耐藥性癲癇腦脊液P-糖蛋白、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1水平變化的臨床意義研究

程麗妞，白樹(shù)風(fēng)，閆俊強(qiáng)，金夢(mèng)華

癲癇是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的常見(jiàn)疾病，是一種由多種病因引起的慢性腦部疾病，是大腦神經(jīng)元突發(fā)性、高度同步化異常放電所造成的短暫性大腦功能障礙疾病。經(jīng)正規(guī)的抗癲癇藥物治療，約70%的患者基本可以控制發(fā)作，但仍存在約1/3的患者對(duì)抗癲癇藥物產(chǎn)生耐藥，最終發(fā)展為耐藥性癲癇[1]。在對(duì)耐藥性癲癇進(jìn)行研究顯示，其腦組織中P-糖蛋白(P-gp)過(guò)度表達(dá)，阻止了抗癲癇藥物透過(guò)血腦屏障，進(jìn)而影響藥物的吸收和分布，產(chǎn)生耐藥[2]。而轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGFβ)參與癲癇的發(fā)病[3]，其中TGFβ1通過(guò)炎癥反應(yīng)參與癲癇神經(jīng)元興奮性和(或)膠質(zhì)細(xì)胞瘢痕形成，可能與癲癇耐藥有關(guān)。本研究即對(duì)耐藥性癲癇腦脊液中P-gp、TGFβ1水平變化的臨床意義進(jìn)行探討分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2015年6月-2018年8月于我院治療有效的癲癇患者30例為敏感組，男17例，女13例；年齡19～58歲，平均(35.3±2.1)歲；病程2～11 y，平均(5.1±0.7)y。耐藥性癲癇患者30例為耐藥組，男16例，女14例；年齡17～55歲，平均(35.0±2.4)歲；病程2～10 y，平均(5.2±1.0)y。同期經(jīng)我院體檢健康者20例為對(duì)照組，男15例，女15例；年齡19～60歲，平均(35.8±2.2)歲。3組受試者性別、年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) (1)符合2001年國(guó)際抗癲癇聯(lián)盟提出的癲癇診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)發(fā)作類型符合《現(xiàn)代神經(jīng)內(nèi)科學(xué)》相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[4]；(3)頭部影像學(xué)未見(jiàn)明顯器質(zhì)性病變；(4)經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，且患者知情同意。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) (1)服用P-gp 的底物類藥物(AEDs除外)或(和)抑制劑類藥物；(2)有酒精或藥物依賴史；(3)合并惡性腫瘤、全身炎癥反應(yīng)、嚴(yán)重器質(zhì)性疾病或先天性代謝異常疾病。

1.4 方 法

1.4.1 標(biāo)本采集 所有受試者均接受腰穿采集腦脊液4 ml，取部分于我院檢驗(yàn)科常規(guī)檢測(cè)無(wú)異常后，4 ℃環(huán)境下將剩余腦脊液以2000 r/min離心10 min，分離細(xì)胞組分，保存于-80 ℃冰箱待測(cè)。

1.4.2 標(biāo)本檢測(cè) 取試劑盒和腦脊液標(biāo)本，室溫(20 ℃～25 ℃)放置15～30 min，酶聯(lián)免疫吸附法定量檢測(cè)P-gp 和TGFβ1，試劑盒購(gòu)自美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特，具體步驟根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

1.5 觀察指標(biāo) 比較分析耐藥組、敏感組和對(duì)照組腦脊液P-gp和TGFβ1水平差異。將耐藥組依據(jù)發(fā)作類型再次分組，組間比較腦脊液P-gp 和TGFβ1水平差異。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 23.0軟件，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P<0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 3組受試者腦脊液P-gp、TGFβ1水平比較 耐藥組腦脊液中P-gp、TGFβ1顯著高于敏感組和對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。敏感組和對(duì)照組腦脊液中P-gp、TGFβ1水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見(jiàn)表1)。

表1 3組受試者腦脊液P-gp、TGFβ1水平比較

2.2 不同發(fā)作類型耐藥組腦脊液P-gp、TGFβ1水平比較 不同發(fā)作類型的耐藥性癲癇患者腦脊液中P-gp、TGFβ1水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見(jiàn)表2)。

表2 不同發(fā)作類型耐藥組腦脊液P-gp、TGFβ1水平比較

3 討 論

目前對(duì)于耐藥性癲癇的發(fā)病機(jī)制尚未明了，其可能與多種細(xì)胞因子或受體的異常表達(dá)有關(guān)[5]。

1995年由Tishler 等學(xué)者[6]首先提出P-gp在腦組織中的過(guò)度表達(dá)可能是癲癇耐藥的原因之一，從而形成了癲癇耐藥轉(zhuǎn)運(yùn)假說(shuō)的基礎(chǔ)。P-gp在正常人組織中廣泛表達(dá)，是多藥耐藥基因-1的編碼產(chǎn)物，具有藥物外排泵功能。在病理狀態(tài)下，P-gp可過(guò)度表達(dá)，并將多種達(dá)到或已經(jīng)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的藥物泵出，使靶細(xì)胞內(nèi)藥物濃度降低，從而產(chǎn)生耐藥[7,8]。

本研究中，通過(guò)對(duì)耐藥性癲癇和治療有效的癲癇患者進(jìn)行分析顯示，前者腦脊液中P-gp水平顯著高于后者。P-gp主要在血腦屏障的血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)，阻止異物或藥物透過(guò)血腦屏障進(jìn)入顱內(nèi)；其表達(dá)水平過(guò)高可將抗癲癇藥物泵出，靶細(xì)胞內(nèi)難以達(dá)到有效血藥濃度。

TGFβ信號(hào)參與癲癇的發(fā)作。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，TGFβ1治療可誘發(fā)癲癇樣活動(dòng)，而其阻滯劑可防止癲癇樣活動(dòng)的產(chǎn)生[9]。氯沙坦等TGFβ信號(hào)阻斷劑可以防止延遲自發(fā)性發(fā)作復(fù)發(fā)的進(jìn)展[10]，表明TGFβ信號(hào)在耐藥性癲癇的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。本研究中，耐藥性癲癇患者腦脊液TGFβ1水平顯著增高。TGFβ1可以觸發(fā)TGFβ信號(hào)激活，引起胞外穩(wěn)態(tài)受損和炎癥反應(yīng)，引發(fā)癲癇[11]。

在對(duì)不同發(fā)作類型的耐藥性癲癇患者進(jìn)行分析顯示，部分性發(fā)作、全面強(qiáng)直痙攣發(fā)作、部分性發(fā)作繼發(fā)全面強(qiáng)直痙攣發(fā)作以及兩種或兩種以上發(fā)作形式的耐藥性癲癇患者腦脊液中P-gp、TGFβ1水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；表明P-gp、TGFβ1水平升高可引起耐藥性癲癇，而與其發(fā)作類型無(wú)明顯關(guān)系。

通過(guò)本研究顯示，腦脊液中P-gp、TGFβ1水平可以作為癲癇耐藥的一項(xiàng)重要指標(biāo)。對(duì)于正在服用抗癲癇藥物的患者，應(yīng)定期檢測(cè)上述指標(biāo)，一旦發(fā)現(xiàn)其水平升高，應(yīng)及時(shí)針對(duì)性地選擇治療藥物，制定個(gè)體化治療方案，降低耐藥性癲癇的發(fā)生概率。但由于本研究納入受試者數(shù)量有限，個(gè)體差異難以排除，后續(xù)需大樣本、大范圍研究進(jìn)一步證實(shí)。