放射治療對人宮頸癌組織的增殖細(xì)胞核抗原表達(dá)的影響

吳曉葵

（吉林市中心醫(yī)院，吉林 吉林 132011）

在臨床治療中，宮頸癌是婦科疾病中較為常見的一種惡性腫瘤疾病[1]，以往患者的發(fā)病年齡在30歲以上，且該疾病在早期常無癥狀體征，發(fā)展后可能會出現(xiàn)陰道流血、排液等臨床癥狀的發(fā)生，近今年該疾病的趨勢在逐漸朝著年輕低齡女性身上發(fā)生。一般而言，這類疾病對患者造成的影響較大，不僅會影響患者的日常生活工作，還會給患者的心理造成極大的負(fù)擔(dān)。有研究表明，宮頸癌疾病能夠通過早期的預(yù)防和治療將其發(fā)病率有效的降低，而針對已發(fā)生的患者該疾病主要是采取手術(shù)和放療為主的方式進(jìn)行治療。宮頸癌疾病早期多為接觸性出血，到中晚期則為不規(guī)則陰道流血。由于放射治療主要的適用于中晚期患者。對于該疾病患者而言，放射治療能夠提高患者的生存時間，對于延長患者的生命起著至關(guān)重要的作用。因此有效的提高放射療效能夠提高腫瘤的治療效果，本研究就針對深入的探討放射治療對人宮頸癌組織的增殖細(xì)胞核抗原表達(dá)的影響，現(xiàn)詳細(xì)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

抽取2017年6月～2018年11月收治的20例宮頸癌患者為研究對象，所有患者均經(jīng)過診斷確診為鱗狀細(xì)胞癌，且患者的病例根據(jù)臨床癥狀的不同可以將其分為Ⅰ～Ⅱ，患者年齡34～60歲，平均（34.20±8.30）歲。

1.2 方法

參與研究的患者在放射前均接受盆腔照射30～40 Gy/15至20次，隨后采取活檢組織放置于溫度為4℃的40 g·L-1的多聚甲醛混合0.1 mol·L-1磷酸緩沖液中，靜置1～2天后放置于溫度為4℃的30g·L-1的蔗糖溶液中一晚，將其切成厚度為10 μm的30張切片，分成相應(yīng)的3套保存在零下20℃下備用。取出切片后晾干進(jìn)行染色，主要采取免疫組織化學(xué)染色法進(jìn)行染色[2]，將切片分別放置在濃度為10 mmol·L-1的磷酸緩沖鹽水中清洗10分鐘、濃度為0.3 ml·L-1的雙氧水中清洗30分鐘，再將其放置入鼠抗PCNA單克隆抗體內(nèi)，于室溫4℃下孵育2天，孵育后放置在biotin標(biāo)記的兔抗鼠IgG溶液內(nèi)，常溫靜置4小時后置于ABC復(fù)合液內(nèi)，常溫孵育2小時，需要注意的是在每次孵育過程中均需要采用磷酸緩沖液進(jìn)行沖洗10分鐘，沖洗完成后再放置于雙氧水中10分鐘。

1.3 觀察指標(biāo)

在本次試驗中，通過采取半定量分析的方式，

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

使用SPSS 20.0軟件對放射前后患者的增殖細(xì)胞核抗原的內(nèi)容做統(tǒng)計學(xué)分析。

2 結(jié) 果

2.1 PCNA免疫陽性反應(yīng)

通過切片觀察發(fā)現(xiàn)，PCNA免疫陽性反應(yīng)物主要是會在細(xì)胞核上呈現(xiàn)深棕色，在細(xì)胞核膜和核周上只存在少量的陽性物。

2.2 放射前和放射后患者的PCNA免疫陽性胞體細(xì)胞的分布情況

放射前患者的活檢組織呈現(xiàn)PCNA免疫陽性染色，并且癌細(xì)胞組織染色程度中等，且可見部分免疫染色物質(zhì)不同程度的在細(xì)胞核膜和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)展開；放射后患者的活檢組織中僅存的癌細(xì)胞不再呈現(xiàn)PCNA免疫陽性染色，相反在間質(zhì)組織間出現(xiàn)較強的染色現(xiàn)象。

2.3 宮頸癌組織的病理學(xué)進(jìn)行觀察

常規(guī)進(jìn)行染色的切片在放射前后會出現(xiàn)不同的情況，即：（1）放射前：在切片的宮頸組織上能夠看見大量的癌細(xì)胞呈現(xiàn)巣狀、卵圓形或者不規(guī)則形狀分布，且其生長分裂速度較快，呈現(xiàn)病理性核分裂像，腫瘤的間質(zhì)較少；（2）放射后：在切片的宮頸組織數(shù)量明顯減少，剩余的癌細(xì)胞僅呈現(xiàn)巣狀分布，間質(zhì)之間有較為豐富增生的間質(zhì)結(jié)締組織，且間質(zhì)期間還具有較多數(shù)量的間質(zhì)結(jié)締組織，且其白細(xì)胞本浸潤。

3 討 論

宮頸癌疾病是一種由于多種因素和不同階段原因形成的一種疾病，其在癌變的過程當(dāng)中PCNA在對其細(xì)胞的形成和增殖具有十分重要的地位。而PCNA是一種只存在于正常增殖細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞內(nèi)的高度保守的蛋白分子，具有參與DNA復(fù)制和DNA修復(fù)的功能，其在細(xì)胞核中具有兩種形式，一種為可溶性PCNA，另一種為不可溶性PCNA[3]。不可溶性PCNA通常在G0-G1期間無明顯的表達(dá)性，而在G1晚期具有高表達(dá)性，因為該期間段內(nèi)S期將會達(dá)到高峰，G2-M期則會出現(xiàn)下降，而這些的變化竟與DNA的合成具有一致性，這也使得其成為了細(xì)胞增殖狀態(tài)評價的一個標(biāo)準(zhǔn)。正常情況下，通過放射治療后會發(fā)現(xiàn)其PCNA具有明顯的表達(dá)性，即表明放射治療能夠?qū)m頸癌組織中的癌細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞增殖行為進(jìn)行表達(dá)。本次研究中采用的放射治療能夠有效的降低宮頸癌內(nèi)PCNA的表達(dá)能力，使其PCNA免疫呈現(xiàn)陰性，但是由于通過放射后，間質(zhì)組織內(nèi)的PCNA出現(xiàn)高表達(dá)，這從一定程度上表明放射治療會影響宮頸癌組織和間質(zhì)組織，這主要還是由于PCNA的表達(dá)和DNA修復(fù)具有關(guān)聯(lián)性。由于PCNA是DHA合成中不可或缺的一種周期蛋白，也是合成G1和S期的一種輔助蛋白，因此其合成與表達(dá)與細(xì)胞增值狀態(tài)具有相關(guān)性。在人體細(xì)胞中，PCNA可以與多種DNA進(jìn)行結(jié)合，從而參與進(jìn)行復(fù)制與修復(fù)。雖然該方式能夠有效的抑制癌細(xì)胞，但還是會因為其相似性對間質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生作用。并且從本次研究的數(shù)據(jù)結(jié)果顯示來看，放射治療對宮頸癌細(xì)胞具有極高的致死性，同時對宮頸癌細(xì)胞的增殖進(jìn)行有效的抑制性，這也提示我們該治療方式對于治療宮頸癌具有較好的治療效果，我們可以從PCNA表達(dá)的變化中觀察出治療的有效性。因此PCNA的不同表達(dá)成為檢驗宮頸癌細(xì)胞增生的標(biāo)志，也成為檢驗放射治療是否具有效果的檢驗標(biāo)準(zhǔn)。

綜上所述，放射治療中PCNA的高表達(dá)性，往往表示著癌細(xì)胞的增殖較快，因此該治療方式在對宮頸癌細(xì)胞治療中主要是通過組織的增殖細(xì)胞核抗原表達(dá)情況來作為效果好壞的評判標(biāo)準(zhǔn)。