義，有報(bào)道提示在CLL 患者T 細(xì)胞上CD45 的表達(dá)水平明顯高于對照組，今后CD45 或可成為判斷慢性淋巴細(xì)胞白血病病人的預(yù)后指標(biāo)。

3 總結(jié)與展望

慢性淋巴細(xì)胞白血病的免疫表型特點(diǎn)是診斷與預(yù)后評價(jià)的重要指標(biāo)，但其結(jié)果依舊需要借助生物遺傳學(xué)與分子學(xué)，病理學(xué)等共同分析。慢性淋巴細(xì)胞白血病的免疫表型為慢淋的確診、鑒別、診療、預(yù)后評價(jià)、治療后微小殘存病灶的研究提供一定依據(jù)。對于慢淋預(yù)后的研究有待進(jìn)一步認(rèn)識，相信未來會有更加完善精準(zhǔn)的臨床預(yù)后指標(biāo)體系的建立。