新孢子蟲病的臨床癥狀及診斷方法

李會猛，孫亞青

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新孢子病是牛流產(chǎn)的主要原因，這種疾病的一個關(guān)鍵特征是牛的感染是一種長期的、持續(xù)的感染，在懷孕期間被有效地傳染給胎兒。雖然懷孕牛的胎兒感染可能導(dǎo)致流產(chǎn)，但大多數(shù)感染的胎兒不是流產(chǎn)，而是先天感染。先天感染的小母牛在懷孕后能夠?qū)⒏腥緜魅窘o下一代，從而在牛群中保持感染。

1 臨床表現(xiàn)

新孢子蟲病的主要表現(xiàn)是妊娠中期流產(chǎn)，流產(chǎn)牛無其他臨床癥狀的胎兒自溶。絕大多數(shù)墮胎發(fā)生在妊娠中期，妊娠4～6 個月。木乃伊胎與新孢子蟲感染有關(guān)。在罕見的情況下，胎兒新孢子蟲感染可能導(dǎo)致足月小腿癱瘓或腦脊髓炎所致的癱瘓。80%～90%的血清陽性（感染）奶牛生產(chǎn)明顯正常的小牛，這是先天感染的血清學(xué)基礎(chǔ)上，主要以腦脊髓炎為主要病理變化，腦脊髓中有其組織包囊，大腦至腰部脊髓區(qū)可見非化膿性炎，小腦發(fā)育不全[1]。這些先天感染的小牛在維持牛群感染方面起著重要的作用，并且增加了流產(chǎn)的風(fēng)險。

小母牛和奶牛感染新孢子蟲一年四季均可發(fā)生，往往是局部散發(fā)或是地方性流行，以春末秋初最為常見。奶牛流產(chǎn)有兩種模式，分為地方病和流行病發(fā)生。在地方性模式中牛群體流產(chǎn)率每年超過5%。流行病的模式中的特點是在相對較短的時間內(nèi)高比例流產(chǎn)。犬的臨床癥狀主要集中在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和骨骼肌中，同時伴有壞死性肺化膿性腦炎、心肌炎以及心肌變性等病變，可引起嚴(yán)重的神經(jīng)肌肉損傷，有些還可發(fā)生心力衰竭，一般有腦炎、肌炎、肝炎或持續(xù)性肺炎等。感染母牛妊娠后產(chǎn)死胎、衰弱胎兒以及先天性神經(jīng)肌肉損傷的小牛。胎牛主要以神經(jīng)系統(tǒng)和心臟肝臟等病變?yōu)橹?，心臟和骨骼肌出現(xiàn)灰白色病灶，腦組織有灰色或黑色的小范圍壞死灶和水腫。胎兒易發(fā)生自溶和木乃伊化，胎盤子葉以壞死和非化膿性細(xì)胞浸潤并出現(xiàn)局灶性病變[2]。流產(chǎn)的胎兒通常會在體腔內(nèi)自溶，并伴有漿液的積聚。很少有細(xì)微的大體病變，由骨骼肌或心臟的蒼白病灶組成。組織學(xué)病變包括廣泛的非化膿性浸潤。最具診斷意義的病變位于腦內(nèi)，由散在的非化膿性細(xì)胞浸潤灶和偶爾的壞死灶組成。原生動物囊腫通常不能在常規(guī)染色的玻片上看到。其他持續(xù)發(fā)現(xiàn)的組織學(xué)病變包括非化膿性心外炎或心肌炎、局灶性非化膿性肌炎和非化膿性門脈型肝炎，常伴有局灶性肝壞死。原生動物感染的特定診斷通?？梢愿鶕?jù)組織學(xué)病變進行。應(yīng)用新孢子蟲抗體免疫組織化學(xué)檢測胎兒組織中的寄生蟲是一種有效的方法。在胎腦和腎臟切片中，新孢子蟲免疫組織化學(xué)最為成功。

2 診斷方法

1）組織學(xué)檢查：通常采集寄生在腦、肺、心臟、肝臟、腎臟、肌肉、胎盤和其他器官的散播性炎癥病變的地方，檢測到新孢子蟲速殖子或組織包囊[3]。

2）電鏡下觀察新孢子蟲病的組織包囊出現(xiàn)在神經(jīng)組織中，包囊厚度可達到4μm。但是要與弓形蟲相區(qū)分，弓形蟲主要出現(xiàn)在許多組織器官中，厚度沒有新孢子蟲厚，厚度不超過1μm。

3）免疫組織血染色：采集大腦、脊髓等病變部位制作切片，用免疫組織化學(xué)染色可檢測各種寄生動物體內(nèi)的新孢子蟲，依照新孢子蟲血清可以使蟲體特異性著染來進行特異性診斷，判斷新孢子蟲病感染。

4）凝集試驗（AT）、免疫印跡（IB）、間接熒光抗體試驗（IFAT）和使用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）都能有效鑒定新孢子蟲，ELISA 能檢測新孢桿菌抗體。此過程快速、廉價且具有優(yōu)異的敏感性和特異性。

5）分子生物學(xué)診斷：運用PCR 技術(shù)檢測新孢子蟲的DNA，確診新孢子蟲感染。

3 傳播

新生兒感染的傳播是復(fù)雜的，目前仍在調(diào)查中。?？赡芡ㄟ^感染卵囊水平（產(chǎn)后）感染，或妊娠期間感染的垂直胎盤傳播有多種方式可獲得新孢子感染。在牛新孢子病中，牛是中間宿主。新孢子蟲在中間宿主動物身體中擴散，并在各種器官中入侵細(xì)胞，在入侵部位造成傷害。組織囊腫階段，包含多個被厚囊壁包圍的緩凝骨細(xì)胞，主要出現(xiàn)在神經(jīng)組織中，并引起輕微的炎癥反應(yīng)，但可持續(xù)很長一段時間。最終的宿主在球蟲腸道感染后脫離卵囊期。新孢子蟲在中間宿主群中有兩種傳播方式，垂直傳播和水平傳播，攝入卵囊感染是中間宿主與終末宿主之間的主要是水平傳播途徑[4]。懷孕期間，牛不需要獲得感染，以使其胎兒感染。許多受感染的妊娠母牛是長期感染的牛的垂直傳播的結(jié)果，這種通過牛的垂直傳播是在牛群中維持新孢子蟲感染的主要方法。在未感染的牛群中，有血清學(xué)證據(jù)表明，產(chǎn)后感染水平較低來自未知來源，但垂直傳播似乎是感染的主要途徑。

4 防控

1）牛群中傳播新孢子蟲的一個主要方法是通過感染長期感染的牛的胎兒。這些受感染的奶牛可以根據(jù)它們的血清學(xué)效價或根據(jù)以前的新孢子蟲流產(chǎn)史或先天性感染來確定。有了這些知識，控制感染的重點可以是減少牛群中受感染的牛的數(shù)量，并限制被感染的替代牛進入牛群。可以在知道牛群重復(fù)流產(chǎn)的風(fēng)險較高的情況下，對已證實有新散居性流產(chǎn)的奶牛作出選擇決定。血清呈陽性的奶牛也有更大的流產(chǎn)風(fēng)險，在這些牛所生的小牛中，先天性感染的可能性很高。

2）減少狗在牛場出沒可以降低潛在風(fēng)險，避免牛群誤食污染的糞便，造成感染。

3）全部清除可能被感染的組織，如來自環(huán)境的流產(chǎn)胎兒和胎盤，可能成為易感的傳染源。此外，糞便污染的飼料和水源也要注意，從根源上杜絕新孢子蟲病的傳播。

5 總結(jié)

新孢子蟲病的發(fā)生流行，嚴(yán)重制約著養(yǎng)牛行業(yè)的經(jīng)濟發(fā)展，要著重提高養(yǎng)殖戶對新孢子蟲的危害的認(rèn)識，積極開展防控措施，加強對疫區(qū)動物的檢查力度，嚴(yán)禁在疫區(qū)引進牛群，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)陽性牛只，立即淘汰處理，從根源上保證陰性牛群的健康發(fā)展。