粉葛配方顆粒的質(zhì)量標(biāo)準研究*

郝晶晶，張府君，藥雅俊，甄會賢

(山西藥科職業(yè)學(xué)院，山西 太原 030031)

粉葛為豆科植物甘葛藤PuerariathomsoniiBenth.的干燥根。在秋、冬季采挖后，去除外皮，稍干，截斷或再切成厚片，干燥，即得[1]。粉葛，性涼，味甘、辛，具有解肌退熱，發(fā)表透疹，生津止渴，升陽止瀉等功效[2]，主要用于治療外感發(fā)熱，項背強痛，麻疹初起，疹出不暢等病證[3]。其有效成分主要為黃酮類化合物，包括大豆苷、葛根素等[4]。中藥配方顆粒，又稱為免煎顆粒，作為傳統(tǒng)中藥飲片的補充，是對傳統(tǒng)湯劑的改革。它是在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，利用現(xiàn)代科技手段，以單味中藥飲片為原料，經(jīng)過提取、濃縮、制粒等制成的供臨床調(diào)劑使用的粉狀或顆粒狀產(chǎn)品。中藥配方顆粒具有劑量準確、衛(wèi)生、免煎易服和貯存攜帶方便等特點，克服了傳統(tǒng)中藥飲片煎煮過程繁瑣、攜帶服用不方便等不足[5-6]。本實驗采用TLC對粉葛配方顆粒進行鑒別，采用HPLC建立含量測定以及指紋圖譜方法，為該制劑的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀 器

Waters 2695高效液相色譜儀，Waters 2998檢測器，Empower色譜工作站；CP214型電子分析天平(萬分之一)，奧豪斯儀器有限公司；AB135-S電子天平(十萬分之一)，瑞士METTLER公司；ZF-90型暗箱式紫外透射儀，上海顧村電光儀器廠；Diamonsil C18(2)(4.6 mm×200 mm，5 μm)色譜柱；硅膠G板(批號：20150302)，青島海洋化工廠分廠。

1.2 試 藥

粉葛(豆科植物甘葛藤的干燥根，批號：110725-201615)，購自河北全泰藥業(yè)有限公司，由甄會賢副教授鑒定為正品；10批不同產(chǎn)地粉葛飲片(1.產(chǎn)地：天津，批號：2017051140；2.產(chǎn)地：安徽，批號：2016110591；3.產(chǎn)地：廣西，批號：2016060161；4.產(chǎn)地：廣西，批號：161201；5.產(chǎn)地：廣東，批號：160802；6.產(chǎn)地：廣東；批號：1607018；7.產(chǎn)地：云南，批號：6-1-1939；8.產(chǎn)地：河北，商鋪號：安國；9.產(chǎn)地：四川，批號：6-1-1952；10.產(chǎn)地：天津，批號：110725-201615)；葛根素對照品(批號：110752-201615)，中國食品藥品檢定研究院；甲醇(色譜純，批號：20170301)，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；娃哈哈純凈水，杭州娃哈哈集團有限公司。其余試劑為分析純。

2 方法及結(jié)果

2.1 配方顆粒的制備

稱取粉葛飲片，加水煎煮2次，每次1 h(第一次加水量10倍，浸泡30 min，第二次加水量8倍)，合并煎液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至1 mL藥液相當(dāng)于原藥材1.5 g(相對密度1.07，60 ℃)。噴霧干燥得到的干燥藥粉加入麥芽糊精適量(干燥藥粉量的0.5倍)，混勻，干法制粒，即得。

2.2 薄層鑒別

2.2.1 供試品溶液的制備

取本品粉末0.27 g，精密稱定，加甲醇10 mL，放置2 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0.5 mL使溶解，作為供試品溶液。

2.2.2 對照品溶液的制備

取葛根素對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.3 薄層色譜鑒別

照薄層色譜法(通則0502)實驗，吸取供試品溶液5 μL、葛根素對照品1 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-甲醇-水(10:2:0.2)為展開劑，展開后取出，晾干，置紫外儀(365 nm)下檢視。

2.2.4 薄層結(jié)果

供試品薄層色譜中，在與對照品葛根素相應(yīng)的位置上，顯相同的熒光斑點(見圖1)。

圖1 粉葛配方顆粒薄層色譜圖

2.3 含量測定

2.3.1 對照品溶液的制備

取葛根素對照品適量，精密稱定，加30%乙醇制成每1 mL含0.32 mg的溶液，作為母液。

2.3.2 供試品溶液的制備

取本品粉末約0.27 g，參照文獻[3]制備供試品溶液。

2.3.3 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18(2)(4.6 mm×200 mm，5 μm)色譜柱；流動相為甲醇-水(25:75)；檢測波長為250 nm，進樣體積10 μL，柱溫：30 ℃，理論板數(shù)按葛根素峰計算應(yīng)不低于4000，分離度良好(見圖2)。

圖2 粉葛配方顆粒含量測定HPLC色譜圖

2.3.4 線性關(guān)系的考察

精密吸取葛根素對照品母液0.0625 mL、0.125 mL、0.25 mL、0.50 mL、0.75 mL、1.00 mL各于2 mL容量瓶中，加30%乙醇定容至刻度，搖勻。精密吸取每份樣品10 μL按“2.3.3”項下色譜條件測定葛根素的線性關(guān)系。以對照品進樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，作圖。結(jié)果見圖3以及表1。

表1 線性關(guān)系考察實驗

圖3 葛根素的標(biāo)準曲線圖

回歸方程為：y=1827793.78x+5088.46，r=0.9996，表明葛根素在0.1～1.6 μg范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性關(guān)系。

2.3.5 精密度實驗

表2 葛根素精密度實驗

2.3.6 穩(wěn)定性實驗

精密吸取供試品溶液在0、2、4、8、12、24 h分別進樣10 μL，測定峰面積，計算RSD值，見表3，結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

表3 葛根素穩(wěn)定性實驗

2.3.7 重復(fù)性實驗

取同一批粉葛配方顆粒共6份，每份約0.27 g，研細，精密稱定，按“2.3.2”項下方法制備得供試品溶液，按“2.3.3”項下色譜條件，測定葛根素峰面積，計算葛根素的含量，計算RSD值，結(jié)果見表4，結(jié)果表明方法的重復(fù)性良好。

表4 葛根素重復(fù)性實驗

2.3.8 加樣回收率實驗

稱取已知含量的粉葛配方顆粒六份，每份0.14 g，按樣品中葛根素含量與對照品(1:1)加入一定量的葛根素對照品，按“2.3.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.3.3”項下條件進樣，計算葛根素的加樣回收率及RSD值，結(jié)果見表5，結(jié)果表明建立的方法準確度良好。

表5 樣品中葛根素回收率實驗

2.3.9 樣品含量測定

分別精密吸取10批不同產(chǎn)地的粉葛制備的配方顆粒供試品溶液各10 μL，按“2.3.3”項下條件注入液相色譜儀，測定，計算結(jié)果見表6。

表6 樣品中葛根素含量測定結(jié)果

由表6結(jié)果可知粉葛配方顆粒中葛根素為11.44 mg/g，在此基礎(chǔ)上下浮20%設(shè)限，由此確定本品每g含粉葛以葛根素(C21H20O9)計，不得少于9.15 mg。

2.4 粉葛配方顆粒指紋圖譜相似度評價方法

2.4.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18(2)(4.6 mm×200 mm，5 μm)色譜柱；流動相：流動相A為甲醇，流動相B為水，流動相洗脫條件見表7；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃；檢測波長：280 nm；進樣量：20 μL；參照物分離度良好，7個峰重現(xiàn)性好(見圖4)。

表7 流動相洗脫條件

圖4 粉葛配方顆粒指紋圖譜

2.4.2 供試品溶液的制備

按“2.3.2”項下方法制備。

2.4.3 參照物溶液的制備

取葛根素對照品適量，精密稱定，加30%乙醇制成每1 mL含80 μg的參照物溶液。

2.4.4 指紋圖譜的建立

采用藥典委員會頒布的《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)2004A版》進行數(shù)據(jù)處理，設(shè)定S5為參照圖譜，將其他樣品的色譜峰與參照峰進行自動匹配生成粉葛指紋圖譜疊加圖圖5所示。

圖5 10批粉葛顆粒指紋圖譜(S5 參照圖譜；R對照圖譜)

2.4.5 指紋圖譜相似度計算

采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)2004A版》進行相似度計算，將10批粉葛配方顆粒數(shù)據(jù)導(dǎo)入系統(tǒng)，設(shè)定中位數(shù)匹配模式，進行色譜峰匹配，并進行相似度分析，利用夾角余弦法對樣品進行相似度計算(見表8)。通過計算得到10批粉葛配方顆粒的色譜指紋圖譜與共有模式的色譜指紋圖譜的相似度，以此來評價這10批粉葛藥材的質(zhì)量。

表8 相似度計算結(jié)果

根據(jù)相似度計算結(jié)果可以得知，與對照指紋圖譜相比較，10批粉葛藥材相似度均>0.90，具有較好相似性。

3 結(jié) 論

本實驗初期采用2015版《中國藥典》粉葛鑒別項下的展開系統(tǒng)對樣品進行薄層色譜鑒別，即二氯甲烷-甲醇-水(7:2.5:0.25)，效果不理想。調(diào)整展開系統(tǒng)為二氯甲烷-甲醇-水(10:2:0.2)后，展開效果好，斑點清晰，此方法簡單，準確，可作為粉葛定性鑒別方法。

中藥指紋圖譜能較全面地反映中藥中所含化學(xué)成分的組成及含量分布情況，進而對藥材質(zhì)量進行整體描述和評價[7-8]，使質(zhì)量控制指標(biāo)由單一成分含量測定上升為對整個中藥內(nèi)在品質(zhì)的檢測[9-10]，從而實現(xiàn)對中藥內(nèi)在質(zhì)量的綜合評價和整體物質(zhì)的全面控制。結(jié)果顯示，10批粉葛配方顆粒的指紋圖譜中色譜峰數(shù)目一致，含量相近，不同批次間差異小，證明其制備工藝穩(wěn)定。由此可知，本實驗建立的高效液相指紋圖譜特征性強，結(jié)合葛根素的含量測定，可作為控制粉葛配方顆粒的質(zhì)量控制方法，使質(zhì)量達到穩(wěn)定可控。