微柱凝膠技術(shù)在ABO血型不合新生兒溶血病診斷及輸血前檢驗(yàn)中的應(yīng)用

李冰雪，劉思岐

(1.安陽(yáng)市第三人民醫(yī)院 輸血科，河南 安陽(yáng) 455000；2.滑縣人民醫(yī)院 輸血科，河南 安陽(yáng) 456400)

新生兒溶血病(hemolytic diseases of newborn，HDN)是由于母體與新生兒血型不合引發(fā)的血型免疫反應(yīng)，由于母體內(nèi)出現(xiàn)與胎兒血型抗原不搭配的血型抗體，并通過(guò)胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)引起同族免疫性溶血，其中ABO血型不合最常見(jiàn)，主要表現(xiàn)為黃疸、貧血、膽紅素腦病癥狀[1]。由于HDN患兒體內(nèi)紅細(xì)胞破壞，多伴有一定程度貧血，癥狀嚴(yán)重者需進(jìn)行血液輸注以緩解癥狀。對(duì)于一般新生兒而言，免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育完全，體內(nèi)無(wú)對(duì)應(yīng)抗體(抗A、抗B)存在，且紅細(xì)胞表面血型抗原表達(dá)強(qiáng)度較成人低，故新生兒輸血及血型鑒定應(yīng)與成人相區(qū)別[2]。對(duì)于HDN患兒而言，不宜選擇同血型輸血，應(yīng)以相容性原則進(jìn)行輸血[3]。交叉配血應(yīng)篩查新生兒血液中是否存在抗A、抗B，但其準(zhǔn)確性受檢測(cè)方法影響較大。本研究選取2019年1—9月安陽(yáng)市第三人民醫(yī)院收治的30例ABO-HDN患兒為研究對(duì)象，分析微柱凝膠技術(shù)(micro column gel technique，MCGT)交叉配血檢測(cè)方法的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2019年1—9月安陽(yáng)市第三人民醫(yī)院收治的30例ABO-HDN患兒為研究對(duì)象。男16例，女14例；年齡1～5 d，平均(2.91±0.84)d；體質(zhì)量2.3～3.9 kg，平均(3.11±0.35)kg?；純杭覍僦椴⒑炇鹜鈺?shū)。

1.2 選取標(biāo)準(zhǔn)(1)納入標(biāo)準(zhǔn)：①產(chǎn)前孕產(chǎn)婦與其丈夫經(jīng)ABO血型檢查確診新生兒溶血??；②產(chǎn)后監(jiān)測(cè)新生兒膽紅素，黃疸出現(xiàn)早，且為進(jìn)行性加重；③臨床資料完善，且均于安陽(yáng)市第三人民醫(yī)院做系統(tǒng)產(chǎn)檢。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：①新生兒臨床資料不完善，或未經(jīng)產(chǎn)后明確診斷；②合并其他先天性疾病、血液疾病；③母體合并嚴(yán)重妊娠并發(fā)癥；④檢測(cè)前經(jīng)相關(guān)治療。

1.3 檢測(cè)方法采集ABO-HDN患兒臨床資料及ABO同型紅細(xì)胞制劑血樣5份，血樣采集標(biāo)準(zhǔn)：正定凝集強(qiáng)度≥3+，反定凝集強(qiáng)度≥2+，正反定血型復(fù)查一致。(1)凝聚胺遞質(zhì)技術(shù)(MPT)：選擇1支試管僅置入ABO-HDN患兒2滴紅細(xì)胞放散液或血液，配型1滴紅細(xì)胞懸液，0.7 mL低離子遞質(zhì)混合均勻，給予2滴凝聚胺溶液，離心10 s；去除上清液后輕搖試管，看紅細(xì)胞凝集情況，凝集后滴入2滴重懸液混勻，觀察結(jié)果；若為凝集則重做。(2)MCGT：采用微柱凝膠試劑卡進(jìn)行標(biāo)記，加入血樣于凝膠試管，進(jìn)行5 min離心(轉(zhuǎn)速為900 r·min-1，離心2 min；轉(zhuǎn)速為1 500 r·min-1，離心3 min)，觀察結(jié)果。(3)所有患兒均接受直接抗人球蛋白試驗(yàn)(direct antiglobulin test，DAT)、游離血清及抗體釋放試驗(yàn)。

1.4 觀察指標(biāo)(1)ABO-HDN患兒與母體血型鑒定結(jié)果。(2)DAT與交叉配血結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)和率(%)表示，行χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 ABO-HDN患兒與母體血型鑒定結(jié)果母體均為O型血，ABO-HDN患兒A型血17例，占56.67%；B型血13例，占43.33%。

2.2 DAT與交叉配血結(jié)果交叉配血150次中，DAT陰性血清MCGT檢出陽(yáng)性51例，放散液MCGT檢出陽(yáng)性49例，血清及放散液MPT均未檢出陽(yáng)性；DAT陽(yáng)性血清MCGT不合率[89.66%(52/58)]較DAT陰性血清MCGT不合率[55.43%(51/92)]高(χ2=19.362，P<0.001)；DAT陽(yáng)性放散液MCGT不合率[70.69%(41/58)]較DAT陰性放散液MCGT不合率[53.26%(49/92)]高(χ2=4.502，P=0.034)。DAT陽(yáng)性血清MCGT不合率[89.66%(52/58]較血清MPT不合率[6.90%(4/58)]高(χ2=79.543，P<0.001)；DAT陽(yáng)性放散液MCGT不合率[70.69%(41/58)]較放散液MPT不合率[10.34%(6/58)]高(χ2=43.818，P<0.001)。見(jiàn)表1。

表1 DAT與交叉配血結(jié)果分析

3 討論

ABO-HDN患兒母體多為O型血，患兒則以A、B型血較多，其原因在于O型血者體內(nèi)抗A、抗B免疫球蛋白抗體較多，同時(shí)A抗原抗原性相較于B抗原更強(qiáng)，故A型血新生兒HDN發(fā)病率較高[4]。李菁等[5]研究指出，O型孕婦產(chǎn)前IgG血型抗體是造成HDN的重要原因，且水平與HDN呈負(fù)相關(guān)。本研究所選的30例ABO-HDN患兒，母體皆為O型血，A型血患兒略多于B型血患兒。為提高輸血安全，預(yù)防HDN進(jìn)一步加重，輸血前應(yīng)檢測(cè)血型免疫性抗體。

HDN患兒由于體內(nèi)有被動(dòng)輸入母體溶血性免疫球蛋白抗體，且該抗體存在于血清中，也可與紅細(xì)胞相結(jié)合，臨床檢測(cè)HDN可采用DAT、游離血清及抗體釋放試驗(yàn)[6]。輸血前交叉配血檢驗(yàn)包括紅細(xì)胞放散液、游離血清，其中放散液交叉配血可顯示細(xì)胞溶血性抗體與所輸注紅細(xì)胞不相容性，而游離血清交叉配血可顯示血液溶血性抗體與所輸注紅細(xì)胞不相容性[7]。但ABO-HDN患兒被動(dòng)輸入的抗體性質(zhì)及數(shù)量、紅細(xì)胞血型抗原表達(dá)強(qiáng)度個(gè)體差異明顯，患兒清除代謝變化不同，因此不同ABO-HDN患兒進(jìn)行交叉配血檢測(cè)準(zhǔn)確性受不同檢測(cè)方法靈敏度影響，臨床一般選擇DAT試驗(yàn)，其中MCGT技術(shù)在臨床上應(yīng)用廣泛。MCGT屬于血凝試驗(yàn)，是凝膠分子篩技術(shù)和抗原抗體反應(yīng)相結(jié)合的結(jié)果，在凝膠遞質(zhì)影響下抗原抗體可產(chǎn)生凝集反應(yīng)，同時(shí)MCGT具有操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)速度快等優(yōu)勢(shì)[8]。

相關(guān)研究認(rèn)為，將微柱凝膠技術(shù)應(yīng)用于ABO血型不合新生兒溶血病患兒的臨床診斷，可明顯提高血型及3項(xiàng)試驗(yàn)陽(yáng)性檢出率，具有較高診斷價(jià)值，對(duì)保護(hù)患兒輸血安全有積極作用[9]。本研究結(jié)果顯示，DAT陽(yáng)性血清及放散液MCGT不合率高于DAT陰性血清及放散液MCGT不合率；DAT陽(yáng)性血清及放散液MCGT不合率高于血清及放散液MPT不合率，表明MCGT檢測(cè)ABO-HDN患兒交叉配血敏感度更高，與劉智等[10]研究結(jié)果一致。同時(shí)需注意，在150次交叉配血中，即便采用MCGT技術(shù)，放散液、血清交叉配血檢測(cè)仍有陰性顯示，表明針對(duì)陽(yáng)性ABO-HDN患兒選擇同型紅細(xì)胞制劑輸注，仍存在交叉配血不合漏檢情況。因此，需引起臨床重視，對(duì)新生兒輸血不能盲目采用同型輸血原則，應(yīng)結(jié)合交叉配血檢測(cè)結(jié)果合理輸血。HDN患兒由于自身機(jī)體存在差異，機(jī)體紅細(xì)胞血型抗原表達(dá)強(qiáng)度不同，且由于體內(nèi)被動(dòng)輸入的溶血性抗體數(shù)量及性質(zhì)有所不同，臨床進(jìn)行交叉配血檢測(cè)時(shí)，準(zhǔn)確度受到配血方法靈敏度影響，存在差異[11-12]。但需要指出的是，雖然臨床推薦應(yīng)用DAT檢測(cè)，但基于目前國(guó)內(nèi)實(shí)際情況，臨床應(yīng)用中MPT可取得何種效果仍存在較大爭(zhēng)議。本研究結(jié)果證實(shí)，MCGT檢測(cè)ABO-HDN患兒交叉配血敏感度高于MPT，表明將MCGT技術(shù)應(yīng)用于ABO-HDN患兒具有更高的診斷價(jià)值。同時(shí)需注意，對(duì)HND患兒進(jìn)行診斷時(shí)即便采用MCGT技術(shù)，也難以保證檢測(cè)技術(shù)準(zhǔn)確度為100%，存在部分患兒采用同型紅細(xì)胞制劑，造成交叉配血檢測(cè)不合而漏診，因此交叉配血檢測(cè)結(jié)果陰性不能作為新生兒輸血安全性的金標(biāo)準(zhǔn)。因此，新生兒輸血應(yīng)注意，首先進(jìn)行DAT、游離血清及抗體釋放試驗(yàn)篩查HDN，確認(rèn)是否存在ABO-HDN癥狀，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果指導(dǎo)合理輸血，若未篩查HDN，則應(yīng)考慮母源性溶血風(fēng)險(xiǎn)，給予A、B型血漿及O型洗滌紅細(xì)胞進(jìn)行相容性輸血，以確保輸血安全。

綜上，對(duì)ABO-HDN患兒輸血應(yīng)引起臨床重視，采用MCGT檢測(cè)有助于提高輸血安全性，有較高的診斷價(jià)值，對(duì)新生兒輸血方案的制定有借鑒作用。