食品安全免疫層析檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展

李姣

湖南華中宏泰檢測(cè)評(píng)價(jià)有限公司 湖南長(zhǎng)沙 410000

常見(jiàn)的食品安全快速檢測(cè)方法主要包括化學(xué)比色法、酶聯(lián)免疫吸附法、免疫層析技術(shù)（immuno chromatogr aphyassay，ICA）、電化學(xué)分析法和生物發(fā)光等。其中免疫層析技術(shù)在1984年首次投入商業(yè)使用，用于簡(jiǎn)單的基于尿液的家庭妊娠測(cè)試。與一般常規(guī)方法相比，不僅具有簡(jiǎn)單快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，而且在檢測(cè)時(shí)間、檢測(cè)成本、儀器設(shè)備、人員要求、測(cè)試成本、安全性等方面存在諸多優(yōu)勢(shì)，使得ICA 被廣泛應(yīng)用于食品安全、環(huán)境監(jiān)控和醫(yī)療診斷領(lǐng)域，特別適合生產(chǎn)者和監(jiān)管人員篩查使用。在食品安全檢測(cè)領(lǐng)域，競(jìng)爭(zhēng)法和雙抗夾心法是免疫層析技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)模式，現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用于大分子蛋白質(zhì)、食源性致病菌、真菌毒素、農(nóng)獸藥殘留、非法添加物等的檢測(cè)。本文旨在總結(jié)當(dāng)前ICA 在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用進(jìn)展，歸納分析我國(guó)的免疫層析相關(guān)方法標(biāo)準(zhǔn)，并討論目前ICA 的不足以及在未來(lái)應(yīng)用中的發(fā)展方向，以期為生產(chǎn)者、實(shí)驗(yàn)室及相關(guān)監(jiān)管部門(mén)提供切實(shí)可行的技術(shù)參考，進(jìn)一步推動(dòng)ICA 在我國(guó)的應(yīng)用和發(fā)展[1]。

1 食品安全快速檢測(cè)概述

食品安全快速檢測(cè)通常認(rèn)為是包括樣品制備在內(nèi)、能夠在短時(shí)間內(nèi)得到較準(zhǔn)確結(jié)果的檢測(cè)技術(shù)。按照應(yīng)用場(chǎng)合和檢測(cè)時(shí)間的不同，食品安全快速檢測(cè)方法可分為實(shí)驗(yàn)室快速檢測(cè)方法和現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)方法。實(shí)驗(yàn)室快速檢驗(yàn)方法是指包括樣品制備在內(nèi)，能夠在2h 以?xún)?nèi)得到檢驗(yàn)結(jié)果的檢測(cè)方法，或相比傳統(tǒng)檢驗(yàn)方法縮短1/2 或1/3檢驗(yàn)時(shí)間的微生物檢驗(yàn)方法；現(xiàn)場(chǎng)快速檢驗(yàn)是指可用于現(xiàn)場(chǎng)并且在30min 內(nèi)可得到檢驗(yàn)結(jié)果的檢測(cè)方法，如果能夠在十幾分鐘甚至幾分鐘內(nèi)得到檢測(cè)結(jié)果，可將其視為比較理想的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)方法。

2 食品安全免疫層析檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展

2.1 高通量檢測(cè)

單重免疫層析試紙條一般含有一條檢測(cè)線和一條質(zhì)控線，可以用來(lái)檢測(cè)單一的分子，目前，這種檢測(cè)模式正朝著“多靶標(biāo)”高通量的檢測(cè)方向發(fā)展。一方面，企業(yè)通過(guò)將多個(gè)單一試紙條組裝在一個(gè)卡殼里，制備多聯(lián)卡，以實(shí)現(xiàn)對(duì)多種藥物的同時(shí)檢測(cè)，例如克倫特羅-萊克多巴胺-沙丁胺醇三聯(lián)檢測(cè)卡就是這種類(lèi)型，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)β-激動(dòng)劑克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇3 種藥物進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)。此外，研發(fā)人員通過(guò)制備具有“類(lèi)”識(shí)別性的抗體，來(lái)實(shí)現(xiàn)多靶標(biāo)檢測(cè)的目的。通過(guò)分析磺胺類(lèi)抗生素藥物的結(jié)構(gòu)，設(shè)計(jì)出含有磺胺母核結(jié)構(gòu)的半抗原，在此基礎(chǔ)上篩選獲得了可以同時(shí)識(shí)別27 種磺胺抗生素藥物的單克隆抗體，對(duì)應(yīng)的免疫層析試紙條可對(duì)27 種磺胺類(lèi)抗生素藥物進(jìn)行高通量檢測(cè)。另外一種形式的多重檢測(cè)試紙條是在單一檢測(cè)線試紙條的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的、具有多條檢測(cè)線的免疫層析試紙條，目前也受到了很大的關(guān)注。該技術(shù)擴(kuò)大了檢測(cè)區(qū)的范圍，在原來(lái)的檢測(cè)區(qū)噴涂多條檢測(cè)線，針對(duì)不同的靶標(biāo)，將多種抗體的標(biāo)記物混合固相化。通過(guò)在硝酸纖維素膜噴點(diǎn)了三條檢測(cè)線和一條質(zhì)控線，成功建立了多重免疫層析試紙條方法，實(shí)現(xiàn)了對(duì)三類(lèi)17 種激素藥物的同時(shí)檢測(cè)，靈敏度可以達(dá)到0.005ng·mL-1。

2.2 致病菌檢測(cè)

在各類(lèi)食源性致病菌，沙門(mén)氏菌、大腸桿菌等病菌均是常見(jiàn)的病菌。邵晨東等以條帶狀將抗沙門(mén)氏菌O9 抗原的特異性單克隆抗體4-7-7、羊抗鼠IgG，分別包被于硝酸纖維膜的檢測(cè)帶以及質(zhì)控帶上，采用膠體金對(duì)另一株單抗3-47-0 進(jìn)行標(biāo)記，并將之吸附于結(jié)合墊上以制備成沙門(mén)氏菌O9 抗原試紙條。對(duì)沙門(mén)氏菌O9 抗原而言，這一試紙條的檢測(cè)限為4×105CFU。目前，對(duì)于食品中存在的引發(fā)疾病的病菌，往往會(huì)在進(jìn)行增菌的基礎(chǔ)上，進(jìn)行分離、培養(yǎng)、生化鑒定進(jìn)而對(duì)病菌進(jìn)行檢測(cè)，這一方法不但會(huì)花費(fèi)較長(zhǎng)時(shí)間，操作復(fù)雜、流程繁瑣，并且極易受到主觀以及環(huán)境因素的影響而使檢測(cè)結(jié)果的精準(zhǔn)性大打折扣，而GICA 技術(shù)則能有效解決操作流程繁瑣、特異性以及靈敏度均較低的問(wèn)題[2]。

2.3 近紅外光譜技術(shù)

近紅外光譜技術(shù)具有制樣簡(jiǎn)單、非破壞性、可實(shí)現(xiàn)快速無(wú)損和綠色環(huán)保遠(yuǎn)程分析檢測(cè)等優(yōu)勢(shì)，在食品質(zhì)量監(jiān)控領(lǐng)域中發(fā)揮越來(lái)越重要的作用。Wang 等以蒙牛、伊利、萬(wàn)達(dá)山奶粉為檢測(cè)樣本通過(guò)添加試驗(yàn)?zāi)M實(shí)際摻假樣品，利用近紅外光譜分析檢測(cè)奶粉中摻假淀粉的情況。然而，由于物質(zhì)通常在近紅外區(qū)的吸收系數(shù)小，因此不適用一些痕量物質(zhì)的分析。未來(lái)近紅外光譜技術(shù)仍需不斷完善才能發(fā)揮更大作用，如將其與化學(xué)計(jì)量法相結(jié)合，提高光譜圖分析與試驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性；此外，紅外光譜檢測(cè)儀也需要由大型研究級(jí)向小型便攜式轉(zhuǎn)換，同時(shí)建立更加全面廣泛的全球性數(shù)據(jù)庫(kù)，進(jìn)一步促進(jìn)該技術(shù)的應(yīng)用和發(fā)展。

3 結(jié)語(yǔ)

食品安全問(wèn)題直接關(guān)系著人們的生命安全和生活質(zhì)量，影響著民眾對(duì)社會(huì)、對(duì)政府的信任，保證食品安全的第一步就是對(duì)食品進(jìn)行安全檢測(cè)，快速檢測(cè)技術(shù)在食品安全監(jiān)督中的應(yīng)用可以有效提高食品安全的監(jiān)督效率和科學(xué)性。免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、方便、快速和經(jīng)濟(jì)性等優(yōu)點(diǎn)，在食品安全快速檢測(cè)中充當(dāng)著至關(guān)重要的作用，將免疫原理結(jié)合現(xiàn)代分析技術(shù)和手段探索開(kāi)發(fā)新型食品安全快速檢測(cè)新技術(shù)的研究正在逐步進(jìn)行，利用免疫學(xué)技術(shù)研發(fā)的快速檢測(cè)試紙條及試劑盒產(chǎn)品具有廣闊的市場(chǎng)前景，在食物過(guò)敏原快速檢測(cè)領(lǐng)域及轉(zhuǎn)基因食品的快速檢測(cè)領(lǐng)域還可以得到更廣泛的應(yīng)用，免疫學(xué)快速檢測(cè)方法在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用優(yōu)勢(shì)會(huì)日漸明顯。