遠(yuǎn)志皂苷元對(duì)脂多糖誘發(fā)神經(jīng)細(xì)胞炎癥損傷的保護(hù)作用

皮 婷，梁月琴，歐雯勵(lì)蓉，朱 晗，陶彥林，金醒昉*

(1.昆明醫(yī)科大學(xué)附屬延安醫(yī)院，昆明 650051； 2.中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院，長(zhǎng)沙 410013； 3.上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥研究所，上海 201203)

據(jù)全國(guó)腫瘤登記中心，最新的腫瘤登記年報(bào)顯示中國(guó)新發(fā)惡性腫瘤發(fā)病約392.9萬(wàn)人，死亡約233.8萬(wàn)人。平均每天超過1萬(wàn)人被確認(rèn)為癌癥，每分鐘有7.5個(gè)人被確證為癌癥。隨著惡性腫瘤發(fā)病率的增高，化療藥物所扮演的角色也越來(lái)越重要，同時(shí)這些藥物所引起的近期或遠(yuǎn)期的不良反應(yīng)也日漸受到關(guān)注。最早是在接受化療后的乳腺癌患者中發(fā)現(xiàn)，很多幸存者都出現(xiàn)記憶力下降等認(rèn)知功能障礙，被稱為“化療腦”(chemo-brain)。近幾年體內(nèi)外大量研究表明，長(zhǎng)期使用化療藥物后可導(dǎo)致患者出現(xiàn)“化療腦”：即化療相關(guān)性認(rèn)知功能障礙，是癌癥患者在化療后出現(xiàn)的記憶力、學(xué)習(xí)力、注意力、推理能力、執(zhí)行功能、信息加工速度和視覺空間功能等認(rèn)知功能的損害[1-4]。而有研究認(rèn)為“化療腦”主要是由于少量化療藥物或炎癥反應(yīng)細(xì)胞因子等透過血腦屏障，多因素作用后，造成中樞神經(jīng)毒性，導(dǎo)致神經(jīng)元損傷甚至神經(jīng)再生障礙[5-6]。由此可知，炎癥因子在“化療腦”的發(fā)生發(fā)展中起到了舉足輕重的作用，且炎癥細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)反應(yīng)所引起的神經(jīng)損傷是“化療腦”發(fā)生的關(guān)鍵因素。

學(xué)者們發(fā)現(xiàn)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子或神經(jīng)保護(hù)因子，如神經(jīng)生長(zhǎng)因子(neurogrowthfactor, NGF)[7-8]、胰島素樣生長(zhǎng)因子-1 (insulin-like growth factor-1, IGF1)[9]、促紅細(xì)胞生成素[10-11]、白血病抑制因子(leukaemia factor, LIF)[12]等，可一定程度的減緩神經(jīng)病變，改善“化療腦”。然而，由于它們的分子量大難以透過血腦屏障、穩(wěn)定性差、或?qū)θ梭w有害副作用等等，限制了其臨床應(yīng)用。

遠(yuǎn)志為常用藥用植物，《神農(nóng)本草經(jīng)》記載：主咳逆?zhèn)校a(bǔ)不足，除邪氣，利九竅，益智慧，耳目聰明，不忘，強(qiáng)志倍力。富含皂苷類、寡聚糖類、口山酮類化合物，具有提高記憶、改善認(rèn)知等藥理作用[13-15]。遠(yuǎn)志皂苷元為遠(yuǎn)志皂苷水解產(chǎn)物，為齊墩果烷型三萜，我們前期研究發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)志皂苷元可促進(jìn)皮質(zhì)神經(jīng)元存活，促進(jìn)神經(jīng)元突起生長(zhǎng)，具有類似神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子作用[16-18]。但遠(yuǎn)志皂苷元對(duì)神經(jīng)細(xì)胞炎癥損傷方面的影響研究較少。

為了探討遠(yuǎn)志皂苷元對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的炎癥損傷是否具有保護(hù)作用，本文以脂多糖作用小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞BV2誘導(dǎo)神經(jīng)炎癥損傷模型，通過觀察炎癥因子及炎癥相關(guān)蛋白的表達(dá)，來(lái)探究具有神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)作用的小分子中藥單體—遠(yuǎn)志皂苷元對(duì)神經(jīng)細(xì)胞炎癥損傷的保護(hù)作用，為進(jìn)一步研究“化療腦”的防治提供新思路及新方向。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞

本研究中涉及細(xì)胞人多巴胺能神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株SH-SY5Y由中科院細(xì)胞庫(kù)提供；小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞BV2購(gòu)自ATCC。

1.2 主要試劑與儀器

遠(yuǎn)志皂苷元，購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司，含量>99.0%，實(shí)驗(yàn)時(shí)用二甲基亞砜(dimethylsulfoxide，DMSO)配置成相應(yīng)濃度, 4℃保存； 地塞米松(dexamethasone，Dex)(M0606AS)購(gòu)自大連美侖生物技術(shù)有限公司；胰蛋白酶(美國(guó)Amresco公司); DMEM (美國(guó)Gibco公司); 胎牛血清(天津市灝洋生物制品科技有限責(zé)任公司); 磺胺(S9251)，鹽酸萘乙二胺(N9125)均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；COX-2引物(mus-cox2-F:CTGAGTGGGGT GATGAGCAA;mus-cox2-R:GAGGCAATGCGGT TCTGATAC)購(gòu)自上海捷瑞生物工程有限公司; 兔抗人COX-2單克隆抗體(12282)購(gòu)自美國(guó)CST公司; GAPDH(GAPDH-F-5’ATGTGTCCGTCGTGGATC TGA3’;GAPDH-R-5’ATGCCTGCTTCACCACCTTCT3’)購(gòu)自上海捷瑞生物工程有限公司；其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。12 孔板、96 孔板(美國(guó)Corning 公司產(chǎn)品)；SW-CJ-1F型超凈工作臺(tái)(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)；培養(yǎng)箱(英國(guó)GalaxyS公司)； 倒置顯微鏡(日本lympus公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 神經(jīng)細(xì)胞的制備和培養(yǎng)

小膠質(zhì)細(xì)胞BV2細(xì)胞用DMEM/FBS+1% PS的培養(yǎng)液，在5% CO2、37℃濕飽和條件下培養(yǎng)。細(xì)胞生長(zhǎng)至80% 融合度時(shí)，以0.25%的胰酶消化后按1瓶傳至3瓶進(jìn)行傳代，取其對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH-SY5Y用DMEM/FBS + 1% PS的培養(yǎng)液，在5% CO2、37℃濕飽和條件下培養(yǎng)。細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合度時(shí)，以0.25%的胰酶消化后按1瓶傳至4瓶進(jìn)行傳代，取其對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.3.2 炎癥介質(zhì)NO濃度檢測(cè)

調(diào)整BV2細(xì)胞濃度為每毫升1.5×106個(gè)，種于96孔板中過夜，預(yù)給藥遠(yuǎn)志皂苷元后2 h，加入LPS(終濃度200 ng/mL)，分為：空白對(duì)照組，LPS組，地塞米松組及遠(yuǎn)志皂苷元各濃度組。繼續(xù)培養(yǎng)22 h后，利用Griess Reagent法檢測(cè)炎癥介質(zhì)NO濃度。于超凈臺(tái)內(nèi)分別每孔吸80 μL上清液到新的96孔板中，同時(shí)制作NaNO2標(biāo)準(zhǔn)曲線(200、100、50、25、12.5、0 μmol/L)，每個(gè)濃度設(shè)置2個(gè)副孔，避光下加入80 μL預(yù)先配置好的Greiss試劑(A液∶B液=1∶1)，混勻后于培養(yǎng)箱中孵育15 min，利用酶標(biāo)儀在540 nm處測(cè)定吸光度值。繪制NaNO2標(biāo)準(zhǔn)曲線，將吸光度值帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線中計(jì)算NO含量。

調(diào)整SH-SY5Y細(xì)胞濃度為每毫升1.6×106個(gè)，種于96孔板中過夜，加入遠(yuǎn)志皂苷元作用于LPS誘發(fā)BV2細(xì)胞炎癥的上清刺激細(xì)胞，培養(yǎng)24 h。然后利用通過上述 Griess Reagent 法檢測(cè)NO 濃度。

1.3.3 兔抗人環(huán)氧合酶2(cyclooxygenase-2，COX2)表達(dá)水平檢測(cè)

調(diào)整BV2細(xì)胞濃度為每毫升1.5×106個(gè)/mL，種于12孔板中過夜。分為：空白對(duì)照組，LPS組，地塞米松組及遠(yuǎn)志皂苷元(2 μmol/L、2.5 μmol/L、3 μmol/L)低、中、高劑量組，預(yù)給藥低、中、高劑量遠(yuǎn)志皂苷元后2 h，加入LPS(終濃度終濃度200 ng/mL)，再繼續(xù)培養(yǎng)22 h后，1000 r/min離心5 min，收集細(xì)胞，QPCR法檢測(cè)COX-2 mRNA(mus-cox2-F：CTGAGTGGGGTGATGAGCAA；mus-cox2-R：GAGGCAATGCGGTTCTGATAC)表達(dá)水平，Western blot法檢測(cè)COX-2蛋白表達(dá)水平。

1.3.4 QPCR法檢測(cè)COX-2 mRNA表達(dá)

實(shí)驗(yàn)分組如前所述，各組細(xì)胞均于藥物干預(yù) 24 h 后提取RNA。按試劑盒說明書進(jìn)行總RNA的提取、逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，再進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系總體積為18 μL。反應(yīng)條件如下：95℃預(yù)變性5 min， 繼之95℃變性10 s，60℃退火30 s，95℃ 延15 s，共42個(gè)循環(huán)。計(jì)算結(jié)果用GAPDH標(biāo)化目的基因的相對(duì)表達(dá)，通過2-ΔΔCt定量目的基因。

1.3.5 Western blot 印跡法檢測(cè)COX-2蛋白表達(dá)

實(shí)驗(yàn)分組如前所述。各組細(xì)胞均于藥物干預(yù) 24 h 后提取細(xì)胞蛋白。上樣前先將制備好的蛋白樣品95℃煮5 min，冷卻后瞬時(shí)離心，待用。取變性后的各組細(xì)胞蛋白等量上樣到SDS聚丙烯酰胺凝膠，電泳結(jié)束后將膠上的蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF膜，100 V轉(zhuǎn)模2 h后用5%脫脂奶粉在室溫下封閉1.5 h，孵育相應(yīng)的一抗4℃過夜，次日用PBST室溫下洗滌3次，每次10 min。然后據(jù)一抗的抗性選擇相同抗性的二抗(稀釋比例為1∶5000)進(jìn)行室溫下孵育1 h，用PBST洗滌3次，每次10 min。再據(jù)底物試劑盒要求顯影、拍照，并保存圖像。運(yùn)用TanonImage軟件進(jìn)行目的蛋白灰度分析。

1.3.6 細(xì)胞活力檢測(cè)

調(diào)整SH-SY5Y細(xì)胞濃度為每毫升1.6×106個(gè)，種于96孔板中過夜。分為：空白對(duì)照組(不做任何處理)，對(duì)照組(除遠(yuǎn)志皂苷元外，其余均加入)，LPS組，地塞米松組及遠(yuǎn)志皂苷元低、中、高劑量組。SH-SY5Y細(xì)胞貼壁后，棄上清換用LPS誘發(fā)小膠質(zhì)細(xì)胞BV2炎癥的上清1 mL，并加入遠(yuǎn)志皂苷元(2 μmol/L、2.5 μmol/L、3 μmol/L)繼續(xù)培養(yǎng)24 h后，加入 CCK-8孵育 0.5 h，采用波長(zhǎng)450 nm 測(cè)定吸光值。

注：與LPS組比較，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。圖1 不同濃度遠(yuǎn)志皂苷元對(duì)LPS誘導(dǎo)的BV2細(xì)胞NO釋放量的影響Note. Compared with the LPS group, *P<0.05，**P<0.01，***P<0.001.Table 1 Effects of different concentrations of senegenin on the release of NO in LPS-induced BV2 cells

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 不同濃度的遠(yuǎn)志皂苷元對(duì)LPS誘發(fā)小膠質(zhì)細(xì)胞BV2產(chǎn)生NO的影響

因前期研究發(fā)現(xiàn)[16-18]2 μmol/L遠(yuǎn)志皂苷元具有較好的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)作用，故在BV2細(xì)胞上摸索遠(yuǎn)志皂苷元的抗炎有效濃度時(shí)，設(shè)計(jì)了1、2、4、8 μmol/L，5、25、50、100 μmol/L兩個(gè)梯度。如圖1A-C所示，圖1A是從1、2、4、8 μmol/L的遠(yuǎn)志皂苷元，結(jié)果顯示1、2 μmol/L兩個(gè)濃度的遠(yuǎn)志皂苷元有抗炎作用(P< 0.01或P< 0.05)；圖1B是從5、25、50、100 μmol/L的遠(yuǎn)志皂苷元，結(jié)果顯示均無(wú)抗炎作用，還具有促炎作用，且呈濃度依賴性；根據(jù)以上結(jié)果縮窄遠(yuǎn)志皂苷元的濃度，圖1C是1.5、2、2.5、3、3.5 μmol/L 的遠(yuǎn)志皂苷元，結(jié)果顯示這些濃度下的遠(yuǎn)志皂苷元均有抗炎作用(P<0.01或P<0.05或P<0.001)，且以2 μmol/L的遠(yuǎn)志皂苷元抗炎作用最為明顯。

2.2 遠(yuǎn)志皂苷元對(duì)LPS誘導(dǎo)的BV2細(xì)胞COX-2 mRNA表達(dá)的影響

根據(jù)以上結(jié)果選取2、2.5、3 μmol/L(低、中、高)劑量遠(yuǎn)志皂苷元作用的細(xì)胞進(jìn)行COX-2 mRNA表達(dá)的檢測(cè)，結(jié)果如圖2所示，LPS作用后的BV2細(xì)胞COX-2 mRNA顯著升高(P<0.001)，陽(yáng)性藥地塞米松組和LPS組相比顯著降低(P<0.001)，2、2.5 μmol/L的遠(yuǎn)志皂苷元組和LPS組相比也顯著降低(P<0.001)。

2.3 遠(yuǎn)志皂苷元對(duì)LPS誘導(dǎo)的BV2細(xì)胞COX-2蛋白表達(dá)的影響

Western blot 檢測(cè)低、中、高劑量組遠(yuǎn)志皂苷元COX-2 蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果如圖3所示，LPS作用后的BV2細(xì)胞中COX-2 蛋白表達(dá)顯著升高(P< 0.001)，與LPS組相比，陽(yáng)性藥地塞米松組COX-2 蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.001)，雖2 μmol/L遠(yuǎn)志皂苷元組COX-2 蛋白表達(dá)量高于陽(yáng)性對(duì)照組，但相比LPS組也有較明顯的降低(P< 0.05)。

2.4 遠(yuǎn)志皂苷元對(duì)SH-SY5Y接受BV2炎癥上清刺激后的細(xì)胞活力影響

該部分實(shí)驗(yàn)主要是研究遠(yuǎn)志皂苷元對(duì)SH-SY5Y接受BV2炎癥上清刺激后的炎癥影響，需加入前部分實(shí)驗(yàn)中LPS誘導(dǎo)BV2細(xì)胞炎癥后的上清，所以該部分實(shí)驗(yàn)分了兩個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)照 (Ctrl) 組，一個(gè)對(duì)照組不加BV2細(xì)胞炎癥上清，另一個(gè)對(duì)照加入該上清。這樣更好的排除了其他因素對(duì)結(jié)果的影響，增加該實(shí)驗(yàn)結(jié)果的說服力，確保該部分實(shí)驗(yàn)中遠(yuǎn)志皂苷元為主要實(shí)驗(yàn)變量，明確遠(yuǎn)志皂苷元在該部分實(shí)驗(yàn)中的作用。

如圖4所示，SH-SY5Y接受BV2炎癥上清刺激后，LPS刺激BV2上清組的細(xì)胞活力和對(duì)照組相比顯著下降(P<0.05)，給2.5、3 μmol/L 遠(yuǎn)志皂苷元BV2上清可以保護(hù)SH-SY5Y細(xì)胞活力免遭LPS的影響(P<0.05或P<0.01)。

注：與LPS組比較， **P<0.01，***P<0.001。圖2 遠(yuǎn)志皂苷元對(duì)LPS誘導(dǎo)的BV2細(xì)胞COX-2 mRNA 表達(dá)水平的影響Note. Compared with the LPS group, **P<0.01，***P<0.001.Table 2 Effect of senegenin on the expression level of coX-2 mRNA in LPS-induced BV2 cells

注：A: WB條帶；B：灰度值比較。與LPS組比較， *P<0.01，****P<0.001。圖3 遠(yuǎn)志皂苷元對(duì)LPS誘導(dǎo)的BV2細(xì)胞COX-2 蛋白表達(dá)水平的影響Note. A, WB strip. B, Gray value comparison. Compared with the LPS group, *P<0.01，****P<0.001.Table 3 Effect of senegenin on the expression level of COX-2 protein in LPS-induced BV2 cells

注：與LPS組比較，*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001。圖4 遠(yuǎn)志皂苷元對(duì)SH-SY5Y接受BV2炎癥 上清刺激后細(xì)胞活力的影響Note. Compared with the LPS group, *P<0.05，**P<0.01，***P<0.001.Table 4 Effects of senegenin on cell viability of SH-SY5Y after BV2 supernatant stimulation

注：與LPS組比較，***P<0.001。圖5 遠(yuǎn)志皂苷元對(duì)SH-SY5Y接受BV2炎癥上清 刺激后NO釋放量的影響Note. Compared with the LPS group, ***P<0.001.Table 5 Effects of senegenin on the release of NO after SH-SY5Y received BV2 supernatant stimulation

2.5 遠(yuǎn)志皂苷元對(duì)SH-SY5Y接受BV2炎癥上清刺激后的細(xì)胞產(chǎn)生NO影響

如圖5所示，實(shí)驗(yàn)分組與上述分組情況一樣。SH-SY5Y接受BV2炎癥上清刺激后，LPS刺激BV2上清組的SH-SY5Y細(xì)胞分泌NO和空白對(duì)照組相比顯著上升(P<0.001)；相比LPS的BV2上清組，2、2.5、3 μmol/L 遠(yuǎn)志皂苷元BV2上清組均可較為顯著地降低SH-SY5Y細(xì)胞NO釋放量(P<0.001)。

3 討論

目前，因化療藥物所產(chǎn)生的不良反應(yīng)，如：周圍神經(jīng)病變等神經(jīng)毒性效應(yīng)，在很大程度上影響了其臨床使用。而對(duì)于某些高效抗腫瘤藥，如鉑類似物或紫杉烷家族成員而言尤為嚴(yán)重，由于這些藥物一般需依賴劑量或治療方案來(lái)發(fā)揮治療效果。這種神經(jīng)毒性效應(yīng)將嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量[19]，即使在化療停止很長(zhǎng)一段時(shí)間仍存在。盡管可見一些神經(jīng)再生，但其再生速度緩慢，且在很多情況下，神經(jīng)病變的逆轉(zhuǎn)也并不完全，甚至還可能影響生活質(zhì)量及正常功能長(zhǎng)達(dá)多年。

“化療腦”作為一種神經(jīng)系統(tǒng)的疾病，主要是癌癥患者化療后的認(rèn)知功能的受損[20]，但其誘因較為復(fù)雜，發(fā)生機(jī)制仍未明確。有猜測(cè)“化療腦”是異常大腦重構(gòu)、延緩的損傷修復(fù)系列活動(dòng)后，為神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫學(xué)改變所導(dǎo)致的結(jié)果[21]。有研究報(bào)道化療可引起促炎細(xì)胞因子水平的升高，引起炎癥反應(yīng)，可能是周圍組織中產(chǎn)生的炎癥因子，穿過血腦屏障影響大腦功能，也可能是化療后直接導(dǎo)致大腦內(nèi)部產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，這點(diǎn)尚未明確[22-23]。但有研究明確炎癥因子與化療后認(rèn)知障礙的發(fā)生密切相關(guān)，且化療后大量炎癥因子的產(chǎn)生又促進(jìn)了患者“化療腦”的發(fā)展[24]。體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)5-FU等可顯著地促進(jìn)促炎因子的產(chǎn)生[25]。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)在惡性腫瘤如乳腺癌、霍奇金病等患者體內(nèi)炎癥因子水平顯著升高[26-27]、神經(jīng)元凋亡，猜測(cè)這一改變與“化療腦”的發(fā)生密切相關(guān)?？煽隙ǖ氖茄装Y反應(yīng)及其相關(guān)細(xì)胞因子可致神經(jīng)元受損并降低海馬神經(jīng)元再生功能，導(dǎo)致認(rèn)知障礙[28]。因此，抑制炎癥因子的釋放，可能對(duì)改善神經(jīng)損傷及延緩“化療腦”具有重要的意義。

本研究中不同濃度遠(yuǎn)志皂苷元對(duì)LPS誘導(dǎo)的BV2細(xì)胞產(chǎn)生NO的影響的濃度篩選結(jié)果顯示， 5、25、50、100 μmol/L的遠(yuǎn)志皂苷元均無(wú)抗炎癥反應(yīng)作用，且與LPS組相比，5、25、50、100 μmol/L的遠(yuǎn)志皂苷元反而有明顯地促炎作用，以100 μmol/L效果最顯著(P<0.001)；而1.5、2、2.5、3、3.5 μmol/L的遠(yuǎn)志皂苷元均可顯著地降低NO釋放，尤以2 μmol/L遠(yuǎn)志皂苷元降低作用較為顯著(P<0.001)。表明低濃度遠(yuǎn)志皂苷元可降低NO釋放，可能具有抗炎癥作用。環(huán)氧化酶(cyclooxygenase,COX)是花生四烯酸代謝前列腺素過程的主要限速酶，COX同工酶一COX-2是一種重要的炎癥介質(zhì)，炎癥反應(yīng)伴隨 COX-2表達(dá)增加與許多神經(jīng)疾病的病理過程中神經(jīng)元的變性和凋亡有關(guān)。Yang等[29]發(fā)現(xiàn)經(jīng)甲氨蝶呤治療乳腺癌小鼠后其海馬功能障礙，與其前列腺素合成酶、COX-2 及NO 合成酶iNOS表達(dá)上調(diào)密切相關(guān)。在認(rèn)知障礙患者或動(dòng)物模型的研究中發(fā)現(xiàn)，氟西汀可通過提高海馬神經(jīng)的再生及可塑性，增加腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain derived neurotrophic factor, BDNF)的表達(dá)，來(lái)改善其認(rèn)知功能[30-31]。仝太山等[32]研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌患者化療后的認(rèn)知功能障礙與其自身BDNF水平下降具有顯著相關(guān)。茅東升等[33]報(bào)道NGF可減少 LPS 引起的 PC12 細(xì)胞的壞死和凋亡，對(duì)LPS損傷具有保護(hù)作用。還有研究報(bào)道NGF可抑制LPS誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞產(chǎn)生NO，同時(shí)抑制COX-2 mRNA的表達(dá)，具有抗炎作用[34]。前期研究中，我們發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)志皂苷元可促進(jìn)神經(jīng)突起生長(zhǎng)、促進(jìn)細(xì)胞存活，具有類似神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子作用，且還發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)志皂苷元可提高BDNF mRNA表達(dá)水平[16-18]。本研究選取2、2.5、3 μmol/L的遠(yuǎn)志皂苷元作用于LPS誘導(dǎo)的BV2細(xì)胞，觀察炎癥因子COX-2的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，遠(yuǎn)志皂苷元可不同程度地抑制炎癥相關(guān)蛋白 COX-2的表達(dá)，以2 μmol/L遠(yuǎn)志皂苷元抑制作用較為明顯(P<0.05)(圖2、3)。表明遠(yuǎn)志皂苷元可抑制神經(jīng)炎癥因子釋放，具有改善神經(jīng)損傷的作用。

本研究還觀察了遠(yuǎn)志皂苷元對(duì)SH-SY5Y接受BV2炎癥上清刺激后是否具有保護(hù)作用，發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)志皂苷元不僅可促進(jìn)BV2炎癥上清刺激后的SH-SY5Y細(xì)胞的存活，且呈劑量依賴性；還可顯著地降低SH-SY5Y接受BV2炎癥上清刺激后NO的釋放，這表明遠(yuǎn)志皂苷元可能具有降低炎癥反應(yīng)的作用，具有神經(jīng)保護(hù)作用。

綜上所述，遠(yuǎn)志皂苷元不僅可降低LPS誘導(dǎo)后炎癥介質(zhì)NO的釋放，抑制炎癥介質(zhì)COX-2的表達(dá)；也能促進(jìn)SH-SY5Y接受BV2炎癥上清刺激后細(xì)胞存活的同時(shí)抑制NO的釋放量，表明遠(yuǎn)志皂苷元具有類似神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子作用，改善神經(jīng)炎癥病變，具有潛在的緩解“化療腦”的作用。在下一步實(shí)驗(yàn)中，將建立不同的細(xì)胞及動(dòng)物模型，如化療藥物損傷模型等，進(jìn)一步觀察遠(yuǎn)志皂苷元的神經(jīng)保護(hù)作用，為“化療腦”的治療提供新方向、新思路。