吳茱萸多糖含量測定及抗胃潰瘍作用研究

范美玲

（廣東省四會市中醫(yī)院藥劑科，廣東 四會 526200）

吳茱萸屬蕓香科吳茱萸屬植物，多用于治療頭痛、腹痛等，藥理研究表明，吳茱萸對消化系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等有調(diào)節(jié)、保護(hù)作用［1］。當(dāng)前對于吳茱萸的研究主要是對藥效的分析，很少對吳茱萸多糖進(jìn)行研究。多糖作為中藥的藥效基礎(chǔ)，能夠起到諸多的作用，如抗腫瘤、降血脂、保護(hù)肝臟等多種活性作用。本研究對吳茱萸中的多糖含量進(jìn)行測定，同時(shí)分析抗胃潰瘍作用，報(bào)道如下。

1 儀器與材料

1.1 材料

采用6種不同來源的吳茱萸作為材料，主要源于安徽、山東、四川、江西、湖北、河北等省份，并依據(jù)《中國藥典》檢驗(yàn)，同時(shí)把不同來源的吳茱萸制成粉末狀，保存待用。

1.2 儀器設(shè)備

雙光束紫外可見分光光度計(jì)（西門子，型號DR3900）；全能型高性能臺式冷凍離心機(jī)（北京昊諾斯科技有限公司，型號ST40R）；高精密電子分析天平（廈門米德電子科技有限公司，型號FA1004T）；蒽酮（武漢欣欣佳麗生物科技有限公司）；奧美拉唑腸溶片（江蘇聯(lián)環(huán)藥業(yè)股份有限公司，批號H20044871，規(guī)格10mg）；生理鹽水（北京生物制品研究所有限責(zé)任公司，國藥準(zhǔn)字S10870001，規(guī)格5.0mL）。

2 方法及結(jié)果

2.1 檢測吳茱萸多糖含量

2.1.1 對吳茱萸多糖標(biāo)本溶液進(jìn)行配置

將10.0g吳茱萸粉末放置在燒杯內(nèi)，隨后添加無水乙醇100mL進(jìn)行浸泡1～2h，將過濾后的藥材放置在盛有100mL蒸餾水的燒杯內(nèi)，重復(fù)提取2次，每次4h，然后進(jìn)行離心，并混合2次獲得的上清液。將混合后的上清液進(jìn)行濃縮，濃縮到100mL，隨后加入無水乙醇300mL，并放置在溫度為4℃的冰箱內(nèi)12h，第2天把標(biāo)本溶液進(jìn)行離心，觀察到絮狀物沉淀，將絮狀物轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶內(nèi)，然后添加蒸餾水進(jìn)行溶解、定容。最后取10.0mL溶液轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶內(nèi)加水稀釋進(jìn)行定容，配置成吳茱萸多糖溶液。

2.1.2 配置0.2%的蒽酮-硫酸溶液

將0.2g蒽酮放置在燒杯內(nèi)，緩緩添加濃硫酸進(jìn)行溶解，并轉(zhuǎn)移定容到100mL棕色容量瓶內(nèi)，獲得濃度為0.2%的蒽酮-硫酸溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用，避光儲存。

2.1.3 配置葡萄糖溶液

取0.1g干燥到恒重的無水葡萄糖，將其轉(zhuǎn)移到盛有100mL的蒸餾水容量瓶中進(jìn)行定容，隨后取10.0mL的溶液轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中，添加蒸餾水進(jìn)行稀釋到刻度線，獲得濃度100ug/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.1.4 驗(yàn)證方法

線性和范圍：取0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液放置在10mL量筒中，并添加適量的蒸餾水進(jìn)行稀釋，對0.2%6mL的蒽酮-硫酸溶液進(jìn)行搖勻，同時(shí)放置在冰水浴中10min，放入溫度為80℃的水浴中保溫8min后，置于冰水浴中冷卻，在620nm位置對其吸光度進(jìn)行測定。橫坐標(biāo)表示葡萄糖濃度、縱坐標(biāo)表示吸光度值，方程為：Y=0.0515X+0.962，r=0.9994，表明葡萄糖濃度在5.0～17.2μg/mL范圍與吸光度值呈現(xiàn)線性關(guān)系。

重復(fù)性：取吳茱萸多糖標(biāo)本溶液2.0mL放置在量筒內(nèi)，配置6份，依據(jù)線性和范圍進(jìn)行操作并測量，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.2%，具有較好的重復(fù)性。

穩(wěn)定性：將2.0mL的吳茱萸多糖標(biāo)本溶液分別配置出15min、30min、1h、1.5h、2h測定其吸光度值，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.2%，顯示所配置的溶液在2h內(nèi)處于穩(wěn)定狀態(tài)。

加樣回收率：取吳茱萸多糖標(biāo)本溶液1.0mL放置在量筒內(nèi)，共5份，分別添加0.4mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，隨后加水稀釋到2mL，并計(jì)算加樣回收率為95.8%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.5%。

測定樣品：分別去6批吳茱萸各10.0g，按照上述操作進(jìn)行測量，計(jì)算不同來源藥材中的多糖含量，見表1。

表1 各地吳茱萸中的多糖含量比較 mg/g

結(jié)果顯示，吳茱萸藥材中多糖含量的差異與來源存在著較大的關(guān)系，并能夠看出來自江西、湖北、四川的吳茱萸藥材中多糖含量較為豐富，且多糖含量均大于5mg/g，來自安徽、山東、河北的吳茱萸藥材中多糖含量較為缺乏，且多糖含量均小于5mg/g。由此可見，影響吳茱萸中多糖含量的的原因與生長環(huán)境存在很大關(guān)系，所以在研究吳茱萸多糖時(shí)應(yīng)考慮到藥材的出處。

2.2 分析吳茱萸多糖的抗胃潰瘍作用

2.2.1 配置吳茱萸多糖溶液

把30.0g吳茱萸粉末放置在500mL的燒杯內(nèi)，添加無水乙醇脫脂400mL，離心后獲得脫脂后的吳茱萸，并將其放置在燒杯內(nèi)，添加600mL蒸餾水重復(fù)提取2次，每次提取時(shí)間為3h，再次進(jìn)行離心，把2次獲得的上清液合并，并濃縮到500mL，向獲得的溶液內(nèi)添加無水乙醇2400mL，放置在溫度為4℃的冰箱，保存12h。第2天對溶液進(jìn)行過濾，獲得吳茱萸多糖，最后溶于100mL蒸餾水，獲得濃度為0.4g/mL吳茱萸多糖溶液。

2.2.2 制備奧美拉唑溶液

取奧美拉唑腸溶片5粒即40mg，研磨至粉末狀，隨后放置在100mL蒸餾水中，即獲得濃度為0.4mg/mL的奧美拉唑溶液。

2.2.3 藥效試驗(yàn)

取20只健康SD大鼠，體質(zhì)量為180～250g，平均（215±16）g，隨機(jī)分為4組，分別為空白組、常規(guī)組、觀察組及陽性對照組，每組各5只?？瞻捉M與常規(guī)組每天喂食蒸餾水10mL/kg，觀察組每天喂食吳茱萸多糖溶液8g/kg，陽性對照組每天喂食奧美拉唑2.5mg/kg，每天1次，連續(xù)喂食1周。實(shí)驗(yàn)開始前，讓大鼠禁食1天，在最后1次喂食藥物后，固定大鼠，把劍突浸泡在20℃范圍內(nèi)涼水中8h，隨后戊巴比妥鈉麻醉劑，充分暴露胃部，結(jié)扎賁門，隨后向胃內(nèi)注入甲醛固定液，對幽門進(jìn)行結(jié)扎，然后剪掉其胃部，順著胃大彎剪開并展開，使用濃度為0.9%的生理鹽水進(jìn)行沖洗，記錄黏膜順暢情況，最后將胃組織浸泡在濃度為10%的甲醇溶液中2天，進(jìn)行HE染色后做組織病理學(xué)觀察。

2.2.4 藥效學(xué)結(jié)果

用肉眼、顯微鏡對大鼠胃組織進(jìn)行觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：空白組為粉紅色，且沒有出血點(diǎn)。常規(guī)組為暗紅色，且發(fā)生胃黏膜充血，呈現(xiàn)點(diǎn)狀或線狀分布出血點(diǎn)。與常規(guī)組比較，陽性對照組、觀察組大鼠胃黏膜損傷程度較輕。結(jié)果顯示，與常規(guī)組比較，觀察組的潰瘍指數(shù)明顯減小（P＜0.05），且觀察組的潰瘍抑制率為53.7%，證實(shí)吳茱萸多糖能夠起到抗胃潰瘍的作用。

3 討 論

在測定吳茱萸多糖含量時(shí)，對波長、顯色劑的用量、加熱時(shí)間等采用單因素循環(huán)法分別進(jìn)行檢測，確定了最佳的檢測波長、顯色劑用量、加熱時(shí)間、加熱溫度分別為620nm、6mL、6min、80℃，經(jīng)證實(shí)該方法完全符合線性、回收率等要求［2-3］。此次研究通過制備大鼠胃潰瘍模型，方法簡便、容易，且具有較高的成功率，能夠從胃潰瘍指數(shù)、胃組織形態(tài)學(xué)分析吳茱萸多糖的抗胃潰瘍作用［4-5］。此次研究通過對不同來源的吳茱萸進(jìn)行測定，結(jié)果證實(shí)，影響吳茱萸多糖含量的原因主要與來源存在著存在密切關(guān)系。經(jīng)證實(shí)，吳茱萸能夠有效改善胃潰瘍損傷程度，且有防治胃潰瘍的作用［6］。