2019年新疆部分地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測與分析

常軍帥屈勇剛*于會舉 吳圓圓 魏 其谷思穎張家瑞 李 靜李 巖

（1石河子大學(xué)動物科技學(xué)院，新疆石河子 832003；2新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)畜牧獸醫(yī)工作總站，新疆烏魯木齊 830063）

豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是以母豬發(fā)生繁殖障礙和幼豬表現(xiàn)呼吸系統(tǒng)疾病為主要癥狀的病毒性傳染病，部分患病生豬耳部和腹部皮膚呈藍(lán)紫色，故稱“藍(lán)耳病”。1987年美國發(fā)現(xiàn)此病后稱其為“神秘豬病”，在隨后極短的時間內(nèi)通過貿(mào)易往來及空氣傳播、接觸傳播、胎盤傳播等多種傳播途徑使全球養(yǎng)豬業(yè)出現(xiàn)“流產(chǎn)風(fēng)暴”，嚴(yán)重影響了生豬養(yǎng)殖產(chǎn)生的經(jīng)濟(jì)效益，被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）列為必須報告的動物疫病，我國將PRSS列為二類動物疫病，于2008年被我國規(guī)定為免疫接種病種[1,2]。PRRS在我國的流行包括兩個開始階段，第一階段以1996年郭寶清等在我國北京市某豬場母豬流產(chǎn)的胎兒內(nèi)發(fā)現(xiàn)豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）為起點(diǎn)；2006年夏季開始的第二階段——我國多地暴發(fā)了以高熱為特征的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征（HP-PRRS），HP-PRRS給我國養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展造成了嚴(yán)重威脅，母豬的流產(chǎn)率達(dá)30%，仔豬死亡率近80%，被列為一類動物疫病[3-6]。根據(jù)遺傳進(jìn)化的差異，可將PRRSV分為美洲型和歐洲型，我國以流行美洲型為主。由于PRRSV的毒株多樣性、廣泛變異加劇、免疫抑制及抗體依賴增強(qiáng)作用（ADE），導(dǎo)致此病在我國難以控制且無特效藥，采用高效的抗體檢測技術(shù)來改善免疫程序可以對本病起到更好的預(yù)防作用。為了解新疆部分地區(qū)PRRSV抗體水平，本試驗于2019年在新疆6個地區(qū)采集了599份血清樣品，進(jìn)行了PRRSV抗體檢測分析，以期為我區(qū)PRRS的免疫防控提供流行病學(xué)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品

2019年1月至2019年12月期間從新疆巴州、伊寧、塔城、阿克蘇、奎屯、石河子6個地區(qū)的11個規(guī)?；B(yǎng)豬場，共采集599份血清樣品。其中哺乳仔豬75份、保育豬125份、育肥豬35份、后備豬38份、種公豬87份、繁殖母豬239份。

1.2 材料和儀器

診斷試劑盒（99-40959）為PRRSV的ELISA抗體檢測試劑盒，購自北京愛德士元亨生物科技有限公司；獸用一次性采血器5 mL為武漢民生醫(yī)用器材有限公司產(chǎn)品；微量移液器（Eppendorf）、自動酶標(biāo)儀（美國BioTek公司生產(chǎn)）；1.5 mL的EP管與槍頭若干。

1.3 方法

1.3.1 樣品處理

根據(jù)豬只日齡的不同從耳緣靜脈或前腔靜脈采集3～5 mL血液，室溫下靜置析出清亮、無溶血的血清，收集至EP管直接檢測。

1.3.2 間接ELISA檢測法

根據(jù)PRRSV的ELISA抗體檢測試劑盒說明書進(jìn)行操作。操作前將所有試劑和反應(yīng)板避光恢復(fù)到室溫（20～25℃）。先將已作40倍稀釋（5 μL血清樣品加入195 μL的樣品稀釋液）的血清樣品100 μL、100 μL未做稀釋的陰性和陽性樣品（各設(shè)2組）加入抗原包被板內(nèi)，于18～26℃條件下孵育30 min。孵育后洗滌3次，加入100 μL酶標(biāo)抗體，再次孵育30 min，然后洗滌3次。最后加入100 μL的TMB底物孵育15 min，加入100 μL終止液使反應(yīng)終止，用酶標(biāo)儀于650 nm處進(jìn)行測定并保留數(shù)據(jù)。

1.3.3 結(jié)果判定

試驗成立的條件是陰性對照的OD650nm平均值≤0.150，陽性對照OD650nm平均值減去陰性對照OD650nm平均值的差≥0.150。若不成立，重新進(jìn)行試驗。

其中S＝樣品OD650nm值－陰性對照OD650nm平均值，P＝陽性對照OD650nm平均值－陰性對照OD650nm平均值。計算S/P值，S/P≥0.4為陽性，S/P＜0.40判為陰性。

1.3.4 數(shù)據(jù)分析

使用SPSS軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計，分析PRRSV抗體的S/P平均值、標(biāo)準(zhǔn)差、陽性率、陰性率，用變異系數(shù)來表示各類別豬群的抗體的離散度，其中變異系數(shù)＝（標(biāo)準(zhǔn)差÷S/P平均值）×100%。

2 結(jié)果

2.1 11個規(guī)?；B(yǎng)豬場PRRSV抗體檢測結(jié)果

在來自11個規(guī)?；B(yǎng)豬場的599份血清樣品中，PRRSV抗體ELISA檢測平均陽性率為92.82%（556/599）；S/P平均值為2.17±1.43，變異系數(shù)為65.83%。A～K各豬場陽性率都高于70.00%，除B場和K場外陽性率均高于90.00%。A～K各豬場變異系數(shù)最高的為A場（84.07%），最低的為H場（24.98%）。不同豬場之間PRRSV平均抗體水平存在差異，K場和A、D、E、F、G、H、I、J這8個場差異顯著（＜0.05），D場和A、B、E、F、G、H、I、J這8個場差異不顯著（＞0.05）。結(jié)果見表1。

2.2 各類別豬群PRRSV抗體檢測結(jié)果

有2個豬群陽性率達(dá)到100.00%，分別是育肥豬（35/35）和后備豬（38/38），哺乳仔豬的陽性率最低，為80.00%（60/75）。育肥豬的 S/P值最高（3.12±0.76），哺乳仔豬的S/P值最低（1.73±1.59）。變異系數(shù)最高的為哺乳仔豬（91.83%）、最低的是育肥豬（24.37%）。不同豬群之間PRRSV平均抗體水平存在差異，種公豬和哺乳仔豬、育肥豬差異顯著（＜0.05）；保育豬和哺乳仔豬、后備豬、種公豬差異不顯著（＞0.05）。結(jié)果見表2。

表1 新疆11個規(guī)模化養(yǎng)豬場PRRSV抗體檢測結(jié)果

表2 各類別豬群PRRSV抗體檢測結(jié)果

3 討論與分析

3.1 11個規(guī)?；B(yǎng)豬場免疫效果評價

新疆11個規(guī)?；B(yǎng)豬場的PRRSV平均抗體陽性率為92.82%（556/599），A～K各豬場的PRRSV抗體陽性率都高于國家規(guī)定的抗體水平標(biāo)準(zhǔn)（70%），能夠達(dá)到規(guī)?；B(yǎng)豬場控制PRRS疫情所達(dá)到的抗體合格率（90%以上） 有 A、C、D、E、F、G、H、I、J 場[7]。2011年張魯安等檢測到新疆部分地區(qū)的PRRS免疫抗體陽性率為55.52%[8]。2011年4月至2013年3月期間，席悅曾對新疆奇臺縣進(jìn)行PRRSV抗體檢測的陽性率為78.19%[9]。2013年10月至2014年1月期間，王禮偉等從石河子市周邊13個規(guī)模化養(yǎng)豬場中的726份血清樣品中檢測出該地區(qū)PRRS免疫抗體陽性率平均為87.33%[10]。陸民2016年曾對克拉瑪依市的PRRSV抗體進(jìn)行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)該市5個區(qū)的抗體陽性率都不低于94.58%[11]。宋敏曾通過ELISA檢測試驗得出新疆某母豬存欄量達(dá)2 500頭的規(guī)?；B(yǎng)豬場的PRRSV抗體陽性率為90.23%[12]。以上結(jié)果說明，近幾年新疆地區(qū)的PRRSV抗體陽性率呈逐年遞增趨勢。D、F、G、H豬場的變異系數(shù)均≤40%，抗體整齊度高，免疫狀況良好。A、B、K豬場的變異系數(shù)均大于60%，對抗體為陰性的豬只還需要進(jìn)行補(bǔ)免。新疆地區(qū)整體的PRRSV抗體變異系數(shù)為65.83%，造成抗體水平差異變大的原因有很多，可能有疫苗質(zhì)量不高、疫苗的保存和注射操作不規(guī)范、免疫程序制定不合理、飼養(yǎng)管理出現(xiàn)失誤、母源抗體干擾及免疫抑制疾病的感染等。

3.2 各類別豬群抗體的差異

統(tǒng)計試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各類別豬群的PRRSV抗體水平存在差異。其中哺乳仔豬和保育豬的抗體陽性率較低，分別為 80.00% （60/75）和 86.40% （108/125）；最高的是后備豬和育肥豬，均為100.00%；種公豬和繁殖母豬抗體陽性率分別為96.55%（84/87）和96.65%（231/239）。哺乳仔豬和保育豬抗體陽性率低的原因，一方面可能是哺乳仔豬臨近斷奶，母源抗體水平逐步降低；另一方面可能是當(dāng)哺乳仔豬轉(zhuǎn)至保育圈舍時由于斷奶及環(huán)境的改變產(chǎn)生應(yīng)激，易造成部分豬感染發(fā)病，建議及時進(jìn)行疫苗免疫，提高豬只的自身抗體水平。繁殖母豬和種公豬的變異系數(shù)分別為72.91%和45.67%，高于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部關(guān)于陽性抗體變異系數(shù)小于40%的規(guī)定，說明這兩個豬群PRRSV抗體水平整齊度差，需要引起足夠的重視[13]。