章天霞
(桐城市畜牧獸醫(yī)管理中心,安徽省安慶市 231400)
禽流感是禽流行性感冒的簡(jiǎn)稱,又稱真性雞瘟或歐洲雞瘟,是由A型流感病毒引起的一種禽類傳染病。禽流感病毒(AIV)屬于RNA病毒的正黏病毒科,H5N1禽流感病毒為高致病性亞型,具有血凝素第5型、神經(jīng)氨酸酶第1型,可以感染人。其中,自2003年以來(lái),H5N1導(dǎo)致了數(shù)百萬(wàn)家禽感染,且其傳播迅速、病程短、死亡率高;H7N9是一種新型禽流感,2013年3月底在上海和安徽被發(fā)現(xiàn),嚴(yán)重危害人類身體健康[1]。目前,這些高致病性禽流感給養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失,已被農(nóng)業(yè)農(nóng)村部納入強(qiáng)制免疫監(jiān)測(cè)動(dòng)物疫病范疇。同時(shí),實(shí)踐表明,重組禽流感滅活苗具有使用安全、不會(huì)導(dǎo)致病毒擴(kuò)散,可在常溫貯存和運(yùn)輸、防疫期間無(wú)需攜帶冷藏設(shè)備,受母源抗體的影響少,產(chǎn)生抗體水平高,免疫效果與單價(jià)相似或更佳,減少接種次數(shù)及疫苗運(yùn)輸、存放成本等優(yōu)勢(shì)。
在此背景下,為探究重組禽流感H5+H7亞型三價(jià)滅活苗(H5N1Re-11株、Re-12株+H7N9Re-2株)的免疫效果,減少禽流感的發(fā)生與傳播,筆者采用血凝和血凝抑制試驗(yàn),分別對(duì)2019年、2020年春防集中免疫雞血清樣品進(jìn)行了禽流感病毒H5N1Re-11株、Re-12+H7N9Re-2株抗體水平的檢測(cè),并對(duì)兩次試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了綜合分析。現(xiàn)將相關(guān)試驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下。
供試試劑為肇慶大華農(nóng)生物藥品有限公司重組禽流感H5+H7亞型三價(jià)滅活苗(H5N1Re-11株、Re-12株+H7N9Re-2株)。
抗體檢測(cè)試劑為禽流感H5(Re-11)、H5(Re-12)血凝抑制試驗(yàn)抗原(批號(hào)分別為20191012和20190828),禽流感H5(Re-11)、H5(Re-12)血凝抑制試驗(yàn)陽(yáng)性血清(批號(hào)分別為2 0 1 9 1 0 1 1和20190824),禽流感H7(Re-2)血凝抑制試驗(yàn)抗原(批號(hào)為20190923),禽流感H7(Re-2)血凝抑制試驗(yàn)陽(yáng)性血清(批號(hào)為20190425),生產(chǎn)廠家均為哈爾濱國(guó)生生物科技股份有限公司。
2019年、2020年免疫雞在15~45日齡的,免疫劑量為0.3 mL/羽,頸部皮下注射;在45日齡以上的,免疫劑量為0.5 mL/羽,肌肉注射。
檢測(cè)雞血清樣品來(lái)自桐城市所轄的14個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)。于各鄉(xiāng)鎮(zhèn)(村)散養(yǎng)戶、規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)分別隨機(jī)采集5~10份雞血清樣品[2],2019年春防共計(jì)采集160份雞血清樣品,2020年春防共計(jì)采集215份雞血清樣品。
采樣時(shí)間均為集中免疫重組禽流感H5+H7亞型三價(jià)滅活苗后20~30 d。
根據(jù)《GB/T 18936-2003 高致病性禽流感診斷技術(shù)》規(guī)定的血凝與血凝抑制試驗(yàn)方法進(jìn)行操作[3]。
具體步驟:(1)采集3只SPF公雞(或體內(nèi)無(wú)禽流感和新城疫抗體的公雞)的血液,與等體積3.8%枸櫞酸鈉混合,離心后棄上清液,沉淀物中加生理鹽水洗滌3次,最后配成體積百分比為1%雞紅細(xì)胞懸液,4 ℃保存?zhèn)溆谩#?)4單位抗原的配制。(3)血凝抑制(HI)試驗(yàn)(微量法)。在微量反應(yīng)板的第1~11孔加入生理鹽水25 μL,第12孔加入生理鹽水50 μL;吸取血清25 μL加入第1孔,充分混勻后吸25μL于第2孔依次倍比稀釋至第10孔,從第10孔吸取25 μL棄去;第1~11孔均加入含4 HAU混勻的病毒抗原液25μL,微量振蕩30 s,室溫(約20 ℃)靜置至少30 min;每孔加入25 μL體積百分比為1%的雞紅細(xì)胞懸液混勻,微量振蕩30 s,靜置30 min(室溫約20 ℃,若環(huán)境溫度太高則置于4 ℃條件下進(jìn)行)。(4)結(jié)果判定。對(duì)照紅細(xì)胞將呈現(xiàn)點(diǎn)狀沉于孔底,傾斜70°后,以流淌呈線狀的孔數(shù)為血凝抑制效價(jià),記作2n;以完全抑制4單位抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI的滴度;待檢血清HI效價(jià)≥4 log2時(shí),判定為抗體合格。
由表1可知,2019年春防集中檢測(cè)雞血清樣品共160份,其中,H5免疫抗體合格率為86.25%,H7免疫抗體合格率為83.75%,H5+H7同為陽(yáng)性的占76.25%。
表1 2019年集中檢測(cè)H5、H7免疫抗體情況 (單位:份)
由表2可知,2020年春防集中檢測(cè)雞血清樣品共215份,其中H5免疫抗體合格率為87.91%,H7免疫抗體合格率為87.44%,H5+H7同為陽(yáng)性的占85.58%。
綜上,經(jīng)重組禽流感三價(jià)滅活苗接種后,家禽體內(nèi)產(chǎn)生H5免疫抗體的平均合格率為87.08%,產(chǎn)生H7免疫抗體的平均合格率為85.60%,均達(dá)到農(nóng)業(yè)農(nóng)村部對(duì)高致病性禽流感防疫的總體要求(存欄家禽的有效免疫抗體合格率達(dá)7 0%以上)。同時(shí),H5+H7同為陽(yáng)性的平均符合率為80.92%,表明經(jīng)重組禽流感三價(jià)滅活苗接種后,大部分家禽機(jī)體內(nèi)能同時(shí)產(chǎn)生H5、H7免疫抗體,且基本無(wú)相互拮抗現(xiàn)象。
表2 2020年集中檢測(cè)H5、H7免疫抗體情況 (單位:份)
試驗(yàn)結(jié)果表明,重組禽流感H5+H7亞型三價(jià)滅活苗(H5N1Re-11株、Re-12株+H7N9Re-2株)的免疫效果良好,大多數(shù)家禽能產(chǎn)生較強(qiáng)的保護(hù)抗體[4],可以推廣應(yīng)用。
同時(shí),經(jīng)分析,免疫失敗的原因可能為:(1)免疫程序不合理;(2)家禽自身存在某些免疫抑制性疾病或其他能導(dǎo)致免疫力下降的疾??;(3)家禽的品種差異,有的個(gè)體甚至有先天缺陷;(4)接種疫苗時(shí)存在應(yīng)激反應(yīng);(5)免疫次數(shù)和采樣時(shí)間不同;(6)疫苗注射劑量不夠或過(guò)高;(7)疫苗稀釋錯(cuò)誤、稀釋后未及時(shí)使用;(8)接種前后使用了免疫抑制性藥物等。