糞便涂片檢查用于診斷腹瀉患者腸道菌群失調(diào)中的效果

馮小送，毛亞靜

（1. 北京市昌平區(qū)中醫(yī)醫(yī)院 化驗(yàn)室，北京 102200；2. 北京市昌平區(qū)中醫(yī)醫(yī)院 疾控科，北京 102200）

0 引言

抗生素具有較強(qiáng)的消炎殺菌效果，因此在臨床上得到了越來越廣泛的應(yīng)用，但抗生素的濫用也使得真菌感染、菌群失調(diào)引起的腸道疾病發(fā)病率越來越高。在人體正常生理情況下，腸道內(nèi)有正常微生物群，各類菌種之間相互抗衡，使機(jī)體達(dá)到平衡的狀態(tài)，而抗生素的濫用使得菌群數(shù)量失衡，進(jìn)而引發(fā)慢性腹瀉甚至是脫水、炎癥性腸病。有文獻(xiàn)報(bào)道[1]，腸道菌群失調(diào)與結(jié)腸癌發(fā)生有著一定的關(guān)系。為了有效預(yù)防慢性腹瀉、脫水等腸道菌群失調(diào)引起的疾病，對(duì)于有癥狀的患者盡早確診與干預(yù)是極為重要的。據(jù)此我院對(duì)120例慢性腹瀉患者進(jìn)行了糞便涂片檢查，以探討其用于診斷腹瀉患者腸道菌群失調(diào)的效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料。將我院收治的120例慢性腹瀉患者作為本次研究的對(duì)象，所有患者均在2018年12月至2020年7月入院，其中男性59例，女性47例；年齡為8-76歲，平均（48.62±1.51）歲；腹瀉病程20-50日，平均（22.60±1.61）日，共有82例患者就診時(shí)使用過抗生素。120例患者糞便性狀呈糊狀22例，黃綠色稀水便76例，膿血粘液便8例。本研究已經(jīng)倫理會(huì)批準(zhǔn)，納入標(biāo)準(zhǔn)：①腹瀉時(shí)間超過3周或間歇期在2-4周內(nèi)復(fù)發(fā)性腹瀉；②每日排便3次及以上，糞質(zhì)稀薄；③依從性良好；④臨床資料完整。剔除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他消化系統(tǒng)疾??；②合并其他慢性疾病；③全身感染性疾病；④認(rèn)知功能障礙者。

1.2 方法。所有患者均接受了大便常規(guī)與革蘭染色涂片檢查。給予患者無菌容器留取適量的新鮮糞便，留取后待檢。利用棉簽取少量糞便涂在載玻片上，自然干燥固定后染色處理，之后將涂片放于高倍顯微鏡下進(jìn)行觀察。同時(shí)利用棉簽取少量新鮮糞便進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，在載玻片上 滴2-3滴氯化鈉溶液加蓋玻片鏡檢，使用油鏡計(jì)數(shù)，觀察樣本中真菌或細(xì)菌。

1.3 診斷方法。以《腸道菌群糞便涂片檢查圖譜》中各年齡段及各種菌群失調(diào)的菌群圖像為基礎(chǔ)，對(duì)本次研究中的糞便涂片進(jìn)行觀察與診斷，如果患者連續(xù)檢測(cè)兩次以上為陽性，則診斷為腸道菌群失調(diào)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。使用EXCEL整理120例慢性腹瀉患者糞便涂片檢查結(jié)果，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)以例數(shù)、百分比表示。

2 結(jié)果

120例慢性腹瀉患者中共有106例診斷為腸道菌群失調(diào)，51.89%患者為Ⅰ度腸道菌群失調(diào)，39.62%患者診斷為Ⅱ度腸道菌群失調(diào)，其余患者為Ⅲ度腸道菌群失調(diào)。在106例腸道菌群失調(diào)患者的糞便涂片中發(fā)現(xiàn)革蘭陽性菌增多35例，革蘭陰性菌增多68例，全菌減少的3例。

3 討論

慢性腹瀉是一種常見的消化系統(tǒng)癥狀，起病緩慢、病程較長(zhǎng)，對(duì)患者的日常生活造成了嚴(yán)重的影響，若患者未能及時(shí)接受治療，可以引發(fā)脫水等嚴(yán)重后果。慢性腹瀉，病因復(fù)雜，可能與免疫系統(tǒng)異常、腸道微生態(tài)紊亂、感染等因素有關(guān)，腸黏膜分泌大量的水與電解質(zhì)影響其吸收，或者腸道蠕動(dòng)加快腸腔內(nèi)容物停留時(shí)間過短引發(fā)腹瀉。腸道微生態(tài)與腸道屏障受損后細(xì)菌存在著密切的聯(lián)系，有數(shù)據(jù)顯示，在正常生理情況下，人腸道細(xì)菌的細(xì)胞數(shù)量超過1000個(gè)，約占寄居于人體全部微生物總量的78%。腸道細(xì)菌包括原籍菌群，即在腸道正常存在的細(xì)菌、真菌、螺旋體等，同時(shí)還包括外籍菌群。在正常情況下，人體腸道菌群維持著相對(duì)平衡的狀態(tài)，共同發(fā)揮著重要的生理作用。而當(dāng)外界因素發(fā)生變化時(shí)，腸道內(nèi)的菌群平衡被打破，從而引發(fā)胃腸道疾病[2]。腹瀉是臨床最為常見的胃腸道疾病，隨著人們生活節(jié)奏以及飲食習(xí)慣的改變，國(guó)內(nèi)約有5%的人群發(fā)生慢性腹泄。慢性腹病因較為復(fù)雜，可能與藥物使用不當(dāng)、感染、腸道菌群失調(diào)等因素有關(guān)，大量研究證實(shí)，腸道菌群失調(diào)是慢性腹瀉最常見的致病因素。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，對(duì)不同程度腸道菌群失調(diào)，大鼠模型使用廣譜抗生素以后，大鼠腸道內(nèi)糞便球桿比值發(fā)生變化引發(fā)腸道菌群失調(diào)。國(guó)內(nèi)一項(xiàng)關(guān)于抗生素相關(guān)性腸道菌群失調(diào)的調(diào)查顯示，頭孢他啶、哌拉西林、青霉素等廣譜抗生素容易引起腸道菌群失調(diào)，其中頭孢三代抗生素最易引起腸道菌群失調(diào)。從年齡分布情況來看，60歲以下各年齡段腸道菌群失調(diào)發(fā)生率無明顯的差異，而60歲以上人群腸道菌群失調(diào)發(fā)生率明顯上升，說明腸道菌群失調(diào)的發(fā)生與年齡因素也有著一定的關(guān)系。在本研究中，120例慢性腹瀉患者中，在就診時(shí)有82例使用過抗生素，其中使用過頭孢他啶46例，頭孢噻肟鈉28例，8例患者使用過兩種及以上抗生素，這也證實(shí)了抗生素是腸道菌群失調(diào)的重要誘因。

早期檢測(cè)腸道菌群失調(diào)已經(jīng)成為治療慢性腹瀉的重點(diǎn)，而糞便涂片檢查是觀察腸道菌群失調(diào)較快捷與簡(jiǎn)便的一種檢查方法[3-4]。在糞便涂片檢查中所選取的糞便樣本應(yīng)為新鮮糞便樣本，在使用在玻片前，需使用0.9%的氯化鈉溶液進(jìn)行消毒處理，取不同部位的糞便進(jìn)行直接涂片制作成檢測(cè)標(biāo)本。選擇載玻片時(shí)盡量避免使用小玻片，涂片后進(jìn)行染色固定處理，之后使用電子顯微鏡選取3-5個(gè)視野進(jìn)行觀察[5]。使用新鮮糞便進(jìn)行糞便涂片檢查經(jīng)過染色處理后，可以及時(shí)對(duì)標(biāo)本中的菌落數(shù)量種類進(jìn)行精確的測(cè)定，有文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)急性腹瀉患兒進(jìn)行糞便涂片檢查，可見厭氧菌等革蘭陽性菌數(shù)量明顯下降[6]。腸道菌群失衡后，厭氧菌數(shù)量減少會(huì)加重菌群失調(diào)癥狀以及延長(zhǎng)腹瀉的持續(xù)時(shí)間。同時(shí)長(zhǎng)期使用抗生素等藥物也容易使腸道內(nèi)菌群異位，當(dāng)厭氧菌等細(xì)菌異位至小腸時(shí)，小腸內(nèi)會(huì)產(chǎn)生大量游離的膽汁酸進(jìn)而影響脂類物質(zhì)吸收加重腹瀉。國(guó)內(nèi)有學(xué)者指出，輕度菌群失調(diào)患者停用抗生素以后癥狀可明顯改善，可在短時(shí)間內(nèi)恢復(fù)正常；重度菌群失調(diào)患者停用抗生素后，還需要給予微生態(tài)制劑治療以改善腸道微生態(tài)環(huán)境，使腸道內(nèi)菌群數(shù)量處于平衡狀態(tài)。在本研究中，120例慢性腹瀉患者中有106例被診斷為腸道菌群失調(diào)，其中51.89%患者為Ⅰ度腸道菌群失調(diào)，39.62%患者診斷為Ⅱ度腸道菌群失調(diào)，其余患者為Ⅲ度腸道菌群失調(diào)。Ⅰ度腸道菌群失調(diào)患者每日稀便次數(shù)為3-4次，Ⅱ、Ⅲ度腸道菌群失調(diào)患者多為水樣瀉或帶粘液糞便，每日稀便次數(shù)較多且持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)于Ⅰ度腸道菌群失調(diào)患者。另有14例慢性腹瀉患者糞便圖樣檢測(cè)未見腸道菌群失調(diào)情況，其原因主要有合理用藥以及密切的臨床監(jiān)測(cè)有關(guān)，但同時(shí)也應(yīng)考慮其慢性腹瀉可能與感染、腸道免疫系統(tǒng)紊亂等因素有關(guān)。

臨床常使用高倍顯微鏡進(jìn)行糞便涂片檢測(cè)，可以較好地對(duì)糞便藍(lán)色涂片中的細(xì)菌數(shù)量、革蘭陽性菌與革蘭陰性菌比例、病原菌種類進(jìn)行觀察。在人后腸內(nèi)，厚壁菌門是主要的低G+C含量的革蘭氏陽性菌，變形菌門和擬桿菌門是腸道微生物區(qū)系中主要的革蘭氏陰性菌，其對(duì)于宿主的營(yíng)養(yǎng)與健康有著重要的意義。國(guó)內(nèi)一項(xiàng)對(duì)腹瀉兒童糞便涂片檢查腸道菌群失調(diào)的研究顯示，100例腹瀉患兒，中革蘭陽性球菌超過50%的為38例，格蘭陽性菌超過68%的為6例，革蘭陰性菌超過50%的14例，菌群分布呈革蘭氏陽性球菌明顯上升，革蘭氏陽性桿菌明顯下降的特點(diǎn)。在王富海、余健全等人的研究中[7]，抗生素相關(guān)性腹瀉患兒腸道內(nèi)細(xì)菌總數(shù)減少，革蘭陽性桿菌、雙歧桿菌等益生菌數(shù)量比正常值減少，格蘭陰性菌數(shù)量明顯增多，有不同程度的腸道菌群失調(diào)情況，結(jié)果與上述研究一致。在本研究中，106例腸道菌群失調(diào)患者的糞便涂片中革蘭陽性菌增多35例，革蘭陰性菌增多68例，全菌減少的3例，該結(jié)果與上述研究結(jié)果相似。在對(duì)慢性腹瀉患者診治時(shí)需要重視糞便涂片檢查結(jié)果，并根據(jù)患者的病史、飲食習(xí)慣等進(jìn)一步分析，開展及時(shí)有效的治療與護(hù)理，促進(jìn)患者康復(fù)。

綜上所述，腸道菌群失調(diào)是慢性腹瀉的重要誘因之一，多以革蘭陽性菌/革蘭陰性菌均比例失調(diào)、桿菌/球菌比例失調(diào)為主，而抗生素不合理的應(yīng)用是腸道菌群失調(diào)的常見原因。腸道菌群失調(diào)與慢性腹瀉相互影響，腸道菌群失調(diào)可誘發(fā)慢性腹瀉，同時(shí)慢性腹瀉也可加重腸道菌群失調(diào)現(xiàn)象，對(duì)慢性腹瀉患者實(shí)施糞便涂片檢查可以較好地診斷出患者腸道菌群失調(diào)情況，為后續(xù)診治提供了重要的依據(jù)。