豬冷凍精液人工輸精操作規(guī)程

文│倪和民（北京農(nóng)學院）

鄧曉彬（北京田園奧瑞生物科技有限公司）

趙俊金（全國畜牧總站）

金通（南京農(nóng)業(yè)大學淮安研究院）

劉建（江西正邦養(yǎng)殖有限公司）

豬精液的冷凍包括稀釋液的選用、精子冷凍和復蘇等處理技術，其難點在于阻止精子內(nèi)部形成使精子致死的冰晶結(jié)構(gòu)，同時提高精子活率，避免凍融過程中對精子頂體和質(zhì)膜的損傷。豬人工授精技術體系由精液采集、保存和輸精等多個技術環(huán)節(jié)構(gòu)成，在提高優(yōu)秀種公豬和種母豬利用效率中發(fā)揮著重要作用，但豬人工授精涉及多個步驟，需要較高的操作技術、管理水平和經(jīng)驗。日趨規(guī)?；⒓s化的中國養(yǎng)豬業(yè)對豬繁殖技術和生物安全性提出了更高要求，豬人工授精技術體系必將實現(xiàn)質(zhì)的突破，從而加快我國從養(yǎng)豬大國走向養(yǎng)豬強國的步伐。豬冷凍精液人工授精技術應運而生，豬冷凍精液具有保存時間長、生物安全性高、運輸方便等優(yōu)點，較好地彌補了豬人工授精技術的不足，對豬人工輸精操作要求也更為嚴格。冷凍精液的豬人工輸精方式多為深部輸精，深部輸精與普通輸精相比，能更好地利用有限的精液量，減少公豬采精壓力，提高公豬使用效率，降低固定成本。

20世紀50年代，人們開始研究豬精液冷凍保存技術，直到70年代才能將豬冷凍精液注入母豬輸卵管，通過深部輸精的方法使母豬受精，之后各國才全面展開相關領域的研究。如今，在非洲豬瘟疫情形勢復雜嚴峻下，豬冷凍精液技術也在全國逐步推廣，以往的單純依靠活體引種和常溫精液配種已經(jīng)不再是完整、安全、高效的繁育方法，豬冷凍精液技術既利于保種育種產(chǎn)業(yè)升級，又可提高公豬利用效率，減少公豬飼養(yǎng)量，減少豬場建設用地和設施，緩解環(huán)保壓力。

一、豬凍精解凍前準備

解凍工具準備：解凍液、顯微鏡、恒溫電熱板、玻片、恒溫水浴鍋、溫度計、 鑷子、剪子、杵棒、秒表、干燥毛巾、記號筆、筆記本等。

解凍室恒溫25～30℃；打開水浴鍋用溫度計量取水溫，溫度計與視線持平觀察，且溫度計處于水位中間位置不可觸碰鍋底，待溫度恒溫在37℃時放入稀釋液等待稀釋液恒溫至37℃（稀釋液放在鋼圈內(nèi)防止傾倒）；打開另一個水浴鍋恒溫至50℃，校準方法同上；打開顯微鏡和恒溫電熱板（37～40℃），把蓋玻片和載玻片放在恒溫電熱板上預溫待檢精液活力。

二、豬凍精劑量及稀釋比例

每一支0.5毫升豬凍精細管為5億精子量。每1克解凍粉劑融于20克超純水中（充分溶解使用）。建議每瓶豬凍精輸精計量不低于同等級下的鮮精計量。

三、豬凍精解凍與稀釋

待稀釋液恒溫至37℃，另一水浴鍋的水恒溫至50℃時開始解凍。

1.凍精解凍操作要領。從液氮中取出4支或6支豬凍精（凍精一直保持在液氮面以下，從液氮罐向水浴鍋中夾精液時要“穩(wěn)、準、快”，凍精取出暴露在空氣中時間不可超過5秒，應迅速放入水中解凍）迅速放入50℃恒溫水浴鍋內(nèi)（確保放入水中的每支凍精，不起霜，不粘連，不漂?。?，同時按下秒表16秒（取精液，放水中，按秒表需一氣呵成，勿出現(xiàn)“早按”“遲按”“錯按”和“忘歸零”等現(xiàn)象）后取出擦干，同時用棍棒把精液包捅到液氮面下，然后將空氣端口的精液甩至棉塞端，對齊剪開空氣端稀釋至37℃的稀釋液中，蓋蓋搖勻（迅速翻轉(zhuǎn)搖勻至少2次，保證精子不產(chǎn)生沉淀現(xiàn)象）。

精液細管在解凍時眼觀無明顯裂口破損現(xiàn)象，解凍過程中出現(xiàn)空氣端進水，解凍后不要晃動精液細管，避免水分與精液混合，應立即用剪刀剪掉進水部分，保證含有水分的部分不與稀釋液進行稀釋即不會影響產(chǎn)品質(zhì)量。

2.凍精檢測。

（1）在室溫25℃以上的條件下，取10微升稀釋并搖勻后的精液放在恒溫板上的載玻片上，蓋上蓋玻片鏡檢。

（2）精液解凍后在水浴鍋內(nèi)復蘇5分鐘以上，再取樣放在載玻片上緩1～2分鐘即可檢測活力。

（3）鏡檢活力合格后做好記錄（耳號、品種、時間）或用記號筆標記。

（4）解凍好的精液要進行保溫，避光運輸或保存，建議20分鐘內(nèi)輸精完畢。

四、深部輸精

1.清洗工作。先用千分之一的高錳酸鉀溶液清洗母豬后軀及尾根（從里到外，不洗陰戶），清洗完要停留15分鐘。

再用清水清洗，用干毛巾擦干（每頭豬用一條毛巾，防止交叉感染）。

最后用雙蒸水清洗母豬外陰內(nèi)外側(cè)，并用干紙巾單方向擦干陰戶內(nèi)側(cè)（疊紙巾時注意手指只接觸紙巾邊緣，防止污染紙巾）。

2.深部輸精管使用步驟。

（1）拿到輸精管后，先檢查輸精管的氣密性是否完好，手握輸精管時要注意手離海綿球的距離［距離要合適（10～15厘米），以便操作，手不能直接接觸輸精管］。

（2）一手翻開母豬外陰，一手拿預潤滑過的輸精管（輸精管潤滑采用5毫升硫酸慶大霉素注射液替代潤滑劑效果更佳），先斜向下45°插入母豬陰戶，再斜向上45°逆時針旋轉(zhuǎn)插入母豬陰道，直至子宮頸口處（遇到阻力感）。

（3）接著準備插入內(nèi)管，抓住外管后端，將內(nèi)管插入（不能觸碰內(nèi)管的末端），然后緩慢地向前推送內(nèi)管，如果感到阻力時，應稍等一會，因為子宮頸未完全松弛。內(nèi)管完全插入后，將外管往母豬體內(nèi)再推深一點，如果此時內(nèi)管回退，說明位置不正確，再次輕推內(nèi)管，內(nèi)管仍保持不動，可以實施授精。

（4）拿出預配精液，核對精液瓶標簽與母豬記錄卡是否相符。

（5）將精液單方向翻轉(zhuǎn)，使其均勻；將瓶蓋頭去掉，再擠掉幾滴精液，以保證精液瓶口暢通，同時去掉前端死精，讓空氣進入，使精液瓶恢復原狀。

（6）將精液瓶接在輸精管上，一手推住外管，一手拿精液并緩慢、持續(xù)擠入。

（7）輸精結(jié)束后將內(nèi)管和輸精瓶一起抽出。抽出內(nèi)管后，稍微抬高外管，并用手指刺激母豬外陰30秒，再將外管拔出。

（8）操作結(jié)束后，放公豬在配種通道上1～2小時，注意隔開通道，每區(qū)域按照公、母豬1∶10的比例放置，以促進精液吸收。

注意：豬凍精每次解凍稀釋后30分鐘內(nèi)輸精完畢效果最佳，解凍后的精液在運送過程中必須放到配種箱、泡沫箱或裝有36℃水的保溫杯內(nèi)和箱內(nèi)，做好保溫措施（這樣做的目的是確保在精液活力最佳的時候給母豬輸精，避免反復冷熱應激而導致精子活力降低）。

五、結(jié)束語

嚴格遵守豬凍精技術操作要求，避免不當操作影響產(chǎn)品質(zhì)量、影響母豬受孕能力，造成財產(chǎn)損失。豬精液冷凍保存技術可延長精液的保存時間，適應精液遠距離運輸，與豬人工授精技術配合應用，可以大幅度降低公豬的飼養(yǎng)數(shù)量和引種成本。雖然豬冷凍精液在產(chǎn)仔數(shù)和受孕率方面存在諸多不足，但豬冷凍精液的許多優(yōu)點是常溫精液所不能達到的，豬冷凍精液人工授精技術的推廣與應用必將是今后養(yǎng)豬業(yè)的一個大趨勢，只有通過嚴格規(guī)范化管理才能取得較高的經(jīng)濟效益。