凍結(jié)肩病理改變及過氧化物酶體增殖劑激活受體-γ激動(dòng)劑治療作用的研究*

陳錦富 朱天飛 常崇斐 耿倚云 熊建義 王大平** 王滿宜 朱偉民**

（1.深圳大學(xué)第一附屬醫(yī)院（深圳市第二人民醫(yī)院）運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)科，廣東深圳 518035；2.廣東省運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)工程研究中心，廣東深圳 518035）

凍結(jié)肩是肩關(guān)節(jié)的一種進(jìn)行性疾病，以疼痛和活動(dòng)范圍受限為特征。其中最顯著的臨床特征是肩關(guān)節(jié)在各個(gè)方向的主動(dòng)和被動(dòng)運(yùn)動(dòng)受限[1-3]。引起這些臨床癥狀的主要原因是肩關(guān)節(jié)囊的纖維化改變及炎癥反應(yīng)，但目前對(duì)其病理改變的研究較少，也沒有一種統(tǒng)一有效的治療方案。為了解凍結(jié)肩的臨床癥狀，有必要對(duì)其病理改變進(jìn)行進(jìn)一步研究。

轉(zhuǎn)化生長因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）是一種多功能細(xì)胞因子，已被證明導(dǎo)致纖維化，可以促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的形成[4-7]。成纖維細(xì)胞合成的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白特異性表面膜受體[8-10]的高表達(dá)可引起肩關(guān)節(jié)攣縮、粘連，是凍結(jié)肩的主要發(fā)病機(jī)制。有研究發(fā)現(xiàn)在原發(fā)性及繼發(fā)性凍結(jié)肩患者的肩關(guān)節(jié)囊中TGF-β 及其受體的表達(dá)增加，表明TGF-β也可引起關(guān)節(jié)囊纖維化，并且可能在凍結(jié)肩的起源和發(fā)展中有重要作用[11]?；谶@些研究發(fā)現(xiàn)，我們向SD 大鼠的肩關(guān)節(jié)腔注射TGF-β1 過表達(dá)的腺病毒成功構(gòu)建大鼠凍結(jié)肩模型，并可用于凍結(jié)肩的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究。除此之外，凍結(jié)肩往往存在炎癥反應(yīng)，已有研究報(bào)道，炎癥介質(zhì)在凍結(jié)肩的炎癥和膠原分解代謝過程中發(fā)揮重要作用[12-14]。近年來的研究表明，關(guān)節(jié)囊炎性細(xì)胞因子的過度表達(dá)在凍結(jié)肩的發(fā)病過程中起著重要作用[15-17]。研究表明，PPAR-γ 激動(dòng)劑可抑制TGF-β1所引起的細(xì)胞外基質(zhì)表達(dá)上調(diào)（包括Ⅰ型膠原形成），從而發(fā)揮其抗纖維化作用。還有研究表明，PPAR-γ 激動(dòng)劑對(duì)預(yù)防包括皮膚、腎臟和角膜在內(nèi)的各種器官纖維化有效[18-20]。本研究將會(huì)使用羅格列酮作為治療大鼠凍結(jié)肩模型藥物，這是一種高度活躍的PPAR-γ激動(dòng)劑，常被用作治療糖尿病的胰島素增敏劑。近年來發(fā)現(xiàn)羅格列酮在炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)和纖維化抑制中發(fā)揮重要作用[20,21]。因?yàn)槟壳皼]有羅格列酮的實(shí)驗(yàn)試劑，所以，本研究采用另一種PPAR-γ激動(dòng)劑——CDDO-IM 進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。本研究目的是探究PPAR-γ 激動(dòng)劑的抗纖維化和抗炎作用，以及羅格列酮在大鼠凍結(jié)肩模型中的治療效果，為臨床治療凍結(jié)肩提供新思路。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)細(xì)胞：人皮膚成纖維細(xì)胞（human skin fibroblasts,HSF）

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SD（Sprague Dawley）大鼠18 只，20 月齡，體重約450 g，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容、方法及小動(dòng)物福利等均已獲得深圳市第二人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

實(shí)驗(yàn)試劑：DMEM 培養(yǎng)基、胎牛血清（fetal bovine serum,FBS）均購自美國Invitrogen公司，TGF-β1過表達(dá)的腺病毒（滴度為1×1011PFU/ml）購自上海漢恒生物有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 水溶性甲臢化合物（MTS）法檢測(cè)細(xì)胞增殖：消化細(xì)胞后吹打散細(xì)胞，計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×105個(gè)/ml，分到96孔板，每孔100 μl，即每孔細(xì)胞為1×104個(gè)。待細(xì)胞貼壁后，收集各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞（0 h、24 h、48 h、72 h）加入cellTiter96AQ單溶液細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑（Promega，Cat.No.G3582），比例為1/10。即100 μl 培養(yǎng)液加入10 μl 檢測(cè)液。在孵育4 h 后，酶標(biāo)儀讀板，MTS檢測(cè)讀取OD490數(shù)據(jù)。

1.2.2 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)（劃痕檢測(cè)）：先用記號(hào)筆在6孔板背后，用直尺比著，均勻得劃橫線，大約每隔0.5～1.0 cm一道，橫穿過孔。每孔至少穿過3條線。于超凈工作臺(tái)內(nèi)無菌操作下在6 孔板中的每孔加入濃度為10 μg/ml 的纖維連接蛋白（fibronectin,FN）50 μl，置于4℃冰箱過夜，次日加含10%FBS 的RPMI-1640 培養(yǎng)液于紫外線下滅菌2 h備用。將處于對(duì)數(shù)生長期的濃度約為1×106/ml細(xì)胞，制成懸液均勻接種于6孔培養(yǎng)板中，置于37℃5%CO2培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞長成單層后予以換液，用絲裂霉素處理1 h，抑制細(xì)胞的分裂。用10 μl無菌微量移液槍頭在細(xì)胞板上劃痕，用槍頭比著直尺，盡量垂直于背后的橫線劃痕，保持槍頭垂直。PBS液沖洗2～3次以去除被刮下的細(xì)胞，加入無血清培養(yǎng)基。對(duì)照組用無血清RPMI-1640 培養(yǎng)基培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)組分別用含藥的無血清RPMI-1640培養(yǎng)基進(jìn)行干預(yù)。置入37℃5%CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，分別于劃痕后0、6、12、24 h取樣，拍照。在倒置顯微鏡下觀察劃痕愈合情況。Image Pro-Plus 6.0 軟件測(cè)量各組細(xì)胞相同時(shí)間點(diǎn)任意8 個(gè)部位劃痕寬度，計(jì)算細(xì)胞遷移率=（0 h-其他時(shí)間點(diǎn)）/0 h，以反映各組HSF運(yùn)動(dòng)遷移能力，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。

1.2.3 大鼠凍結(jié)肩模型的制備:動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分為正常組、TGF-β1誘導(dǎo)模型組（肩關(guān)節(jié)腔注射Ad-TGF-β1）、羅格列酮治療組（肩關(guān)節(jié)腔注射Ad-TGF-β1 后使用羅格列酮灌胃治療），每組6 只。取20 月齡的SD 大鼠12 只制備凍結(jié)肩模型。大鼠先腹腔注射水合氯醛（400 mg/kg）進(jìn)行麻醉，肩關(guān)節(jié)剃毛，標(biāo)記進(jìn)針點(diǎn)，消毒。無菌條件下，用1 ml注射器抽取TGF-β1過表達(dá)的腺病毒（滴度為1×1011PFU/ml）30 μl，稀釋至100 μl，在進(jìn)針點(diǎn)上向肩關(guān)節(jié)腔注射。注射病毒后繼續(xù)飼養(yǎng)2周，其中一半大鼠用羅格列酮（2 mg/kg/d）灌胃飼養(yǎng)2周，作為羅格列酮治療組。

1.2.4 組織學(xué)觀察：動(dòng)物模型制備完成后處死動(dòng)物，取肩關(guān)節(jié)囊組織，4%多聚甲醛固定，流水沖洗過夜，去除多余的固定液，再進(jìn)行脫水、浸蠟，常規(guī)方法包埋后，切片厚度7 μm并轉(zhuǎn)移到45°C水浴鍋中。用載玻片撈起切片，37°C 過夜烤干。組織切片標(biāo)本制作完成后進(jìn)行HE染色及免疫組織化學(xué)檢測(cè)，觀察大鼠肩關(guān)節(jié)囊組織的變化。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3 次。采用SPSS 17.0 軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。不同組間對(duì)比用one-way ANOVA。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PPAR-γ激動(dòng)劑抑制TGF-β1 誘導(dǎo)的HSF增殖

利用cellTiter96AQ 單溶液細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑（Promega，Cat.No.G3582）檢測(cè)HSF 組、TGF-β1 組（加入TGF-β1共培養(yǎng)）、CDDO-IM 組（加入CDDO-IM 共培養(yǎng)），TGF-β1+CDDO-IM 組（加入10 ng/ml TGF-β1和20 nmol/L CDDO-IM 共培養(yǎng)）不同時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞（0 h、24 h、48 h、72 h）增殖情況。培養(yǎng)至72 h，TGF-β 1組的增殖率為83.6%，TGF-β1+CDDO-IM組增殖率為19.3%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），可見TGF-β促進(jìn)HSF的增殖；CDDO-IM（PPAR-γ激動(dòng)劑）能夠抑制TGF-β1的促增殖作用（圖1）。

2.2 PPAR-γ激動(dòng)劑抑制TGF-β1 誘導(dǎo)的HSF遷移

利用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組不同時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞（0 h、6 h、12 h、24 h）增殖情況，計(jì)算各組細(xì)胞遷移率并進(jìn)行比較。在24 h，TGF-β1組的遷移率為84.9%，TGFβ1+CDDO-IM組遷移率為44.1%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果顯示TGF-β1 促進(jìn)HSF 的遷移；CDDO-IM抑制TGF-β1對(duì)HSF遷移的促進(jìn)作用（圖2）。

2.3 PPAR-γ 激動(dòng)劑抑制TGF-β1 誘導(dǎo)的HSF 異常纖維化

利用實(shí)時(shí)熒光定量qRT-PCR 及蛋白質(zhì)印跡Western blot 檢測(cè)細(xì)胞外基質(zhì)波形蛋白、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、Ⅰ型膠原蛋白、Ⅲ型膠原蛋白的表達(dá)情況。qRT-PCR 結(jié)果顯示TGF-β1 促進(jìn)HSFⅠ型膠原蛋白、Ⅲ型膠原蛋白的RNA 表達(dá)；CDDO-IM 抑制TGF-β誘導(dǎo)的HSFⅠ型膠原蛋白、Ⅲ型膠原蛋白的RNA水平高表達(dá)。TGF-β1能夠明顯促進(jìn)α-SMA、波形蛋白的RNA 表達(dá)；CDDO-IM 抑制TGF-β1 誘導(dǎo)的HSF 中α-SMA、波形蛋白的RNA水平高表達(dá)（圖3）。

圖1 細(xì)胞活性檢測(cè)

Western blot 結(jié)果顯示，TGF-β1能夠明顯促進(jìn)Ⅰ型膠原蛋白、Ⅲ型膠原蛋白、波形蛋白、α-SMA 的蛋白表達(dá)；CDDO-IM 抑制TGF-β1 誘導(dǎo)的HSF 中Ⅰ型膠原蛋白、Ⅲ型膠原蛋白、波形蛋白、α-SMA 蛋白水平高表達(dá)（圖4）。

2.4 PPAR-γ 激動(dòng)劑緩解TGF-β1 誘導(dǎo)的大鼠凍結(jié)肩的肩關(guān)節(jié)僵硬

在麻醉狀態(tài)下，應(yīng)用大鼠肩關(guān)節(jié)的扭矩測(cè)試裝置（圖5）被動(dòng)活動(dòng)大鼠肩關(guān)節(jié)進(jìn)行外旋和內(nèi)旋，外旋相同角度時(shí)，TGF-β1誘導(dǎo)模型組比正常組需要更大的力矩，而羅格列酮治療組需要的力矩最小，最大外旋角度約45°；而內(nèi)旋20°之后也有同樣趨勢(shì)，最大內(nèi)旋角度約45°；說明PPAR-γ 激動(dòng)劑緩解TGF-β1 誘導(dǎo)的大鼠凍結(jié)肩的肩關(guān)節(jié)僵硬（圖6）。

2.5 PPAR-γ激動(dòng)劑抑制大鼠凍結(jié)肩的炎癥反應(yīng)

在麻醉狀態(tài)下，用1 ml注射器收集各組大鼠肩關(guān)節(jié)液體至少0.3 ml 進(jìn)行ELISA 試驗(yàn)檢測(cè)環(huán)氧化酶-1（cyclooxygenase-1,COX-1）、白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor,TNF-α）的表達(dá)情況。在TGF-β1 誘導(dǎo)模型組中，COX-1、IL-1β、TNF-α 的平均濃度分別為93.38 U/L、56.21 pg/ml、92.46 pg/ml；在羅格列酮治療組中，COX-1、IL-1β、TNF-α的平均濃度分別為47.95 U/L、14.75 pg/ml、41.15 pg/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果顯示TGF-β1 過表達(dá)能引起大鼠肩關(guān)節(jié)液中炎癥因子升高，而羅格列酮治療能夠減少炎癥因子產(chǎn)生（圖7）。

圖2 細(xì)胞遷移檢測(cè)

2.6 PPAR-γ 激動(dòng)劑抑制大鼠凍結(jié)肩的成纖維細(xì)胞異常纖維化

應(yīng)用HE染色、免疫組織化學(xué)法對(duì)大鼠肩關(guān)節(jié)囊組織α-SMA、波形蛋白、Ⅰ型膠原蛋白、Ⅲ型膠原蛋白進(jìn)行觀察。在正常組中，纖維細(xì)胞未見增生，纖維結(jié)構(gòu)排列較整齊，未見α-SMA、波形蛋白表達(dá)；TGF-β1誘導(dǎo)模型組可見纖維細(xì)胞大量增生，新生血管形成，炎癥細(xì)胞增加，纖維結(jié)構(gòu)紊亂，α-SMA、波形蛋白、Ⅰ型膠原蛋白、Ⅲ型膠原蛋白較正常組表達(dá)增加；羅格列酮治療組中纖維結(jié)構(gòu)較TGF-β1誘導(dǎo)模型組排列整齊，炎癥反應(yīng)減弱，α-SMA、波形蛋白、Ⅰ型膠原蛋白、Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)減少。TGF-β1過表達(dá)誘導(dǎo)大鼠肩關(guān)節(jié)囊炎癥形成，基質(zhì)蛋白增加，纖維組織排列紊亂，成纖維細(xì)胞增生；而羅格列酮治療將抑制凍結(jié)肩的炎癥形成，減少基質(zhì)蛋白生成，重塑纖維組織結(jié)構(gòu)（圖8）。

3 討論

肩關(guān)節(jié)囊的炎癥和纖維化是凍結(jié)肩疼痛和活動(dòng)受限的主要原因，這已被普遍接受。盡管有大量相關(guān)的研究，但導(dǎo)致凍結(jié)肩發(fā)展的病因和病理機(jī)制仍知之甚少，對(duì)最佳治療方法也沒有一致意見，因此了解肩關(guān)節(jié)凍結(jié)過程中關(guān)節(jié)囊的病理變化對(duì)治療有重要意義。目前認(rèn)為凍結(jié)肩的病理變化是肩關(guān)節(jié)囊組織纖維化改變、攣縮、增厚，并且存在非感染性炎癥反應(yīng)。肩關(guān)節(jié)囊組織攣縮是凍結(jié)肩的主要病理改變，其基質(zhì)主要由致密的Ⅲ型膠原纖維組成，富含成纖維細(xì)胞和肌成纖維細(xì)胞，手術(shù)解除肩關(guān)節(jié)囊攣縮可減輕疼痛，改善肩關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)[22-24]。同時(shí)，我們認(rèn)為凍結(jié)肩的發(fā)生與纖維化和炎癥密切相關(guān)。凍結(jié)肩的形成包括一個(gè)由纖維化引起的組織硬化的過程，而纖維化是由炎癥引起的。

圖3 qRT-PCR檢測(cè)Ⅰ型膠原蛋白、Ⅲ型膠原蛋白、波形蛋白、α-SMA基因表達(dá)情況，TGF-β1組和TGF-β1+CDDO-IM組比較，△P＜0.05

圖4 Western blot檢測(cè)Ⅰ型膠原蛋白、Ⅲ型膠原蛋白、波形蛋白、α-SMA蛋白表達(dá)情況

近年來的研究表明，細(xì)胞因子和炎癥因子在肩周炎的發(fā)病機(jī)制中起著重要作用。細(xì)胞因子調(diào)節(jié)結(jié)締組織的成纖維細(xì)胞生長和功能，也可以調(diào)節(jié)成纖維細(xì)胞合成膠原蛋白。凍結(jié)肩的細(xì)胞外基質(zhì)中Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白異常增加，主要由成纖維細(xì)胞和肌成纖維細(xì)胞合成，這表明這種情況可能受到細(xì)胞因子的異常調(diào)節(jié)。TGF-β是強(qiáng)有力的促纖維化和促炎癥反應(yīng)的細(xì)胞因子，在各種組織的纖維化中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在本實(shí)驗(yàn)中，利用TGF-β誘導(dǎo)HSF增殖，除此之外，通過qRT-PCR 及Western blot 實(shí)驗(yàn)證明TGF-β可以引起細(xì)胞外基質(zhì)中Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白過度表達(dá)。同時(shí)，成纖維化的標(biāo)志蛋白α-SMA，波形蛋白的RNA及蛋白水平比正常組升高，這表明TGFβ能夠促進(jìn)HSF增殖的同時(shí)引起細(xì)胞纖維化。因此，利用TGF-β1過表達(dá)腺病毒注射在大鼠的肩關(guān)節(jié)中，成功誘導(dǎo)大鼠凍結(jié)肩模型。然后通過檢測(cè)大鼠肩關(guān)節(jié)活動(dòng)度發(fā)現(xiàn)，TGF-β1誘導(dǎo)模型組的肩關(guān)節(jié)活動(dòng)明顯受限。同時(shí)，收集大鼠肩關(guān)節(jié)液進(jìn)行ELISA 實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)結(jié)果證明TGF-β1 過表達(dá)能引起大鼠肩關(guān)節(jié)液中炎癥因子升高。通過免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明在TGF-β1誘導(dǎo)模型組中纖維細(xì)胞大量增生，纖維結(jié)構(gòu)紊亂，同時(shí)新生血管形成，炎癥細(xì)胞增加，細(xì)胞外基質(zhì)中α-SMA、波形蛋白、Ⅰ型膠原蛋白、Ⅲ型膠原蛋白較正常組表達(dá)增加。

圖5 大鼠肩關(guān)節(jié)的扭矩測(cè)試裝置

圖6 被動(dòng)活動(dòng)大鼠肩關(guān)節(jié)進(jìn)行外旋（A）和內(nèi)旋（B）檢測(cè)肩關(guān)節(jié)活動(dòng)度

圖7 ELISA檢測(cè)COX-1、IL-1β、TNF-α的表達(dá)情況

圖8 大鼠肩關(guān)節(jié)囊HE染色及免疫組織化學(xué)檢測(cè)（×200，標(biāo)尺：100 μm）

近年來的研究表明，PPAR-γ活化是一種重要的細(xì)胞抗纖維化、抗炎機(jī)制，在結(jié)締組織細(xì)胞外基質(zhì)的生理和病理重建過程中的負(fù)調(diào)控發(fā)揮重要作用[25,26]。因此，證實(shí)PPAR-γ激動(dòng)劑能否治療慢性纖維化疾病成為研究熱點(diǎn)[27-29]。目前，有相關(guān)研究表明PPAR-γ激動(dòng)劑是抗角膜纖維化的有效藥物[30]。然而，PPARγ 激動(dòng)劑對(duì)由TGF-β 過表達(dá)引起的凍結(jié)肩纖維化是否有治療尚未有相關(guān)研究報(bào)道。本研究表明，PPAR-γ激動(dòng)劑可抑制HSF和大鼠肩關(guān)節(jié)囊纖維化，對(duì)以纖維化為主要特征的凍結(jié)肩有積極的治療作用。本研究結(jié)果表明，凍結(jié)肩的關(guān)節(jié)腔中存在炎癥反應(yīng)，并伴有纖維化。PPAR-γ激動(dòng)劑顯著抑制纖維細(xì)胞增生、炎癥因子釋放及纖維化相關(guān)蛋白的表達(dá)，說明PPAR-γ 激動(dòng)劑抑制了炎癥和纖維化過程。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，2 周的藥物治療也增加了關(guān)節(jié)活動(dòng)度，與TGF-β1誘導(dǎo)模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這說明PPAR-γ 激動(dòng)劑可延緩或逆轉(zhuǎn)肩關(guān)節(jié)凍結(jié)引起的關(guān)節(jié)活動(dòng)受限。因此，PPAR-γ激動(dòng)劑可能是治療凍結(jié)肩的一個(gè)有希望的基因靶點(diǎn)，但其作用機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。與目前使用的治療方法相比，PPAR-γ激動(dòng)劑治療的非細(xì)胞毒性和抗增殖作用（細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)及劃痕實(shí)驗(yàn)顯示）也是一個(gè)額外的優(yōu)勢(shì)。除此之外，與捆綁固定、冷凍刺激等傳統(tǒng)的建模方法，我們的建模方法更方便易行。但是，本研究的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物樣本量較少，活動(dòng)度測(cè)量時(shí)的固定方法仍需改善。從長遠(yuǎn)來看，將假設(shè)PPAR-γ激動(dòng)劑是治療凍結(jié)肩的靶點(diǎn)，這需要更多的研究證明其治療機(jī)制，如Smad 通路，這是凍結(jié)肩的另一個(gè)調(diào)節(jié)通路。我們還將改進(jìn)基因傳遞方法，使其更安全、更有效。總的來說，通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)了TGF-β1能夠引起人纖維細(xì)胞異常纖維化，并且利用大鼠凍結(jié)肩模型進(jìn)一步探究?jī)鼋Y(jié)肩的病理改變主要是纖維細(xì)胞異常增生，炎癥細(xì)胞浸潤，纖維結(jié)構(gòu)紊亂，而PPAR-γ 激動(dòng)劑可以緩解大鼠凍結(jié)肩關(guān)節(jié)僵硬，減弱炎癥反應(yīng)，抑制異常纖維化。