木霉與殺菌劑對碧玉疫病菌的活性研究

何俊烺 王茜茜 程東美

摘 要：為探明木霉菌與藥劑聯(lián)用對碧玉疫病菌的抑制效果，本文采用對峙培養(yǎng)法測定了哈茨木霉（Trichoderma huzirum）與綠色木霉（T. virid）對碧玉疫病病菌的抑制作用;采用含毒質(zhì)培養(yǎng)法測試了幾種殺菌劑對木霉的相容性;采用離體葉片法測試了木霉與殺菌劑聯(lián)合對病菌的抑制作用。結(jié)果表明：2種木霉對碧玉疫病菌均有較好抑制作用，對峙培養(yǎng)后72h的相對抑制效果分別為59.91%和54.31%;5種藥劑對比中，雙炔酰菌胺均與2種木霉的表現(xiàn)較高的相容性，EC50分別為5985.38g·mL-1和4604.5SymbolmA@ g·mL-1，烯酰嗎啉次之;2種木霉與烯酰嗎啉聯(lián)合對碧玉疫病在預(yù)防和治療作用中均取得較好抑制效果，抑制作用抑菌率最高達到85.78%，預(yù)防作用中抑菌率最高為90.52%。哈茨木霉或綠色木霉對碧玉疫病菌具有一定抑制作用和預(yù)防作用，與烯酰嗎啉聯(lián)用，毒力可得到明顯提高，抑制和預(yù)防效果比單獨使用木霉或藥劑要好。

關(guān)鍵詞：木霉;殺菌劑;碧玉疫病;聯(lián)合抑制

中圖分類號：S436.8 ? ? ? 文獻標(biāo)識碼：A

DOI：10.19754/j.nyyjs.20201030012

碧玉（Peperomia tetraphylla （Forst. f.）Hook.et Arn.）為胡椒科植物，屬常綠多年生草本植物，葉片肥厚。目前在中國，廣東等地區(qū)已經(jīng)開始大量生產(chǎn)，在各處花卉市場均能見到。碧玉植株高25cm以上，葉互生，基部楔形或突然變狹，穗狀花序，圓形至倒卵狀卵圓形，先端圓至微凹，果實具銳尖盤曲的喙[1]。碧玉疫病一直是碧玉一種危害嚴(yán)重的疾病。近年來，廣州地區(qū)的這種情況逐漸加劇，造成了嚴(yán)重地品質(zhì)和產(chǎn)量損失。由于碧玉疫病抗病性育種的困難性大，農(nóng)藥防治仍然是短時間內(nèi)防治碧玉疫病的首選方法。在繼續(xù)利用好現(xiàn)有的殺菌劑來控制疫病的同時，應(yīng)大力發(fā)展新型、高效、低殘留的殺菌劑和生物源殺菌劑。

為觀賞植物的養(yǎng)護和保護提供有益參考，改善觀賞植物病害的防治措施，本試驗測試了綠色木霉和哈茨木霉對碧玉疫病的拮抗效果，并選擇對木霉菌相容性較好的殺菌劑進行協(xié)同使用，測試其聯(lián)合的抑制作用和預(yù)防作用。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 病原菌

自廣州市白云區(qū)鐘落潭鎮(zhèn)白云現(xiàn)代農(nóng)業(yè)示范基地感病碧玉上分離并保存，經(jīng)鑒定為疫霉菌（Phytophthora.sp）。

1.1.2 木霉菌

哈茨木霉（Trichoderma huzirum）和綠色木霉（Trichoderma virid）均購自山東綠隴生物科技有限公司。

1.1.3 供試藥劑及濃度

80%三乙膦酸鋁WP（利民化工股份有限公司），68%精甲霜·錳鋅WDG（瑞士先正達作物保護有限公司），50%醚菌酯（翠貝）WDG（德國巴斯夫公司），23.4%雙炔酰菌胺SC（先正達南通作物保護有限公司），50%烯酰嗎啉WP（巴斯夫歐洲公司）。

1.2 試驗方法

1.2.1 木霉對碧玉疫病菌的抑制作用

試驗采用對峙培養(yǎng)法，參考牛勝芳[2]等采用的方法，取活化后直徑為5mm的碧玉疫病菌菌餅和木霉菌菌餅，分別接種于PDA平板距中心2cm處同一直線的兩點上，對照只接木霉菌或碧玉疫病菌，每個處理3個重復(fù)，于28℃恒溫培養(yǎng)，處理后48h和72h后分別測量疫霉菌和哈茨木霉菌落連線的半徑。

被抑菌率（%）=[（對照菌落半徑-菌落趨向半徑）/單獨培養(yǎng)菌落半徑]100[2]

相對抑菌率（%）=（病原菌被抑制率/木霉菌被抑制率） 100[3]

1.2.2 5種殺菌劑與2種木霉菌的相容性

采用菌絲生長速率法[4]，準(zhǔn)確量取各供試藥劑母液，分別以無菌水配制供試濃度50倍藥液，取1mL稀釋后藥液加入冷卻至約50℃的49mL定量PDA中，混勻后制成含藥平板，在平板中央接種一個木霉菌餅，每濃度重復(fù)3次，以無菌水處理為對照（CK）。28℃恒溫培養(yǎng)2d，用十字交叉法測量菌落直徑，計算毒力回歸方程、EC50和相關(guān)系數(shù)。

1.2.3 木霉與烯酰嗎啉對碧玉疫病菌協(xié)同抑制作用

采用離體葉片法[4]測定木霉菌與殺菌劑聯(lián)合對碧玉疫病菌的抑制作用。用清水按照木霉制劑的推薦濃度分別稀釋為哈茨木霉100倍液、300倍液和綠色木霉200倍液、600倍液;烯酰嗎啉按照推薦濃度配制稀釋濃度為500g·mL-1、333.3g·mL-1備用。選取新鮮并且長勢旺盛的碧玉葉片，用手持噴霧器均勻地將菌懸液噴霧噴至葉片背面，用脫脂棉包裹葉柄保濕，置于鋪有濾紙保濕的培養(yǎng)皿中，晾干后25℃恒溫箱中恒溫培養(yǎng)1d。將處理后分為2部分，部分葉片背面分別均勻噴霧不同濃度的藥液，放入培養(yǎng)皿中晾干，然后在葉片背面葉脈處接種3個疫霉病菌菌餅，做保護作用試驗;其余葉片背面葉脈處接種3個疫霉病菌菌餅，于25℃恒溫培養(yǎng)箱1d，而后分別均勻噴灑不同濃度的藥液于葉片背面，放入培養(yǎng)皿中晾干，做治療作用試驗。以清水處理、單獨用藥液和木霉菌懸液處理的葉片為對照，每個濃度重復(fù)3次。所有處理均于25℃培養(yǎng)3d，用十字交叉法測量菌落直徑，計算抑制率。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理及分析

本試驗的數(shù)據(jù)采用EXCEL 2010進行計算。

3 結(jié)果與分析

3.1 木霉菌對碧玉疫病菌的抑制作用

2種木霉菌對碧玉疫病菌均有抑制作用（表1），相對抑制效果隨時間增加而增大，處理72h后，2種木霉對碧玉疫病菌的抑制率分別為36.26%和34.16%，相對抑制效果分別為59.91%和54.31%，綠色木霉效果更好。

3.2 殺菌劑對木霉的相容性

幾種殺菌劑對2種木霉相容性測定結(jié)果（表2）表明，醚菌酯對哈茨木霉毒性低，而SymbolmA@ g·mL-1。

3.3 木霉和烯酰嗎啉對碧玉疫病菌的協(xié)同防治作用

選擇木霉敏感性中等的烯酰嗎啉為供試藥劑，與2種木霉對碧玉疫病菌聯(lián)合抑菌作用，結(jié)果見表3。單用2種木霉制劑或藥劑的預(yù)防作用優(yōu)于治療作用，抑制均達到80%以上，木霉制劑和烯酰嗎啉聯(lián)用對病菌的防效高于單用藥劑的防效，且預(yù)防作用優(yōu)于治療作用，高濃度藥劑聯(lián)用的預(yù)防作用的防效達到90.52%，而治療作用的防效達到85.78%。低濃度聯(lián)用木霉和藥劑的預(yù)防作用防效稍優(yōu)于高濃度單用藥劑的預(yù)防作用防效，但治療作用防效不及高濃度單用藥劑的治療作用防效。

4 結(jié)論與討論

木霉是植物病害防治中應(yīng)用和研究非常廣泛的一類生防真菌，能夠有效抑制多種植物病原菌，利用其制劑進行病蟲害防治具有對推廣生物防治和減少化學(xué)農(nóng)藥殘留對環(huán)境的污染等重要意義[5]，對于馬鈴薯、辣椒、黃瓜等多種植物疫病具有抑制作用[6-8]。疫霉菌不僅會侵染蔬菜從而造成危害，還可危害百合、蘭花、蟹爪蘭、白掌等花卉植物[9，10]。木霉菌對辣椒疫霉菌和煙草疫霉菌的生長具有抑制作用[11，12]，哈茨木霉對辣椒疫霉菌菌絲的平均抑制率達69.1%[13];郭敬[14]等試驗證明哈茨木霉可與烯酰嗎啉聯(lián)合施用防治煙草黑脛病。生防菌不僅可以抑制病原菌的生長，而且有促進植物生長的作用;但受環(huán)境條件、使用方法等影響，防效不穩(wěn)定[14]。本文研究結(jié)果表明：2種木霉菌對碧玉疫病具有一定抑制作用，綠色木霉處理后72h的抑菌率最高達36.26%，相對抑制效果為59.91%，稍好于哈茨木霉;烯酰嗎啉對2種木霉菌均有較好的相容性。為提高抑菌效果，降低使用化學(xué)藥劑的使用量，達到一定程度保護環(huán)境的目的，利用離體葉片法測試了木霉與烯酰嗎啉聯(lián)合抑菌作用，聯(lián)用條件下，高濃度使用下的預(yù)防作用的防效達到90.52%，優(yōu)于治療作用的防治效果，且明顯高于高濃度單用藥劑的效果，表明具有明顯正協(xié)同作用。此外，低濃度聯(lián)用木霉菌合藥劑的防效達到甚至優(yōu)于高濃度單用藥劑的效果。本文試驗結(jié)果證明，烯酰嗎啉可以和供試生防菌株聯(lián)合施用防治碧玉疫病，為碧玉疫病的防治提供了一個選擇。

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（責(zé)任編輯 周康）