臥龍自然保護(hù)區(qū)一例野豬死亡的原因分析

何廷美，鐘銳，施小剛，畢波，黃迪，周瀟瀟，李敏，周紫峣，彭廣能*

（1.四川臥龍國家級自然保護(hù)區(qū)管理局四川阿壩 623000；2.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院成都 611130；3.成都市動物疫病預(yù)防控制中心成都 610041）

野豬，哺乳綱偶蹄目豬科豬屬，雜食動物，其分布幾乎遍及中國。棲息環(huán)境從森林到灌叢、草地和沼澤都有分布，與家畜、人類重疊面積廣，是人類影響環(huán)境和自然區(qū)域之間的重要聯(lián)系[1]。同時野豬作為眾多傳染性病原的宿主在野生動物和家養(yǎng)動物疾病傳播中起著重要作用，例如結(jié)核分枝桿菌[2,3]。筆者就一例野豬的死亡原因展開調(diào)查，為保護(hù)臥龍自然保護(hù)區(qū)野生動物提供一定的科學(xué)資料。

1 臨床癥狀及解剖

2020 年4 月2 日，保護(hù)站巡護(hù)工作人員在臥龍自然保護(hù)區(qū)耿達(dá)鎮(zhèn)崔家磨子溝（經(jīng)度：103.29381；緯度：31.08219）處發(fā)現(xiàn)一只野豬，不能站立行走，側(cè)躺于溝谷旁，呼吸微弱，經(jīng)過搶救無效死亡。剖解野豬體況較差，頭面部、肩胛部和四肢有大面積脫毛、皮屑和痂皮，被毛根部有出血點，體表有多量蜱蟲寄生；腹腔臟器可見脾臟體積偏小，胃部有出血點，小腸腸道有輕微粘連，盲腸中有大量泥沙碎石沉積，體積膨大，其余未見異常。

2 細(xì)菌分離鑒定：

將病料（心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟）無菌接種在LB 普通瓊脂培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)。12h 后可見在普通LB 培養(yǎng)基上生長出表面光滑濕潤、圓形凸起、邊緣整齊的乳白色菌落（見圖1a）。革蘭氏染色鏡檢，油鏡下可見大量藍(lán)紫色球菌（見圖1b）。分離菌株用細(xì)菌16S rDNA 通用引物擴(kuò)增測序，測序結(jié)果經(jīng)BLAST同源性對比后確認(rèn)該菌為豬葡萄球菌。

3 病毒核酸檢測

圖1 a 分離株菌落形態(tài)

圖1 b 革蘭氏染色后油鏡下細(xì)菌形態(tài)（1000×）

參照北京億森寶生物科技有限公司通用型單重?zé)晒釶CR 檢測試劑盒，對豬瘟、非洲豬瘟、豬呼吸與繁殖綜合征、口蹄疫、豬圓環(huán)病毒Ⅱ型（PCV2）核酸進(jìn)行q PCR 或者q RT-PCR 擴(kuò)增。檢測結(jié)果為PCV2 陽性，其余病毒核酸檢測均為陰性。

4 腸道寄生蟲檢查

采集大腸和小腸內(nèi)容物，進(jìn)行漂浮和沉淀法鏡檢未見寄生蟲蟲卵。提取糞便DNA，設(shè)計隱孢子蟲、十二指腸賈第蟲、畢氏腸微孢子蟲、芽囊原蟲的特異性引物，通過巢氏PCR 擴(kuò)增，1%瓊脂糖凝膠電泳對其進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果均為陰性。

5 組織病理學(xué)

對該野豬心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胰腺、小腸、皮膚進(jìn)行了組織經(jīng)病理學(xué)檢查，結(jié)果見圖2a-i。

6 討論

首先，該野豬有嚴(yán)重的寄生蟲寄生和多量蜱蟲感染，導(dǎo)致體況較差。蜱蟲不僅是多種疾病的傳播媒介，還可在叮咬時釋放毒素引發(fā)蜱癱，蜱癱主要是由于神經(jīng)系統(tǒng)的功能削弱，宿主運動性纖維傳導(dǎo)障礙[4]，引起上行性肌肉麻痹而導(dǎo)致全身無力、四肢癱瘓。同時該毒素也有可能導(dǎo)致宿主心律失常、呼吸衰竭而亡[5]。所以多量蜱蟲寄生可能是導(dǎo)致野豬喪失行動能力同時死亡的加速器。

同時該野豬PCV-2 檢測呈陽性。PCV-2 感染可能會導(dǎo)致機體內(nèi)淋巴細(xì)胞的凋亡和耗竭、干擾素生成功能受損，機體免疫反應(yīng)降低，引起嚴(yán)重的免疫抑制和多系統(tǒng)病變[6]。

圖2 a 心：陳舊性梗死。HE，Ba r=50μm，200×.

圖2 b 肝：淤血及含鐵血黃素沉積。HE，Ba r=50μm，200×.

圖2 c 脾：大量含鐵血黃素沉積。HE，Ba r=50μm，200×.

圖2 d 肺：肺泡壁增厚淤血。HE，Ba r=50μm，200×.

圖2 e 肺：肺出血，肺泡腔內(nèi)見數(shù)量不等的紅細(xì)胞。HE，Ba r=50μm，200×.

圖2 f 腎：腎小管上皮細(xì)胞變性壞死，腎小球系膜基質(zhì)增生。HE，Ba r=50μm，200×.

圖2 g 胰腺：胰腺及胰島組織結(jié)構(gòu)正常，未見明顯組織病理損傷。HE，Ba r=50μm，200×.

圖2 h 小腸：小腸黏膜層壞死。HE，Ba r=200μm，40×.

圖2 i 皮膚：寄生蟲感染，毛囊及皮脂腺數(shù)量明顯減少，皮膚表面形成痂皮，在痂皮下方或內(nèi)部見大量蟲體。HE，Ba r=200μm，40×.

豬葡萄球菌感染可能引起豬的滲出性皮炎、化膿性肺炎、敗血性多發(fā)性關(guān)節(jié)炎，嚴(yán)重者可能因敗血癥死亡[7]。由此推斷該野豬的死亡可能是由于在營養(yǎng)不良、免疫力低下的狀態(tài)下繼發(fā)了豬葡萄球菌感染導(dǎo)致的。

最后，病理切片顯示該野豬肺臟存在出血的現(xiàn)象，肝臟有含鐵血黃素沉積，可能是由于內(nèi)臟被外力創(chuàng)傷或者某些出血性疾病所致。而野豬小腸黏膜層也存在壞死的現(xiàn)象，同時剖檢可見整個小腸有輕微粘連的情況，盲腸有大量的碎石泥沙堆積，胃部有出血點，不排除存在急腹癥等嚴(yán)重的胃腸道疾病，而這些疾病一般病情多變，發(fā)展迅速，處理不當(dāng)也可能造成死亡。

綜上所述，推測造成該野豬死亡的原因可能是蜱蟲等寄生蟲感染和PCV-2 陽性，雙重“打擊”導(dǎo)致豬只免疫力極度低下，同時繼發(fā)了豬葡萄球菌感染造成多器官功能衰竭而死。