液泡膜陽離子轉(zhuǎn)運蛋白在植物抗逆過程中的功能研究進展

高天歌 馬翠敏 王鎖民

摘要 液泡是細胞內(nèi)一種可以儲存多種營養(yǎng)物質(zhì)以及代謝產(chǎn)物的細胞器。為了抵御高鹽、干旱和重金屬毒害等非生物脅迫，植物可以通過將細胞質(zhì)中過量積累的Na+、K+、Ca2+和其他金屬陽離子區(qū)域化至液泡中，以此來維持正常的細胞膨壓并提高植物的抗逆性。液泡膜陽離子轉(zhuǎn)運蛋白種類豐富，能夠調(diào)控細胞中不同無機離子的轉(zhuǎn)運和區(qū)域化。鑒于此，對定位于液泡膜的不同陽離子轉(zhuǎn)運蛋白在植物響應逆境脅迫中的作用進行了簡要概述。

關鍵詞 液泡膜轉(zhuǎn)運蛋白;陽離子;抗逆性;功能

中圖分類號 Q945 ?文獻標識碼 A ?文章編號 0517-6611（2020）21-0001-05

Abstract Vacuole is a kind of organelles that can store a variety of nutrients and metabolites in cells.In order to resist the harsh environments such as salinization， drought and heavy metal pollution， plants can change the turgor and improve its stress resistance by compartmentalizing the excess ions， such as Na+， K+， Ca2+ and other metal cations， in the cytoplasm into vacuoles.There are many tonoplastcation transporters regulated the transport and compartmentalization of different ions.In view of this， we mainly summarized the roles of different tonoplast cation transporters in plants responding to stresses in this review.

Key words Tonoplast transporters;Cation;Stress tolerance;Function

逆境脅迫是對植物生長發(fā)育造成不利影響的各種環(huán)境因素的總稱，可分為生物脅迫和非生物脅迫[1]。其中，非生物脅迫是限制農(nóng)作物產(chǎn)量和野生植物物種分布的主要因素，包括干旱、土壤鹽漬化、低溫、高溫以及重金屬毒害等[2]。在長期的進化過程中，植物形成了各種響應機制來抵御非生物脅迫，其中一種有效的應對策略是植物細胞通過將細胞質(zhì)中過量的離子區(qū)域化至液泡中來維持其正常的膨壓，從而提高植物的抗逆性[3-4]。在此過程中，定位于液泡膜上的負責調(diào)控胞內(nèi)物質(zhì)特異性識別和運輸?shù)霓D(zhuǎn)運蛋白發(fā)揮了重要的作用[5-6]。根據(jù)結(jié)構(gòu)與作用機制的不同，大致將其分為3類：質(zhì)子泵、通道蛋白以及共轉(zhuǎn)運蛋白[7]。近年來，有關定位于液泡膜的各類陽離子共轉(zhuǎn)運蛋白的結(jié)構(gòu)和功能的研究受到了眾多學者的廣泛關注，且研究多集中于調(diào)控Na+、K+區(qū)域化的液泡膜Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運蛋白（tonoplast Na+/H+antiporter，NHX）、調(diào)控Ca2+區(qū)域化的液泡膜Ca2+/H+反向轉(zhuǎn)運蛋白（Ca2+/H+ exchanger，CAX）以及部分負責轉(zhuǎn)運Cd2+、Zn2+、Mn2+和Fe2+等金屬陽離子的轉(zhuǎn)運蛋白。鑒于此，筆者重點對上述幾類液泡膜陽離子轉(zhuǎn)運蛋白的結(jié)構(gòu)及其在植物抗逆過程中的作用進行概述，以期為進一步研究植物的抗逆機理以及提高農(nóng)作物和優(yōu)良牧草的抗逆性提供借鑒。

1 植物液泡膜Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運蛋白（NHX）

鈉（Na）是地殼中含量排名第六的元素，約占其總量的2.8%，同時也是海水中含量僅次于氯（Cl）的第二大元素[8]。Na在植物的生命活動過程中起到了重要作用，作為一種有益元素，其主要以Na+形式被吸收[9]。對于大多數(shù)植物而言，低濃度的Na+可以促進其生長，減輕植物由于營養(yǎng)不良而產(chǎn)生的癥狀，甚至適量的Na+還可以改善作物的品質(zhì)與口感[10-11]。然而，在高鹽條件下，土壤中過量的Na+則會導致大多數(shù)陸生植物的生命活動受到抑制，表現(xiàn)出中度甚至重度的Na+毒害癥狀[12]。而NHX作為一種重要的耐鹽決定因子，可以介導細胞質(zhì)中過多的Na+、K+區(qū)域化至液泡作為廉價的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)，同時減少過量的Na+對細胞質(zhì)中的代謝活動產(chǎn)生毒害作用[13]，從而在調(diào)節(jié)細胞滲透勢與維持膨壓，促進植株吸水以及提高植物耐鹽、抗旱性等方面發(fā)揮十分重要的作用[14]。

1.1 NHX的結(jié)構(gòu)

在高等植物中，最早是在紅甜菜（Beta vulgaris）貯藏組織的液泡膜上檢測到了Na+/H+轉(zhuǎn)運活性[15]。之后，Gaxiola等[16]首次從擬南芥（Arabidopsis thaliana）中克隆出了液泡膜Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運蛋白基因AtNHX1。自此，人們對于高等植物NHXs的研究也逐漸展開。目前，研究者分別從小麥（Triticum aestivum）、玉米（Zea mays）、冰葉日中花（Mesembryanthemum crystallinum）、鹽地堿蓬（Suaeda salsa）和霸王（Zygophyllum xanthoxylum）等植物中克隆得到NHX基因[17-21]。

研究表明，NHX是一種分子量為35 000～70 000 kDa的蛋白，一般其C末端由300多個氨基酸組成，且含有多個蛋白激酶作用位點，而N端則是由550多個氨基酸構(gòu)成的10～12個跨膜區(qū)域（transmembrane domain，TM）[22]。通過分析AtNHX1的拓撲學結(jié)構(gòu)，研究者發(fā)現(xiàn)AtNHX1共包含有12個跨膜域以及1個具有親水性的C末端，且基本上都位于液泡腔中;而N末端則朝向胞質(zhì)，同時在其第3個跨膜域上包含一個高度保守的氨氯吡嗪脒（amiloride）結(jié)合位點[23]。根據(jù)序列類型，NHX可分為兩類，即Class-I NHX與Class-Ⅱ NHX;Class-Ⅱ NHX是在裸子、被子和苔蘚植物中發(fā)現(xiàn)的，經(jīng)證實其位于核內(nèi)體上;而Class-I NHX則普遍存在于陸生植物的液泡膜上并具有特定的功能，擬南芥AtNHX1-AtNHX4就屬于該亞型[24]。

1.2 NHX在植物抗逆過程中的作用

與野生型相比，過表達擬南芥AtNHX1的轉(zhuǎn)基因番茄（Solanum lycopersicum）[25]和轉(zhuǎn)基因油菜（Brassica napus）[26]的生長均未受到200 mmol/L NaCl處理的明顯抑制。Zeng等[27]研究顯示在水稻中過表達菊芋（Helianthus tuberosus）HtNHX1和HtNHX2能夠提高轉(zhuǎn)基因植株的抗鹽能力。在鹽處理下，與野生型相比，共表達霸王ZxNHX和ZxVP1-1（液泡膜H+-焦磷酸酶編碼基因）的轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿（Medicago sativa）能夠在葉片中積累更多的Na+、K+和Ca2+，以此來緩解鹽脅迫對植物產(chǎn)生的不利影響[28]。以上研究表明，NHX1在植物響應鹽脅迫的過程中起到了不可替代的作用，過表達NHX1可以在一定程度上提高植物的耐鹽性[28-30]。除NHX1外，定位于液泡膜上的NHX2在植物抗逆過程中也發(fā)揮了關鍵的作用。在200 mmol/L NaCl的鹽脅迫下，過表達小麥TaNHX2的轉(zhuǎn)基因茄子（Solanum melongena）葉片的生長明顯優(yōu)于野生型，且其Na+、K+含量均較野生型顯著增加，表明TaNHX2在轉(zhuǎn)基因茄子耐鹽性的響應過程中起著重要的調(diào)控作用，因此TaNHX2也可以作為改善作物耐鹽性的候選基因之一[30]。杜梨（Pyrusbetulaefolia）PbrNHX2的表達水平受鹽脅迫和脫水的誘導，但不受冷害的影響;在煙草（Nicotiana tabacum）中過表達PbrNHX2，發(fā)現(xiàn)其可通過調(diào)節(jié)活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平來增強轉(zhuǎn)基因煙草抵御鹽脅迫的能力[31]。此外，在正常條件下，定位于液泡膜的NHX3和NHX4對植物生長發(fā)育的影響雖然較NHX1和NHX2小，但是二者在離子轉(zhuǎn)運方面仍具有自身的獨特性，如AtNHX4對Na+、K+都具有轉(zhuǎn)運能力且更偏向于轉(zhuǎn)運K+，而AtNHX3則只轉(zhuǎn)運Na+、不參與轉(zhuǎn)運K+[32]。

除鹽脅迫外，干旱也是嚴重影響植物生長發(fā)育的非生物脅迫之一[33]。霸王主要分布于我國西北荒漠地區(qū)，具有超強的抗旱性[34]。在干旱脅迫下，ZxNHX能夠?qū)⒓毎|(zhì)中的Na+區(qū)域化至液泡，以降低細胞滲透勢，從而使植物適應干旱環(huán)境[20]。研究表明，干旱處理下，共轉(zhuǎn)化ZxNHX和ZxVP1-1的轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿的株高、根長和干重分別較野生型顯著增加28.7%、67.7%和47.5%，且其葉片中的Na+、K+和Ca2+含量分別較野生型上升130.8%、81.7%和100.0%，表明共轉(zhuǎn)化ZxNHX和ZxVP1-1可以顯著提高植物的抗旱性[35]。在甜菜中過表達ZxNHX和ZxVP1-1可以使轉(zhuǎn)基因植株地上部的Na+含量增加1.2～1.5倍，貯藏根中的蔗糖含量增加6%～16%，從而增加轉(zhuǎn)基因甜菜對干旱的抵御能力[36]。除霸王外，有研究表明，在大麥（Hordeum vulgare）中過表達鹽生草（Halogeton glomeratus）HgNHX1，不僅可以顯著提高轉(zhuǎn)基因大麥的耐鹽性，還可以使其維持較高的水分代謝能力，具有更強的抗旱性[37]。

2 植物液泡膜Ca2+/H+反向轉(zhuǎn)運蛋白（CAX）

鈣（Ca）是維持植物生長發(fā)育所必需的大量元素之一，在植物生命進程中具有不可或缺的作用[38]。Ca2+不僅是細胞結(jié)構(gòu)的組成成分和多種酶的輔助因子，而且還是細胞內(nèi)重要的第二信使[39]。Ca2+可參與調(diào)控植物的生長發(fā)育，在其抗病和適應逆境的過程中具有重要作用，不僅如此，Ca2+還可以與鈣調(diào)素（calmodulin，CaM）結(jié)合形成活化的Ca2+-CaM復合體，參與細胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導[40-42]。植物體內(nèi)的Ca2+通常處于動態(tài)平衡狀態(tài)，Ca2+缺乏會導致葉片壞死，甚至引起植株的死亡;而Ca2+濃度過高則會造成離子毒害[43]。植物能夠通過Ca2+轉(zhuǎn)運系統(tǒng)調(diào)節(jié)其體內(nèi)Ca2+的穩(wěn)態(tài)平衡，其中液泡膜Ca2+/H+反向轉(zhuǎn)運蛋白（CAX）能夠?qū)|(zhì)中的Ca2+區(qū)域化至液泡內(nèi)，從而對細胞內(nèi)的Ca2+濃度起到調(diào)控作用[44]。

2.1 CAX的結(jié)構(gòu)

CAX是由11個跨膜域組成的跨膜蛋白，其N末端位于胞質(zhì)內(nèi)，C末端則位于液泡中，并且N末端的親水性區(qū)域可能會與激酶等信號蛋白相互作用以調(diào)節(jié)CAX發(fā)揮功能[44-45]。CAX的11個跨膜域可分為TM1、TM2-6和TM7-11共3個部分，其中TM1與陽離子的轉(zhuǎn)運相關[46]。CAX具有4個功能域，分別為參與調(diào)控Ca2+/H+反向轉(zhuǎn)運活性的N-末端自抑制區(qū)域（N-terminal regulatory region，NRR）[47-49]、決定Ca2+轉(zhuǎn)運能力的Ca功能域（Ca2+ domain，CaD）[50]、與Mn2+的專一性相關的C功能域[51]、與細胞質(zhì)pH調(diào)節(jié)相關的D功能域[52]。研究發(fā)現(xiàn)，擬南芥AtCAX1～AtCAX4均定位于細胞的液泡膜上[39]。

2.2 CAX在植物抗逆過程中的作用

許多研究表明，CAX在植物抵御非生物脅迫特別是鹽脅迫的過程中發(fā)揮了重要的作用，CAX活性的改變會影響植物中由鹽脅迫誘導的Ca2+信號的變化，進而影響植物對鹽脅迫的耐受能力[53]。鹽脅迫對CAX3的表達具有很強的誘導作用，但對CAX1表達的誘導則很微弱[39]。Zhao等[54]將擬南芥cax1和cax3單突株系以及cax1/cax3雙突株系分別在含有50和100 mmol/L NaCl的介質(zhì)中進行培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)cax3和cax1/cax3對鹽具有較強的敏感性，而cax1則對鹽的敏感性不明顯;進一步的生化分析顯示，cax3對鹽的敏感性與鹽脅迫下液泡膜Ca2+/H+轉(zhuǎn)運活性以及質(zhì)膜H+-ATPase活性密切相關，表明CAX3在植物響應鹽脅迫的過程中發(fā)揮了重要的作用。此外，AtCAX1和AtCAX3可以協(xié)同發(fā)揮作用，二者的共表達能夠顯著提高Ca2+敏感型酵母K667的耐鹽性[55]。除了AtCAXs，鹽地堿蓬等其他植物的CAXs對于抵御鹽脅迫也具有一定的作用，例如在擬南芥中超表達鹽地堿蓬SsCAX1同樣能夠增強轉(zhuǎn)基因植株對鹽脅迫的耐受性[56]。此外，擬南芥AtCAX2、AtCAX4以及一些其他植物的CAXs還能參與調(diào)控除Ca2+外的其他金屬陽離子的轉(zhuǎn)運。

CAX在植物響應冷脅迫的過程中也發(fā)揮了重要的作用。cax1-1、cax1-2、cax1-3和cax1-4分別是4個AtCAX1的T-DNA插入突變株系，其中cax1-3和cax1-4在經(jīng)過低溫馴化后，其在不同低溫處理下的存活率均顯著高于野生型，表明AtCAX1能夠參與調(diào)控擬南芥對低溫的響應[57]。

3 其他陽離子液泡膜轉(zhuǎn)運蛋白

錳（Mn）、鋅（Zn）、鐵（Fe）是植物生長發(fā)育所必需的3種微量元素，然而當細胞內(nèi)這些金屬離子的含量超過一定范圍后也會對植物造成不可避免的傷害[58]。另外，鎘（Cd）作為最常見的重金屬之一，具有易被植物吸收的特點，并且過高濃度的Cd2+會對植物的生長發(fā)育造成損傷[59]。有研究表明，液泡膜上存在多種能夠參與金屬離子轉(zhuǎn)運和區(qū)域化的轉(zhuǎn)運蛋白，均可以起到緩解上述金屬離子毒害以及維持植物生長發(fā)育的作用[60]，主要包括CAX家族轉(zhuǎn)運蛋白、陽離子擴散輔助蛋白（cation diffusion facilitator，CDF）、自然抵抗相關巨噬細胞蛋白（natural resistance-associated macrophage protein，NRAMP）以及植物鋅鐵轉(zhuǎn)運蛋白（zinc-regulated transporters，iron regulated transporter-like proteins，ZIP）等[61-62]。

3.1 轉(zhuǎn)運其他金屬離子的CAX

CAX不僅在植物Ca2+的轉(zhuǎn)運中發(fā)揮重要作用，而且對植物抵御Cd2+、Zn2+、Mn2+、Ni2+和Ba2+等金屬離子毒害來說也是必不可少的。Shigaki等[52]研究發(fā)現(xiàn)擬南芥CAX1的一種突變體CAXcd，其可以將Cd2+區(qū)域化在酵母液泡內(nèi)。Wu等[63]將CAXcd在矮牽牛（Petunia hybrida）中進行超表達，在50和100 μmol/L CdCl2處理36 d后，表達CAXcd的矮牽牛植株的長勢明顯好于野生型，且其能夠在體內(nèi)積累更多的Cd2+;同時研究還發(fā)現(xiàn)過表達CAXcd的矮牽牛植株從開花到種子成熟，植株的形態(tài)和生長發(fā)育并未受到其體內(nèi)大量積累的Cd2+的明顯影響。而在煙草（Nicotiana tabacum）中超表達AtCAX2還可以增加Mn2+在液泡中的積累[64]。Koren′kov等[65-66]研究發(fā)現(xiàn)AtCAX2和AtCAX4均可以將轉(zhuǎn)基因煙草細胞質(zhì)中的Cd2+、Zn2+和Mn2+區(qū)域化到液泡中，以緩解上述金屬離子對植物造成的毒害。此外，研究發(fā)現(xiàn)CAX還可以參與細胞質(zhì)中Ni2+和Ba2+的轉(zhuǎn)運。庭薺屬植物Alyssum lesbiacum的AlCAX 定位于液泡膜上，可參與Ni2+的轉(zhuǎn)運與區(qū)域化，進而改變A. lesbiacum對Ni2+的耐受性[67]。而Liu等[68]將小花堿茅（Puccinellia tenuiflora）的PutCAX1在Ca2+敏感型酵母K667中進行超表達，可使酵母對Ba2+有一定的耐受能力。

3.2 CDF家族轉(zhuǎn)運蛋白

CDF轉(zhuǎn)運蛋白主要負責調(diào)控金屬陽離子從胞質(zhì)到胞外或細胞器的轉(zhuǎn)運[62]，該家族蛋白按照系統(tǒng)進化關系可以分為3類，即Zn-CDFs、Fe/Zn-CDFs和Mn-CDFs轉(zhuǎn)運蛋白[6]。目前，研究者已鑒定出許多CDF家族蛋白，通過生物信息學分析發(fā)現(xiàn)，該家族蛋白普遍具有6個跨膜域，在N端的第1和第2個跨膜域之間存在一個高度保守的特征序列，在C末端則存在一個特殊的陽離子外排結(jié)構(gòu)域[69]。金屬耐受性蛋白（metal tolerance proteins，MTP）是CDFs家族成員之一，研究表明，擬南芥AtMTP定位在液泡膜上，主要調(diào)控胞質(zhì)中的Zn2+向液泡的區(qū)域化[70-71]。此外，水稻的OsMTP8.1和OsMTP8.2都是定位于液泡膜的陽離子轉(zhuǎn)運蛋白，在高Mn2+條件下，OsMTP8.1缺失會導致水稻葉綠素含量下降，生長受限，證明OsMTP8.1是Mn2+特異性轉(zhuǎn)運蛋白;而且OsMTP8.1還可以與OsMTP8.2協(xié)同發(fā)揮作用，將過量Mn2+區(qū)域化在水稻根系和幼苗的液泡中，以減少高Mn2+脅迫對水稻產(chǎn)生的毒害[72-73]。

3.3 NRAMP家族轉(zhuǎn)運蛋白

NRAMP同樣是一類重要的金屬離子轉(zhuǎn)運蛋白，能夠參與多種二價金屬離子的吸收和轉(zhuǎn)運[6]。生物信息學分析顯示，NRAMP蛋白普遍由12個跨膜結(jié)構(gòu)域組成，其中第1～10個跨膜域具有疏水性，并且在第8和第9個跨膜域上還存在一個高度保守的“共有轉(zhuǎn)運標簽”序列基元，推測這段高度保守的序列可能與NRAMP蛋白的功能密切相關[74]。目前已在擬南芥和東南景天（Sedum alfredii）等植物中鑒定出了NRAMP轉(zhuǎn)運蛋白，研究發(fā)現(xiàn)SaNRAMP3定位于液泡膜上，對Cd2+、Mn2+、Fe2+等都具有轉(zhuǎn)運功能[75]。在擬南芥中，AtNRAMP3和AtNRAMP4同樣定位于液泡膜，主要調(diào)控Mn2+和Fe2+的轉(zhuǎn)運;AtNRAMP3和AtNRAMP4可以將液泡中的Mn2+運輸至葉肉細胞的葉綠體中，且二者之間存在功能冗余[76];此外，AtNramp3 AtNramp4缺失突變株系還會因Fe2+缺乏而表現(xiàn)出白化以及種子不能萌發(fā)等現(xiàn)象[77]。

3.4 ZIP家族轉(zhuǎn)運蛋白

ZIP是一類多次跨膜轉(zhuǎn)運蛋白，能夠吸收和運輸二價金屬離子，在維持植物體內(nèi)Zn2+、Fe2+平衡的過程中起重要作用[78]。ZIP家族轉(zhuǎn)運蛋白由326～425個氨基酸組成，普遍含有6～9個跨膜域：其中N末端位于細胞內(nèi)側(cè)，包含3～4個跨膜域，而C末端則位于細胞外側(cè)，包含3～5個跨膜域;此外，在第3和第4個跨膜域之間還存在一個富含組氨酸殘基的可變區(qū)，推測該區(qū)域可能與其能夠參與調(diào)控金屬離子的轉(zhuǎn)運有關[79]。ZIP蛋白具有較多的疏水基團，有利于其與膜的結(jié)合，而這些結(jié)合在膜上的蛋白可以參與調(diào)控Zn2+、Fe2+的跨膜轉(zhuǎn)運[80]。有研究發(fā)現(xiàn)，擬南芥AtZIP1定位于液泡膜，主要負責調(diào)控液泡Zn2+的外排，也可能參與根中Zn2+從液泡釋放到細胞質(zhì)的再活化過程[81]。在木薯（Manihot esculenta）中共表達擬南芥AtMTP1和AtZIP1能夠顯著提高貯藏根可食用部分的Zn2+含量，但是Zn2+的過量積累也會導致轉(zhuǎn)基因植株矮小和葉片失綠等不良表型[82]。

4 總結(jié)與展望

干旱、土壤鹽漬化以及金屬離子毒害等非生物脅迫嚴重影響了我國農(nóng)牧業(yè)的發(fā)展和生態(tài)環(huán)境的恢復。植物細胞中定位于液泡膜上的陽離子轉(zhuǎn)運蛋白可以將細胞質(zhì)中過量的Na+、K+、Ca2+和一些其他金屬陽離子區(qū)域化至液泡中，一方面能夠調(diào)節(jié)細胞的滲透勢、促進水分的吸收，維持植物的正常生長;另一方面還可以緩解植物受外界環(huán)境影響所產(chǎn)生的離子毒害。因此，闡明液泡膜陽離子轉(zhuǎn)運蛋白在植物抗逆中的作用，挖掘更多可利用的關鍵基因，對培育耐鹽、抗旱作物新品種以及生態(tài)環(huán)境的恢復治理都具有十分重要的意義。目前，關于液泡膜陽離子轉(zhuǎn)運蛋白的研究多集中于能夠區(qū)域化Na+、K+的NHXs以及轉(zhuǎn)運Ca2+的CAXs，并且對二者響應逆境脅迫的機制也有了一定的進展。但是，對定位于液泡膜上的其他陽離子轉(zhuǎn)運蛋白功能的研究相對還不夠深入?；谝陨犀F(xiàn)狀，今后的研究可從以下3個方面入手：①除一些常見的Na+/H+和Ca2+/H+逆向轉(zhuǎn)運蛋白外，有關轉(zhuǎn)運Cd2+、Zn2+、Mn2+和Fe2+等金屬陽離子的液泡膜轉(zhuǎn)運蛋白的挖掘及其作用機制的研究還需進一步完善;②加強對各類陽離子轉(zhuǎn)運蛋白之間協(xié)同作用的研究，以期建立相對完善的細胞質(zhì)陽離子轉(zhuǎn)運體系;③可以通過比較不同物種間的某個特定液泡膜陽離子轉(zhuǎn)運蛋白與其抗逆性的關系，篩選可能導致這種差異的天然變異位點，為今后農(nóng)作物及牧草的改良提供優(yōu)異基因資源。

參考文獻

[1]趙孟良，任延靖，李莉，等.菊芋應答非生物逆境脅迫的生長發(fā)育及物質(zhì)代謝研究進展[J].分子植物育種，2019，17（5）：1711-1716.

[2]SAIJO Y，LOO E P.Plant immunity in signal integration between biotic and abiotic stress responses[J].New phytologist，2020，225（1）：87-104.

[3]CLEMENS S，MA J F.Toxic heavy metal and metalloid accumulation in crop plants and foods[J].Annual review of plant biology，2016，67：489-512.

[4]ISMAIL A M，HORIE T.Genomics，physiology，and molecular breeding approaches for improving salt tolerance[J].Annual review of plant biology，2017，68：405-434.

[5]孫琦，黃薇，劉芳，等.小擬南芥轉(zhuǎn)運蛋白基因及NHX2基因的克隆與表達[J].石河子大學學報（自然科學版），2019，37（2）：200-209.

[6]趙秋芳，馬海洋，賈利強，等.植物錳轉(zhuǎn)運蛋白研究進展[J].熱帶作物學報，2019，40（6）：1245-1252.

[7]NAGATA T，IIZUMI S，SATOH K，et al.Comparative molecular biological analysis of membrane transport genes in organisms[J].Plant molecular biology，2008，66（6）：565-585.

[8]KRONZUCKER H J，COSKUN D，SCHULZE L M，et al.Sodium as nutrient and toxicant[J].Plant and soil，2013，369：1-23.

[9]肖瑛，康建軍.營養(yǎng)元素對植物抗旱性作用的研究綜述[J].甘肅農(nóng)業(yè)科技，2013（1）：42-46.

[10]王寶增，劉玉杰，王桂香，等.低濃度NaCl對植物有益作用的研究概況[J].北方園藝，2008（3）：63-65.

[11]雷晶，郝艷淑，王典，等.鈉鉀替代對不同基因型棉花鉀利用效率的影響[J].植物營養(yǎng)與肥料學報，2015，21（4）：962-968.

[12]BAZIHIZINA N，BARRETTLENNARD E G，COLMER T D.Plant growth and physiology under heterogeneous salinity[J].Plant and soil，2012，354：1-19.

[13]BLUMWALD E.Sodium transport and salt tolerance in plants[J].Current opinion in cell biology，2000，12（4）：431-434.

[14]MUNNS R，TESTER M.Mechanisms of salinity tolerance[J].Annual review of plant biology，2008，59：651-681.

[15]BLUMWALD E，POOLE R J.Na+/H+ antiport in isolated tonoplast vesicles from storage tissue of Beta vulgarius[J].Plant physiology，1985，78：163-167.

[16]GAXIOLA R A，RAO R，SHERMAN A，et al.The Arabidopsis thaliana proton transporters，AtNhx1 and Avp1，can function in cation detoxification in yeast[J].Proceedings of the national academy of sciences of the United States of America，1999，96（4）：1480-1485.

[17]BARKLA B J，ZINGARELLI L，BLUMWALD E，et al.Tonoplast Na+/H+ antiport activity and its energization by the vacuolar H+TPase in the halophytic plant Mesembryanthemum crystallinum L.[J].Plant physiology，1995，109（2）：549-556.

[18]BRINI F，GAXIOLA R A，BERKOWITZ G A，et al.Cloning and characterization of a wheat vacuolar cation/proton antiporter and pyrophosphatase proton pump[J].Plant physiology and biochemistry，2005，43（4）：347-354.

[19]ZRB C，NOLL A，KARL S，et al.Molecular characterization of Na+/H+ antiporters（ZmNHX）of maize（Zea mays L.）and their expression under salt stress[J].Journal of plant physiology，2005，162（1）：55-66.

[20]WU G Q，XI J J，WANG Q，et al.The ZxNHX gene encoding tonoplast Na+/H+ antiporter in the xerophyte Zygophyllum xanthoxylum plays important roles in response to salt and drought[J].Journal of plant physiology，2011，168：758-767.

[21]HUANG Y，ZHANG X X，LI Y H，et al.Overexpression of the Suaeda salsa SsNHX1 gene confers enhanced salt and drought tolerance to transgenic Zea mays[J].Journal of integrative agriculture，2018，17（12）：2612-2623.

[22]徐璐，郭善利，尹海波.Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運蛋白與植物耐鹽性研究[J].湖北農(nóng)業(yè)科學，2016，55（11）：2727-2730，2758.

[23]YAMAGUCHI T，APSE M P，SHI H Z，et al.Topological analysis of a plant vacuolar Na+/H+ antiporter reveals a luminal C terminus that regulates antiporter cation selectivity[J].Proceedings of the national academy of sciences of USA，2003，100（21）：12510-12515.

[24]FORD B A，ERNEST J R，GENDALL A R.Identification and characterization of orthologs of AtNHX5 and AtNHX6 in Brassica napus[J].Frontiers in plant science，2012，3：1-12.

[25]ZHANG H X，BLUMWALD E.Transgenic salttolerant tomato plants accumulate saltin foliage but not in fruit[J].Nature biotechnology，2001，19（8）：765-768.

[26]ZHANG H X，HODSON J N，WILLIAMS J P.Engineering salttolerant Brassica plants：Characterization of yield and seed oil quality in transgenic plants with increased vaculolar sodium accumulation[J].Proceedings of the national academy of science USA，2001，98（22）：12832-12836.

[27]ZENG Y，LI Q，WANG H Y，et al.Two NHXtype transporters from Helianthus tuberosus improve the tolerance of rice to salinity and nutrient deficiency stress[J].Plant biotechnology journal，2018，16（1）：310-321.

[28]BAO A K，DU B Q，TOUIL L，et al.Coexpression of tonoplast Cation/H+ antiporter and H+pyrophosphatase from xerophyte Zygophyllum xanthoxylum improves alfalfa plant growth under salinity，drought，and field conditions[J].Plant biotechnology journal，2016，14：964-975.

[29]ZHANG Y M，ZHANG H M，LIU Z H，et al.The wheat NHX antiporter gene TaNHX2 confers salt tolerance in transgenic alfalfa by increasing the retention capacity of intracellular potassium[J].Plant molecular biology，2015，87（3）：317-327.

[30]YARRA R，KIRTI P B.Expressing class I wheat NHX（TaNHX2）gene in eggplant（Solanum melongena L.）improves plant performance under saline condition[J].Funct integrative genomics，2019，19：541-554.

[31]DONG H Z，WANG C M，XING C H，et al.Overexpression of PbrNHX2 gene，a Na+/H+ antiporter gene isolated from Pyrus betulaefolia，confers enhanced tolerance to salt stress via modulating ROS levels[J].Plant science，2019，285：14-25.

[32]BASSIL E，ZHANG S Q，GONG H J，et al.Cation specificity of vacuolar NHXtype cation/H+antiporters[J].Plant physiology，2019，179（2）：616-629.

[33]趙建華，李浩霞，周旋，等.干旱脅迫對寧夏枸杞生長及果實糖分積累的影響[J].植物生理學報，2012，48（11）：1063-1068.

[34]YUE L J，LI S X，MA Q，et al.NaCl stimulates growth and alleviates water stress in the xerophyte Zygophyllum xanthoxylum[J].Journal of arid environments，2012，87：153-160.

[35]KANG P，BAO A K，KUMAR T，et al.Assessment of stress tolerance，productivity，and forage quality in T1 transgenic alfalfa cooverexpressing ZxNHX and ZxVP11 from Zygophyllum xanthoxylum[J].Frontiers in plant science，2016，7：1598-1609.

[36]伍國強，馮瑞軍，魏金魁，等.過量表達霸王ZxNHX和ZxVP1-1基因增強甜菜對滲透脅迫的耐受性[J].植物生理學報，2017，53（6）：1007-1014.

[37]張燕，李葆春，胡有良，等.鹽生草HgNHX1基因在大麥株系中的功能驗證[J].麥類作物學報，2018，38（8）：929-934.

[38]付嶸，孟小暇，柴勝豐.植物與鈣環(huán)境關系的研究進展[J].北方園藝，2019（3）：161-166.

[39]張玉秀，彭曉靜，柴團耀，等.植物液泡膜陽離子/H+反向轉(zhuǎn)運蛋白結(jié)構(gòu)和功能研究進展[J].生物工程學報，2011，27（4）：546-560.

[40]KUDLA J，BATISTICˇ O，HASHIMOTO K.Calcium signals：The lead currency of plant information processing[J].Plant cell，2010，22（3）：541-563.

[41]張哲，宋水山，邊子睿，等.植物細胞中鈣離子作用的研究進展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學，2011，39（24）：14525-14527.

[42]張瑞鑫，高海波，閆素麗，等.跨膜Ca2+和H+離子流參與里那醇誘導的擬南芥中抗蟲防御反應[J].植物生理學報，2014，50（4）：471-476.

[43]HOCKING B，TYERMAN S D，BURTON R A，et al.Fruit calcium：Transport and physiology[J].Frontiers in plant science，2016，7：1-17.

[44]SHIGAKI T，HIRSCHI K D.Diverse functions and molecular properties emerging for CAX cation/H+ exchangers in plants[J].Plant biology，2006，8（4）：419-429.

[45]MANOHAR M，SHIGAKI T，HIRSCHI K D.Plant cation/H+ exchangers（CAXs）：Biological functions and genetic manipulations[J].Plant biology，2011，13（4）：561-569.

[46]ZHAO J，CONNROTON J M，GUO Y Q，et al.Functional studies of split Arabidopsis Ca2+/H+ exchangers[J].Journal of biological chemistry，2009，284：34075-34083.

[47]PITTMAN J K，HIRSCHI K D.Regulation of CAX1，an Arabidopsis Ca2+/H+ antiporter.Identification of an Nterminal autoinhibitory domain[J].Plant physiology，2001，127（3）：1020-1029.

[48]PITTMAN J K，SHIGAKI T，CHENG N H，et al.Mechanism of Nterminal autoinhibition in the Arabidopsis Ca2+/H+ antiporter CAX1[J].Journal of biological chemistry，2002，277（29）：26452-26459.

[49]PITTMAN J K，SREEVIDYA C S，SHIGAKI T，et al.Distinct Nterminal regulatory domains of Ca2+/H+ antiporters[J].Plant physiology，2002，130（2）：1054-1062.

[50]SHIGAKI T，CHENG N H，PITTMAN J K，et al.Structural determinants of Ca2+ transport in the Arabidopsis H+/Ca2+ antiporterCAX1[J].Journal of biological chemistry，2001，276（46）：43152-43159.

[51]SHIGAKI T，PITTMAN J K，HIRSCHI K D.Manganese specificity determinants in the Arabidopsis metal/H+antiporter CAX2[J].Journal of biological chemistry，2003，278（8）：6610-6617.

[52]SHIGAKI T，BARKLA B J，MIRANDAVERGARA M C，et al.Identification of a crucial histidine involved in metal transport activity in the Arabidopsis cation/H+ exchanger CAX1[J].Journal of biological chemistry，2005，280（34）：30136-30142.

[53]BICKERTON P D，PITTMAN J K.Role of cation/proton exchangers in abiotic stress signaling and stress tolerance in plants[M]∥PANDEY G K.Elucidation of abiotic stress signaling in plants.New York：Springer，2015：95-117.

[54]ZHAO J，BARKLA B J，MARSHALL J，et al.The Arabidopsis cax3 mutants display altered salt tolerance，pH sensitivity and reduced plasma membrane H+ATPase activity[J].Planta，2008，227（3）：659-669.

[55]ZHAO J，SHIGAKI T，MEI H，et al.Interaction between Arabidopsis Ca2+/H+ exchangers CAX1 and CAX3[J].Journal of biological chemistry，2009，284：4605-4615.

[56]HAN N，LAN W J，HE X，et al.Expression of a Suaeda salsa vacuolar H+/Ca2+ transporter gene in Arabidopsis contributes to physiological changes in salinity[J].Plant molecular biology reporter，2012，30：470-477.

[57]CATAL R，SANTOS E，ALONSO J M，et al.Mutations in the Ca2+/H+ transporter CAX1 increase CBF/DREB1 expression and the coldacclimation response in Arabidopsis[J].The plant cell，2003，15：2940-2951.

[58]李素貞，陳茹梅.ZIP蛋白在植物中的功能分析[J].生物技術通報，2018，34（11）：1-7.

[59]史新杰，李卓，莊文化，等.土壤中水分和鎘濃度對油菜生長發(fā)育的影響[J].農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境學報，2019，36（1）：71-78.

[60]VERBRUGGEN N，HERMANS C，SCHAT H.Molecular mechanisms of metal hyperaccumulation in plants[J].New phytologist，2009，181（4）：759-776.

[61]譚萬能，李志安，鄒碧.植物對重金屬耐性的分子生態(tài)機理[J].植物生態(tài)學報，2006，30（4）：703-712.

[62]陳迪，潘偉槐，周哉材，等.植物營養(yǎng)元素運輸載體的功能及其調(diào)控機制研究進展[J].浙江大學學報（農(nóng)業(yè)與生命科學版），2018，44（3）：283-293.

[63]WU Q Y，SHIGAKI T，WILLIAMS K A，et al.Expression of an Arabidopsis Ca2+/H+antiporter CAX1 variant in petunia enhances cadmium tolerance and accumulation[J].Journal of plant physiology，2011，168（2）：167-173.

[64]SHEN G M，DU Q Z，WANG J X.Involvement of plasma membrane Ca2+/H+ antiporter in Cd2+ tolerance[J].Rice science，2012，19（2）：161-165.

[65]KOREN′KOV V，HIRSCHI K，CRUTCHFIELD J D，et al.Enhancing tonoplast Cd/H antiport activity increases Cd，Zn，andMn tolerance，and impacts root/shoot Cd partitioning in Nicotiana tabacum L.[J].Planta，2007，226：1379-1387.

[66]KOREN′KOV V，PARK S，CHENG N H，et al.Enhanced Cd2+selectiveroottonoplasttransport in tobaccos expressing Arabidopsis cation exchangers[J].Planta，2007，225（2）：403-411.

[67]INGLE R A，F(xiàn)RICKER M D，SMITH J A C.Evidence fornickel/proton antiport activity at the tonoplast of thehyperaccumulator plant Alyssum lesbiacum[J].Plant biology，2008，10（6）：746-753.

[68]LIU H，ZHANG X X，TAKANO T，et al.Characterization of a PutCAX1 gene from Puccinellia tenuiflora that confers Ca2+ and Ba2+ tolerance in yeast[J].Biochemical and biophysical research communications，2009，383（4）：392-396.

[69]姜巨全，洪閃，徐桐，等.陽離子擴散促進子（CDF）家族蛋白的研究進展[J].黑龍江大學自然科學學報，2014，31（4）：517-528.

[70]KOBAE Y，UEMURA T，SATO M H，et al.Zinc transporter of Arabidopsis thaliana AtMTP1 is localized to vacuolar membranes and implicated in zinc homeostasis[J].Plant and cell physiology，2005，45（12）：1749-1758.

[71]TANAKA N，F(xiàn)UJIWARA T，TOMIOKA R，et al.Characterization of the histidine-rich loop of Arabidopsis vacuolar membrane zinc transporter AtMTP1 as a sensor of zinc level in the cytosol[J].Plant and cell physiology，2015，56（3）：510-519.

[72]CHEN Z H，F(xiàn)UJII Y，YAMAJI N，et al.Mn tolerance in rice is mediated by MTP8.1，a member of the cation diffusion facilitator family[J].Journal of experimental botany，2013，64（14）：4375-4387.

[73]TAKEMOTO Y，TSUNEMITSU Y，F(xiàn)UJIIKASHINO M，et al.The tonoplast-localized transporter MTP8.2 contributes to manganese detoxification in the shoots and roots of Oryza sativa L[J].Plant and cell physiology，2017，58（9）：1573-1582.

[74]孫彤，印莉萍.植物的鐵營養(yǎng)與Nramp基因[J].首都師范大學學報（自然科學版），2003，24（2）：72-75.

[75]張杰.超積累植物東南景天Cd耐性和積累的分子機制[D].杭州：浙江大學，2015.

[76]LANQUAR V，RAMOS M S，LELIVRE F，et al.Export of vacuolar manganese by AtNRAMP3 and AtNRAMP4 is required for optimal photosynthesis and growth under manganese deficiency[J].Plant physiology，2010，152（4）：1986-1999.

[77]BASTOW E L，GARCIA DE LA TORRE V S，MACLEAN A E，et al.Vacuolar iron stores gated by NRAMP3 and NRAMP4 are the primary source of iron in germinating seeds[J].Plant physiology，2018，177（3）：1267-1276.

[78]汪洪，金繼運.植物對鋅吸收運輸及積累的生理與分子機制[J].植物營養(yǎng)與肥料學報，2009，15（1）：225-235.

[79]傅明輝，陳肖麗.植物鋅鐵轉(zhuǎn)運蛋白ZIP家族的生物信息學分析[J].廣東農(nóng)業(yè)科學，2015，42（1）：124-127.

[80]孟璐，孫亮，譚龍濤，等.水稻鋅鐵轉(zhuǎn)運蛋白ZIP基因家族研究進展[J].遺傳，2018，40（1）：33-43.

[81]MILNER M J，SEAMON J，CRAFT E，et al.Transport properties of members of the ZIP family in plants and their role in Zn and Mn homeostasis[J].Journal of experimental botany，2013，64（1）：369-381.

[82]GAITNSOLS E，TAYLOR N J，SIRITUNGA D，et al.Overexpression of the transporters AtZIP1 and AtMTP1 in cassava changes zinc accumulation and partitioning[J].Frontiers in plant science，2015，6：1-11.