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    自動紅細(xì)胞比容校正全血CRP測試結(jié)果特定蛋白分析儀的系統(tǒng)設(shè)計(jì)

    2020-12-07 03:30:32陳月玲王永強(qiáng)鄭繼波陳蘭蘭
    中國醫(yī)療設(shè)備 2020年11期
    關(guān)鍵詞:散射光全血校正

    陳月玲,王永強(qiáng),鄭繼波,陳蘭蘭

    1.山東大學(xué)附屬山東省耳鼻喉醫(yī)院眩暈科,山東濟(jì)南250022;2.濟(jì)南市第四人民醫(yī)院器材設(shè)備管理科,山東濟(jì)南250031;3.山東省立第三醫(yī)院信息網(wǎng)絡(luò)部臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)部,山東濟(jì)南250021;4.山東大學(xué)附屬山東省立醫(yī)院 臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)部,山東濟(jì)南250021

    引言

    目前,國內(nèi)外關(guān)于紅細(xì)胞比容(Hematocrit,HCT)對全血C-反應(yīng)蛋白(C-Reactive Protein,CRP)檢測的影響及其校正方法的研究成果有很多[1-4],如田野等[2]通過試驗(yàn)得出全血CRP水平與HCT值呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系的結(jié)論,并推導(dǎo)了使用HCT值校正全血CRP值的公式。隆維東等[4]測定并計(jì)算了最佳理論HCT范圍。但能夠?qū)崿F(xiàn)一臺設(shè)備同時(shí)實(shí)測HCT及CRP值,并使用HCT值對全血CRP檢測結(jié)果校正的分析儀卻很少。在臨床檢驗(yàn)科室的測試實(shí)踐中,當(dāng)遇到HCT偏離正常值的樣品時(shí),不得不人工校正后發(fā)布報(bào)告。因此,本文設(shè)計(jì)一款可實(shí)現(xiàn)自動測量HCT及CRP值,并進(jìn)行自動校正的全自動化儀器。

    1 系統(tǒng)設(shè)計(jì)

    1.1 工作原理

    采用散射比濁法[5-8]設(shè)計(jì)光學(xué)部件,采用散射光對全血樣本進(jìn)行HCT測定,自動對CRP測試值進(jìn)行校正。

    散射光檢測原理描述如圖1所示,采用650 nm波長的激光I0沿水平軸入射,通過待測樣本時(shí),光線被粒子顆粒散射,發(fā)生偏轉(zhuǎn),根據(jù)Rayleigh散射方程,散射光強(qiáng)度與粒子(免疫復(fù)合物)的濃度和體積成正比,即待測物越多,反應(yīng)后形成的粒子也越多,散射光強(qiáng)度也越強(qiáng)。通過測量散射光的強(qiáng)度,可計(jì)算出待測抗原的濃度。

    圖1 散射比濁法示意圖

    1.2 系統(tǒng)結(jié)構(gòu)

    本系統(tǒng)主要由機(jī)械結(jié)構(gòu)和電路系統(tǒng)組成。

    1.2.1 機(jī)械結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)

    機(jī)械結(jié)構(gòu)組件[9-10]由七大模塊組成,分別為:進(jìn)樣架模塊、樣本針模塊、試劑針模塊、攪拌針模塊、反應(yīng)盤模塊、試劑盤模塊、機(jī)架模塊。機(jī)械結(jié)構(gòu)組件分解圖如圖2所示。

    圖2 機(jī)械結(jié)構(gòu)模塊

    1.2.1.1 進(jìn)樣架系統(tǒng)

    進(jìn)樣架系統(tǒng)主要由進(jìn)樣位、出樣位,推動樣本架的步進(jìn)電機(jī)、相關(guān)導(dǎo)軌、同步帶、傳感器等組成,當(dāng)樣本架放入進(jìn)樣位后,由步進(jìn)電機(jī)驅(qū)動擋片將樣本架推至吸樣位,完成吸樣后,再由擋片將樣本架推至出樣位,完成自動進(jìn)樣。

    1.2.1.2 樣本針模塊

    樣本針模塊用于將血液樣本添加至反應(yīng)杯中,具有液面探測功能及垂直方向的防撞功能。

    1.2.1.3 試劑針模塊

    試劑針模塊用于將試劑盤模塊中低溫存儲的試劑抽吸到反應(yīng)杯中,同樣具有液面探測及垂直方向防撞功能。

    1.2.1.4 攪拌針模塊

    攪拌針模塊用于將樣本與稀釋液,或兩者混合液與第二試劑進(jìn)行混勻,保證充分反應(yīng)。

    1.2.1.5 反應(yīng)盤模塊

    反應(yīng)盤用于承載反應(yīng)杯,具有加熱功能,保證免疫反應(yīng)處于恒溫37℃的環(huán)境中。安裝有光學(xué)測試模塊,采用激光光源,激光透過反應(yīng)杯后,被光學(xué)感應(yīng)模塊接收。反應(yīng)盤帶有編碼盤,編碼盤與傳感器組件共同保證反應(yīng)盤按需求轉(zhuǎn)動到不同位置,進(jìn)行加樣、加試劑、攪拌及測試等工作。

    同一樣本對HCT及CRP測試時(shí),需要使用兩個(gè)反應(yīng)杯,第一反應(yīng)杯注入稀釋液后,樣本針將全血樣本注入該反應(yīng)杯中,測定該樣本的HCT,測試完成后,由樣本針從第一反應(yīng)杯中吸取一定量樣本注入第二反應(yīng)杯中,由試劑針注入試劑,反應(yīng)完成后再次使用散射法對第二反應(yīng)杯中的混合樣進(jìn)行CRP值的測試,并使用第一反應(yīng)杯中測的HCT對CRP值進(jìn)行校正。

    1.2.1.6 試劑盤模塊

    試劑盤模塊與反應(yīng)盤模塊控制方式類似,同樣使用編碼盤進(jìn)行定位和轉(zhuǎn)動控制。為避免在機(jī)試劑蒸發(fā)或溫度原因?qū)е碌脑噭┰跈C(jī)時(shí)間縮短,試劑盤配有制冷模塊。

    1.2.1.7 機(jī)架模塊

    機(jī)架模塊包含整機(jī)的手板件外殼、用于承載其他模塊的機(jī)加工件或鈑金件等。

    1.2.2 硬件結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)

    1.2.2.1 設(shè)計(jì)原則

    整機(jī)布局應(yīng)注意大功率器件,應(yīng)布在電路板邊緣,電機(jī)、泵、閥驅(qū)動電路設(shè)計(jì)為獨(dú)立單元,避免大功率器件在啟動、運(yùn)行及停止時(shí)產(chǎn)生的噪音影響其他系統(tǒng)的正常運(yùn)行。儀器電路板較多,運(yùn)動機(jī)構(gòu)復(fù)雜[11-12],要充分考慮印刷電路板(Printed CircuitBoard Assembly,PCBA)的連接線、風(fēng)道的設(shè)計(jì)。電路板與液路應(yīng)分開,液路采用兩段或多段連接的方式,方便拆卸維修。同一邏輯運(yùn)動下的功能實(shí)現(xiàn)應(yīng)盡量在同一單元內(nèi)完成,減少PCBA之間的通訊。

    1.2.2.2 架構(gòu)設(shè)計(jì)

    為降低研發(fā)風(fēng)險(xiǎn),提高產(chǎn)品的擴(kuò)展性,采用目前廣泛應(yīng)用的微處理器ARM(Advanced RISC Machines,ARM)平臺[13-14]。ARM單片機(jī)與上位機(jī)進(jìn)行通訊,設(shè)備運(yùn)行邏輯、數(shù)據(jù)計(jì)算等由上位機(jī)完成。

    選用意法半導(dǎo)體的STM32F407V單片機(jī),使用CortexIM-M4為內(nèi)核作為主控芯片,負(fù)責(zé)整個(gè)硬件平臺的指令控制、數(shù)據(jù)運(yùn)算及信號處理,通過設(shè)備內(nèi)的光電傳感器采集數(shù)據(jù),然后通過主控芯片內(nèi)相應(yīng)的模塊進(jìn)行信號處理,再通過中央處理器進(jìn)行算法控制,解析出結(jié)果值并在上位機(jī)上顯示[15-17]。

    主控板使用串口與上位機(jī)通訊,主控板與各驅(qū)動板之間則使用控制器域網(wǎng)(Controller Area Network,CAN)通訊。

    上位機(jī)與主控板及各模塊控制板之間的通訊如圖3所示。主控板及各模塊控制板實(shí)物圖如圖4~6所示。主控板為控制中樞,包括控制電源,各運(yùn)動機(jī)構(gòu)的運(yùn)行邏輯控制等。各模塊控制板則用于本模塊的驅(qū)動及控制,并將結(jié)果通過主控板反饋至上位機(jī)系統(tǒng)。

    2 軟件設(shè)計(jì)

    上位機(jī)軟件負(fù)責(zé)界面的操作、結(jié)果的顯示,可進(jìn)行樣本測試、質(zhì)控測試、定標(biāo)測試的申請;以及查詢、打印等必備的輔助功能。

    圖3 硬件通訊拓?fù)?/p>

    圖4 主控板

    圖5 針類模塊控制板

    圖6 盤類模塊控制板

    下位機(jī)進(jìn)行時(shí)序控制、邏輯控制、數(shù)據(jù)運(yùn)算等,將分析后的結(jié)果傳送到上位機(jī),在上位機(jī)顯示界面上顯示。

    上位機(jī)軟件,人機(jī)交互功能的設(shè)計(jì)如圖7所示,軟件系統(tǒng)分為菜單、試劑、任務(wù)、指控及結(jié)果模塊。菜單為功能入口,提供各類功能的接入;試劑模塊則用于顯示試劑剩余量、批號等相關(guān)信息;任務(wù)入口用于新增測試樣本信息的錄入,其中需要選擇樣本為全血標(biāo)本還是血漿/血清標(biāo)本;質(zhì)控則用于儀器質(zhì)控結(jié)果的查看及匯總功能等,同時(shí)質(zhì)控測試時(shí),信息錄入也在本窗口;結(jié)果則為樣本測試結(jié)果的匯總顯示、查詢等。

    圖7 人機(jī)交互功能

    在儀器進(jìn)入工作狀態(tài)時(shí),主程序首先對儀器的電路進(jìn)行整機(jī)初始化,檢查儀器的各運(yùn)行動作是否異常,在確認(rèn)無異常后,儀器自動進(jìn)行日檢,日檢執(zhí)行完成后,儀器檢測清洗桶清洗液的用量、試劑位等的檢測。檢測完成后,可進(jìn)入執(zhí)行流程環(huán)節(jié),流程結(jié)束后輸出結(jié)果。具體流程如圖8所示。

    圖8 系統(tǒng)流程圖

    3 性能測試與驗(yàn)證

    本分析儀采用了良好的人機(jī)交互設(shè)計(jì),方便操作者使用。儀器的實(shí)物圖如圖9所示。人機(jī)交互界面如圖10所示。

    圖9 產(chǎn)品實(shí)物圖

    圖10 人機(jī)交互界面

    3.1 性能驗(yàn)證

    CRP存在于人血漿或血清中,HCT會對該項(xiàng)目的測試結(jié)果產(chǎn)生較大影響。因此,本儀器設(shè)計(jì)時(shí),采用散射光對全血樣本進(jìn)行特定蛋白濃度及HCT的測定,實(shí)現(xiàn)自動HCT校正全血CRP測試結(jié)果。

    使用CRP試劑及配套的定標(biāo)品、質(zhì)控品及血清樣本,對設(shè)備進(jìn)行定標(biāo),并進(jìn)行質(zhì)控測試,質(zhì)控通過后,對設(shè)備進(jìn)行準(zhǔn)確度、重復(fù)性及線性的測試[18-19]。

    3.1.1 準(zhǔn)確度

    儀器準(zhǔn)確度采用編號為ERM-DA474/IFCC的CRP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行測試,靶值為41.2 mg/L。對標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測定3次,測試結(jié)果記為(xi),分別為 43.3、43.1、42.8 mg/L計(jì)算相對偏差結(jié)果分別為5.10%、4.61%和3.88%,按照CRP測定試劑盒行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[20],相對偏差應(yīng)≤15%。

    3.1.2 重復(fù)性

    使用高、低值臨床血清樣本對儀器進(jìn)行測試,計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)偏差及變異系數(shù),變異系數(shù)應(yīng)當(dāng)不大于10%[20],測試結(jié)果表明在臨床高值樣本測試結(jié)果CV值為0.79%,低值樣本測試結(jié)果CV值為3.4%,結(jié)果均優(yōu)于標(biāo)準(zhǔn)要求。

    3.1.3 線性

    采用高值臨床血清樣本,按照原倍、1/2、1/4、1/16、1/64、1/400的稀釋比例進(jìn)行線性測試,計(jì)算線性相關(guān)系數(shù)。測試數(shù)據(jù)結(jié)果顯示線性相關(guān)系數(shù)R為0.9998。

    通過上述測試表明,在使用血清樣本時(shí),本文中設(shè)計(jì)開發(fā)的特定蛋白儀具有良好的實(shí)用性。

    3.2 全血樣本的CRP測試及結(jié)果校正

    3.2.1 HCT與全血CRP數(shù)值的線性關(guān)系

    對全血CRP進(jìn)行測試時(shí),對測試結(jié)果進(jìn)行了換算,換算為與血漿樣本等值的結(jié)果見式(1)。

    式中:CRPW-全血CRP濃度值;

    CRPWR-全血CRP濃度值實(shí)測值;

    HCt-固定HCT。

    其中Hct值為特定蛋白儀內(nèi)置可修改參數(shù),一般設(shè)置為40%。

    將公式(1)編程輸入軟件系統(tǒng)中,則在測試獲得結(jié)果后,使用固定的HCT40%自動校正全血測試結(jié)果。

    由上式可看出,全血CRP濃度值與HCT成線性關(guān)系。驗(yàn)證如下。

    采集正常體檢人員EDTA抗凝血兩管,第一管使用3000 r/min離心10 min,第二管靜置發(fā)生血沉后,用移液槍吸取底層紅細(xì)胞,或滴加第一管血漿,并充分混勻的方式,分別使用Sysmex XN-2000儀器測試HCT,以及本文所研發(fā)的特定蛋白儀測試全血CRP濃度。二者關(guān)系如圖11所示。

    3.2.2 HCT的測定

    為實(shí)現(xiàn)使用HCT對全血CRP進(jìn)行校正,本儀器采用散射光測試的方法,獲得HCT數(shù)值。

    全血樣本被吸注到預(yù)先加入了稀釋液的反應(yīng)杯中,反應(yīng)盤將該反應(yīng)杯旋轉(zhuǎn)至測試位,獲得散射光強(qiáng)度值,并通過曲線獲得HCT值,利用該HCT值進(jìn)行校正。散射光強(qiáng)度值(為方便表示,對散射光強(qiáng)度進(jìn)行了換算)與HCT的關(guān)系如圖12所示。

    圖11 全血CRP濃度與HCT的線性關(guān)系

    圖12 HCT與散射光強(qiáng)度值

    由圖12可知,HCT與散射光強(qiáng)度值有線性關(guān)系,因此,可使用二者關(guān)系建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,用于根據(jù)散射光強(qiáng)度計(jì)算HCT值。

    3.2.3 利用HCT對全血CRP的校正

    使用3.2.1中以獲得的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。根據(jù)隆維東[4]等研究結(jié)論,校正計(jì)算的公式為式(2)。

    將公式(2)輸入至儀器計(jì)算程序中。

    取3.2.1中,梯度HCT樣本,使用修改了校正公式特定蛋白儀進(jìn)行全血CRP測定。每個(gè)標(biāo)本測定三次,取平均值列于表1校正值一列。

    表1 不同HCT校正CRP值

    根據(jù)隆維東等[4]的結(jié)論,當(dāng) HCT 處于(36.0±3.5)%范圍時(shí),全血標(biāo)本在使用式(1)的方式校正時(shí),與血清標(biāo)本直接測試結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。故以HCT38%樣本CRP濃度為該樣本真值(49.15 mg/L),使用該真值計(jì)算與所有校正值的相對偏差,列于表1相對偏差一列。不同HCT梯度的同一來源樣本的CRP測試結(jié)果均得到了校正,符合標(biāo)準(zhǔn)要求[20]。

    4 結(jié)論

    本儀器設(shè)計(jì)的HCT測試功能獲取的HCT值精確度雖無法與血球儀精度相媲美,但可以有效的校正CRP的值,濃度值的相對偏差,均小于15%,可以滿足臨床要求。

    本分析儀其進(jìn)樣架系統(tǒng)具有一定的先進(jìn)和優(yōu)越性,可以避免人工因素的影響,大幅度提高檢測效率;樣本針、試劑針和攪拌針,三個(gè)模塊分工協(xié)作,可以極大的提高運(yùn)行效率;配合清洗部分,可以減少一定耗材損耗,降低使用成本;反應(yīng)盤和試劑盤模塊都采用特殊設(shè)計(jì)的編碼盤,根據(jù)任務(wù)需求,轉(zhuǎn)動到不同的部位,反應(yīng)盤配合檢測系統(tǒng),可以準(zhǔn)確無誤的進(jìn)行判別,提高診斷的準(zhǔn)確性以及檢測效率;試劑盤配合冷卻模塊,可以減少試劑的損耗,降低一定的使用成本。

    本分析儀的硬件部分,采取電路板和液路分開布置,電路板以及液路部分都在儀器邊緣位置,方便拆卸,對后續(xù)的售后維護(hù)提供了極大的便利。本分析儀的軟件部分,采用良好的人機(jī)交互界面,通俗易懂,方便使用者的操作。

    本分析儀沒有加入閉蓋穿刺功能和獨(dú)立的急診位,這兩個(gè)不足之外將會是我們以后研究和完善的方向。量產(chǎn)機(jī)可參考本文的設(shè)計(jì)思路,加入閉蓋穿刺、設(shè)立急診位等方便臨檢的功能??煽康馁|(zhì)量、持續(xù)穩(wěn)定的設(shè)備運(yùn)行,是臨檢科室的主要要求,新開發(fā)的設(shè)備,應(yīng)當(dāng)進(jìn)行足夠時(shí)間的可靠性試驗(yàn),運(yùn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)等,在充分驗(yàn)證設(shè)備可靠性基礎(chǔ)上注冊并量產(chǎn)。

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