• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    Pycnoporus sp.SYBC-L3漆酶催化偶氮染料脫色

    2020-11-11 13:18:24徐楚涵管政兵蔡宇杰廖祥儒
    關(guān)鍵詞:介體偶氮染料漆酶

    王 琦,徐楚涵,竇 欣,管政兵,蔡宇杰,廖祥儒*

    (1.江南大學(xué) 工業(yè)生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,江蘇 無(wú)錫214122;2.江南大學(xué) 生物工程學(xué)院,江蘇 無(wú)錫214122)

    關(guān)鍵字:Pycnoporus sp.SYBC-L3;漆酶;偶氮染料;漆酶脫色

    目前世界上有10 000多種染料,被廣泛地應(yīng)用于紡織、造紙、皮革、化妝品等行業(yè),每年的使用量超過(guò)70萬(wàn)t[1]。按照化學(xué)結(jié)構(gòu),可將染料分為偶氮染料、蒽醌染料、三芳甲烷染料,雜環(huán)染料等。偶氮染料是偶氮基兩端連接芳基的一類(lèi)有機(jī)化合物,占全球染料市場(chǎng)的比例超過(guò)50%,廣泛用于多種天然和合成纖維的染色和印花[2]。染色過(guò)程中約有10%的染料未被利用而隨著廢水排出[3],偶氮染料廢水的排放不僅會(huì)影響水體色澤、透明度、溶氧量等,還具有高致癌性和致畸性,如果未經(jīng)處理直接排出,會(huì)對(duì)生態(tài)系統(tǒng)和人類(lèi)的健康造成嚴(yán)重的威脅[4]。雖然很多物理化學(xué)方法能起到較好的脫色效果,例如活性炭吸附、電凝聚、沉淀、絮凝、膜過(guò)濾、反向滲透、臭氧氧化法、離子交換處理法等,但成本高、能耗大、潛在二次污染的風(fēng)險(xiǎn)等缺陷限制了其實(shí)際應(yīng)用[5]。因此,探究對(duì)印染廢水中偶氮染料高效、快速、經(jīng)濟(jì)的降解方法有重要的意義。其中,利用生物降解法尤其是利用漆酶降解染料因其經(jīng)濟(jì)性及環(huán)境友好等特點(diǎn)而得到廣泛關(guān)注[6]。

    漆酶(Laccase,E.C.1.10.3.2)是一種含銅的多酚氧化酶,可催化氧化酚類(lèi)、芳胺、羧酸等化合物及其衍生物,在小分子介體的協(xié)助下,漆酶的底物進(jìn)一步擴(kuò)大[7],其在紙漿漂白、環(huán)境激素降解、印染廢水處理、木材預(yù)處理等領(lǐng)域展現(xiàn)出較好的應(yīng)用潛力[8-9]。國(guó)內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)開(kāi)展了利用漆酶進(jìn)行染料脫色的研究,漆酶來(lái)源涉及Ganoderma lucidum[10]、Ganoderma weberianum[11]、Trametes versicolor[12]、Trametes trogii[13]、Pycnoporus sanguineus[14]、Bacillus pumilus[15]、Lepista nuda[16]、Cerrena unicolor[17]等。Pycnoporus sp.SYBC-L3是作者所在實(shí)驗(yàn)室篩選出的優(yōu)良菌株,漆酶產(chǎn)量高,發(fā)酵周期較短,其所產(chǎn)漆酶Lac-L有較好的pH穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性[18]。不同來(lái)源的漆酶有不同的酶學(xué)特性與底物范圍,其對(duì)染料的脫色條件及脫色效率也不盡相同[10-17,19],因此有必要對(duì)Pycnoporus sp.SYBC-L3所產(chǎn)漆酶Lac-L的染料脫色應(yīng)用開(kāi)展針對(duì)性研究,進(jìn)而探討Lac-L在工業(yè)染料處理中的應(yīng)用前景。

    本文作者利用Lac-L降解酸性紅1(AR1)、活性黑5(RB5)、活性紫5R(RV5R)3種偶氮染料,考察介體、溫度、pH等因素對(duì)脫色反應(yīng)的影響;根據(jù)脫色前后的染料溶液對(duì)小麥和水稻種子發(fā)芽的影響,評(píng)估脫色前后染料的植物毒性變化,為L(zhǎng)ac-L在偶氮染料廢水脫色方面的進(jìn)一步研究及工業(yè)應(yīng)用提供一定依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 菌種Pycnoporus sp.SYBC-L3為作者所在實(shí)驗(yàn)室篩選到的漆酶高產(chǎn)菌株,PDA固體斜面保藏。

    1.1.2 試劑活性黑5、酸性紅1、活性紫5R,染料化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn)表1,購(gòu)自Sigma公司;麥芽糖、一水檸檬 酸、CuSO4·5H2O、MnSO4·H2O、KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O,購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;2'-聯(lián)氨-雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)、1-羥基苯并三唑(HBT)、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(TEMPO)、2,6-二甲氧基苯酚(DMP)、乙酰丁香酮(AS)、香草醛(VAN)、丁香醛(SYR),購(gòu)自上海阿拉丁生化科技股份有限公司;漆酶Lac-L為Pycnoporus sp.SYBC-L3發(fā)酵液經(jīng)純化所得[18]。

    1.1.3 儀器與設(shè)備紫外可見(jiàn)分光光度計(jì):759S上海棱光技術(shù)有限公司產(chǎn)品;THZ-82A水浴恒溫振蕩器:蘇州威爾實(shí)驗(yàn)用品有限公司產(chǎn)品;CP313電子天平:奧豪斯儀器(上海)有限公司產(chǎn)品;TGL-16M臺(tái)式高速冷凍離心機(jī):湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司產(chǎn)品;SW-CJ-1FD超凈工作臺(tái):蘇州凈化設(shè)備有限公司產(chǎn)品;STARTER 3100 pH分析計(jì):奧豪斯儀器(上海)有限公司產(chǎn)品;AKTA avant蛋白質(zhì)純化系統(tǒng):美國(guó)通用公司產(chǎn)品。

    1.2 方法

    1.2.1 漆酶酶活測(cè)定以ABTS為底物測(cè)定漆酶酶活,參照黃亮等[20]的測(cè)定方法并略做調(diào)整。反應(yīng)體系為(3 mL):2.4 mL 0.1 mol/L的醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH 3)、0.5 mL的1 mmol/L ABTS及0.1 mL的粗酶液。加入酶液之后在420 nm處測(cè)吸光值(ε=36 000 L/(mol·cm))。1個(gè)酶活力單位定義為:每分鐘氧化1μmol的ABTS所需要的酶量。

    表1 3種偶氮染料的化學(xué)性質(zhì)Table 1 Chemical characteristics of three azo dyes

    1.2.2 偶氮染料脫色反應(yīng)及脫色率的計(jì)算脫色實(shí)驗(yàn)初始反應(yīng)體系:反應(yīng)體系總體積10 mL,染料質(zhì)量濃度50 mg/L,漆酶活性1 U/L,氧化還原介體濃度50μmol/L(ABTS和DMP濃度為10μmol/L),體系pH值為4.0(20 mmol/L Na2HPO4-檸檬酸緩沖液),反應(yīng)溫度30℃。反應(yīng)期間定時(shí)取樣,

    于各染料最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定反應(yīng)液的吸光度Ae。以反應(yīng)體系中加入等量滅活漆酶作為對(duì)照組,于各染料最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定反應(yīng)液的吸光度Ac,按照以下公式計(jì)算脫色率:

    1.2.3 反應(yīng)體系中各參數(shù)對(duì)染料脫色的影響實(shí)驗(yàn)中分別改變反應(yīng)體系中緩沖液的pH值(3.0~8.0)、反應(yīng)溫度30~70℃和添加的小分子介體種類(lèi)、染料質(zhì)量濃度及酶用量,測(cè)定在不同反應(yīng)條件下的脫色率,考察反應(yīng)體系中上述參數(shù)對(duì)染料脫色的影響。

    1.2.4 染料及其降解產(chǎn)物對(duì)作物發(fā)芽的研究將20粒小麥或水稻種子均勻地撒在鋪有干凈濾紙的9 cm平板中,每24小時(shí)添加5 mL未降解染料溶液、漆酶降解后的染料溶液和蒸餾水(對(duì)照),置于30℃恒溫培養(yǎng)箱分別培養(yǎng)3 d后,測(cè)定發(fā)芽率、胚芽長(zhǎng)度和根長(zhǎng)度。

    1.2.5 數(shù)據(jù)分析每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次,結(jié)果取平均值。采用OriginLab Origin V8.5軟件對(duì)數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行分析及繪圖。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 介體對(duì)脫色的影響

    為了找到最佳的介體,作者探究了7種介體對(duì)偶氮染料脫色率的影響(見(jiàn)圖1)。不添加介體(CK)的情況下漆酶對(duì)偶氮染料的脫色率為0,表明偶氮染料不是Lac-L的直接底物,Tavares等[21]和Zeng等[22]也發(fā)現(xiàn)漆酶不可催化偶氮染料降解,而李松等報(bào)道了Trametes sp.LS-10C漆酶無(wú)須介體參與就可以降解偶氮染料,但無(wú)介體時(shí)脫色效率較低,添加介體后脫色效率顯著提高。在添加介體的情況下,3種偶氮染料都有不同程度的降解。以DMP為介體時(shí)效果最差,利用HBT、ABTS、AS、SYR 4種介體,漆酶對(duì)偶氮染料都有較好的脫色效果,其中以HBT為介體時(shí)脫色效率最高。Khlifi[23]等發(fā)現(xiàn)HBT為T(mén)rametes trogii漆酶催化染料脫色的最佳介體,而來(lái)源于Aspergillus sp.的漆酶以ABTS為介體時(shí)對(duì)RB5脫色效果最好,以HBT、TEMPO、VAN為介體時(shí)脫色效率較低[21],王天女[24]考察了酵母表達(dá)的重組血紅密孔菌漆酶對(duì)RB5的脫色能力,研究中發(fā)現(xiàn)VAN是促進(jìn)RB5脫色的最佳介體,而以AS為介體時(shí)脫色效果較差。因此,不同來(lái)源的漆酶在催化染料脫色時(shí)不同介體的催化效率存在一定的差異。

    圖1 介體對(duì)染料脫色的影響Fig.1 Effect of redox mediators on decolorization of dyes

    2.2 溫度對(duì)染料脫色的影響

    反應(yīng)溫度是影響酶催化效率的重要因素,在一定溫度范圍內(nèi),染料脫色率隨著溫度的升高而升高,當(dāng)溫度升高到70℃時(shí),3種染料的脫色率均有所下降,可能與高溫導(dǎo)致漆酶失活有關(guān)。在40~60℃的溫度范圍內(nèi),3種染料均有較好的脫色率,50℃時(shí)脫色率最高(見(jiàn)圖2)。

    圖2 溫度對(duì)染料脫色的影響Fig.2 Effect of temperature on decoloration of dyes

    以漆法降解染料的研究中,SUKALacc[25]在反應(yīng)溫度大于35℃后脫色效率逐漸下降,Ganoderma lucidum U-281漆酶在溫度大于40℃后,脫色效率迅速降低,可能由于其熱穩(wěn)定性較差,因而在較高溫度下酶失活的速率快而導(dǎo)致染料的脫色率降低;在以菌體降解染料的研究中,Karunya等[26]報(bào)道了利用Moraxella osloensis降解偶氮染料,最適溫度為35℃,當(dāng)溫度達(dá)到50℃時(shí),脫色效率大大降低,反應(yīng)48 h后的脫色率僅有24%,石貝杰[27]利用云芝降解偶氮染料,當(dāng)溫度大于28℃時(shí),脫色效率隨著溫度的升高而迅速下降。在印染工序中,需要45℃以上熱水的工序占整個(gè)工序的90%左右,60℃和90℃以上的分別占整個(gè)工序的45%和10%左右,因此印染廢水的溫度較高[28],在印染廢水處理的實(shí)際應(yīng)用中應(yīng)該考慮到酶或菌體的耐熱性。相比較而言,Pycnoporus sp.SYBC-L3漆酶Lac-L的反應(yīng)溫度高,熱穩(wěn)定性較好[18]。因此,在工業(yè)化印染廢水處理中有一定的應(yīng)用前景。

    2.3 pH對(duì)染料脫色的影響

    反應(yīng)體系的pH是影響酶反應(yīng)速率的另一個(gè)關(guān)鍵因素。AR1和RV5R在pH值為4.0時(shí)脫色率最高,而RB5的最適反應(yīng)pH值為5.0。隨著pH的增高,3種染料的脫色率先升高后下降,在中性和堿性條件下,AR1和RV5R僅有不到5%的脫色率,RB5在pH值為8時(shí)也僅有6.4%的脫色率(見(jiàn)圖3)。在Zeng[29]、Ashrafi[30]和Forootanfar[31]等的研究中,漆酶在pH值在3~5時(shí)對(duì)染料的脫色率較高,之后隨著pH的升高脫色率逐漸下降,本論文中pH對(duì)脫色率的影響與之相似。因此,在印染廢水脫色處理過(guò)程中,為了提高脫色效率,需適當(dāng)調(diào)節(jié)原水的pH到酸性范圍。

    圖3 pH值對(duì)染料脫色的影響Fig.3 Effect of pH on decoloration of dyes

    2.4 漆酶用量對(duì)脫色率的影響

    反應(yīng)體系中漆酶活力從0.1 U/mL上升至1 U/mL時(shí),3種染料的脫色率隨著漆酶活力的升高而升高,當(dāng)漆酶活力大于1 U/mL時(shí),脫色率無(wú)明顯升高(見(jiàn)圖4)。趙世光等[10]利用漆酶降解偶氮染料,酶用量為2 U/mL,Murugesan等[32]的酶用量為2.5 U/mL,而李松等[33]的漆酶用量達(dá)到了10 U/mL。在實(shí)際處理染料廢水時(shí)要考慮到成本問(wèn)題,酶用量越多其越成本越高,應(yīng)該在充分考慮脫色率的基礎(chǔ)上減少酶消耗量,提高染料降解方法的經(jīng)濟(jì)性。

    圖4 漆酶用量對(duì)染料脫色的影響Fig.4 Effects of laccase dosage on decolorization of dyes

    2.5 染料質(zhì)量濃度對(duì)脫色率的影響

    當(dāng)染料質(zhì)量濃度分別在10~30 mg/L(AR1)、10~50 mg/L(RB5)、20~50 mg/L(RV5R)的 范圍 內(nèi)時(shí),漆酶對(duì)3種染料的脫色率最高,后續(xù)實(shí)驗(yàn)染料質(zhì)量濃度分別選用30 mg/L(AR1)、50 mg/L(RB5、RV5R)(見(jiàn)圖5)。不同的染料,其質(zhì)量濃度變化對(duì)脫色率的影響不同,隨著染料質(zhì)量濃度升高,AR1的脫色率下降最快,當(dāng)染料質(zhì)量濃度增加到100 mg/L時(shí),與最高脫色率相比,3種染料的脫色率分別下降了43.4%(AR1)、14.3%(RB5)、10.5%(RV5R)。染料質(zhì)量濃度對(duì)脫色反應(yīng)存在一定的影響,Claus[34]、Ramirez[35]、Sayahi[13]等的報(bào)道中也存在類(lèi)似的情況。

    圖5 染料質(zhì)量濃度對(duì)染料脫色的影響Fig.5 Effects of dye concentration on decolorization of dyes

    2.6 最優(yōu)條件下脫色率隨時(shí)間變化趨勢(shì)

    根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果,在最佳脫色反應(yīng)條件下,連續(xù)脫色一段時(shí)間,期間定時(shí)取樣測(cè)定吸光度,觀察脫色反應(yīng)中脫色率隨時(shí)間的變化規(guī)律,結(jié)果如圖6所示。結(jié)果表明,漆酶對(duì)3種偶氮染料的脫色率隨著反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)而增加,但是脫色速率逐漸減慢。AR1和RV5R幾乎完全降解,其脫色率分別為96.1%(AR1)和97.8%(RV5R),而RB5的最大脫色率為83.8%。不同染料的降解速度不同,AR1在2.5 h即脫色完畢,而RB5和RV5R達(dá)到最大脫色率需要5 h。

    圖6 脫色率隨時(shí)間變化趨勢(shì)Fig.6 Change of decolorization rate of dyes with time

    在染料脫色處理中,脫色時(shí)間和脫色率是整體評(píng)價(jià)脫色效率的2個(gè)重要指標(biāo)。Zhou等[15]使用固定化的芽孢桿菌漆酶處理AR1,48 h后脫色率僅有69.7%。趙世光等[10]采用Ganoderma lucidum粗漆酶處理直接橙S脫色,1.5 h脫色率為63.0%,此后隨著脫色時(shí)間的延長(zhǎng),脫色率沒(méi)有明顯的上升。Yadav等[36]以重組漆酶催化降解臺(tái)盼藍(lán)36 h,脫色率達(dá)到91.7%。Trametes versicolor漆酶在固定和游離狀態(tài)下對(duì)酸性橙的脫色率(6 h)分別為39%和63%,在添加外源介體ABTS的情況下,脫色率均上升到73%[37]。綜合對(duì)比以上研究,本研究中密孔菌漆酶Lac-L對(duì)3種偶氮染料的脫色時(shí)間相對(duì)較短、脫色率較高,因此該漆酶具有較好的應(yīng)用前景。

    2.7 偶氮染料脫色前后吸收?qǐng)D譜變化

    分別對(duì)脫色前后的染料溶液、HBT和漆酶-HBT反應(yīng)液進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描,結(jié)果如圖7所示。結(jié)果顯示,與對(duì)照樣品相比,3種偶氮染料在其最大吸收波長(zhǎng)處的吸收峰均有明顯的降低,其中AR1和RV5R的吸收峰幾乎完全消失,RB5在597 nm處仍有一定的吸光值,這與之前的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相同。酶降解后的AR1的光譜圖上出現(xiàn)了新的吸收峰,與未降解染料的最大吸收峰相比,該峰的最大吸收波長(zhǎng)變短且吸光值顯著降低,曾祥康[38]在毛栓菌漆酶對(duì)AR1降解中也觀察到了新的吸收峰的出現(xiàn),王志新[39]采用HPLC方法觀察到漆酶降解AR1后有新物質(zhì)的出現(xiàn)。

    圖7 染料溶液AR1、RB5、RV5R經(jīng)漆酶催化脫色前后吸收?qǐng)D譜變化Fig.7 Absorption spectrograms of AR1,RB5,RV5R solutions before and after decoloration catalyzed by laccase

    2.8 偶氮染料降解前后對(duì)作物發(fā)芽的研究

    為了使染料廢水得到處理,除了需要去除其中的顏色外,還得保證脫色后的產(chǎn)物沒(méi)有毒性才能將其排放。對(duì)偶氮染料及其酶解產(chǎn)物進(jìn)行小麥和水稻種子的生態(tài)毒理實(shí)驗(yàn)(見(jiàn)表2—3),結(jié)果顯示,利用偶氮染料灌溉小麥和水稻種子,其發(fā)芽率顯著降低,小麥發(fā)芽率僅有57.6%~71.7%,水稻發(fā)芽率為73.3%~81.7%,而染料降解后對(duì)種子發(fā)芽的影響大大降低,小麥和水稻發(fā)芽率均達(dá)到90%以上,對(duì)發(fā)芽率無(wú)明顯的抑制作用。使用未降解的染料灌溉小麥種子后,根和胚芽的生長(zhǎng)受到強(qiáng)烈的抑制作用,對(duì)胚芽抑制率在20%~25%,對(duì)根生長(zhǎng)抑制率在50%以上,染料降解后對(duì)根和胚芽生長(zhǎng)的抑制顯著降低,但仍存在一定的抑制作用,對(duì)胚芽生長(zhǎng)的抑制率不到10%,對(duì)根生長(zhǎng)的抑制率在24.5%~32.0%。與對(duì)照相比,偶氮染料對(duì)水稻種子芽生長(zhǎng)的抑制率接近30%,對(duì)水稻根生長(zhǎng)的抑制率均超過(guò)60%,而染料降解后對(duì)芽和根生長(zhǎng)的脅迫有所減弱,但對(duì)其生長(zhǎng)仍有一定的影響。

    表2 偶氮染料降解前后對(duì)小麥發(fā)芽的影響Table 2 Effect of azo dyes before and after degradations on wheat germination

    表3 偶氮染料降解前后對(duì)水稻發(fā)芽的影響Table 3 Effect of azo dyes before and after degradations on rice germination

    偶氮染料降解前后對(duì)其他物種的毒性變化也有報(bào)道,Ghodake等[40]的研究表明,染料降解后對(duì)高粱和菜豆的發(fā)芽不存在抑制作用,對(duì)根和芽生長(zhǎng)的抑制率也顯著降低;Ashrafi等[30]報(bào)道了偶氮染料降解后對(duì)微生物 (E.coli、P.aeruginosa、S.typhi、B.subtilis、S.aureus、M.luteus)的毒性顯著降低。因此利用漆酶降解偶氮染料不僅具有脫色作用,還有一定的脫毒作用。

    3 結(jié)語(yǔ)

    以Pycnoporus sp.SYBC-L3所產(chǎn)漆酶Lac-L對(duì)3種偶氮染料進(jìn)行脫色,通過(guò)對(duì)介體、反應(yīng)溫度、pH、染料質(zhì)量濃度、酶用量這些因素逐個(gè)考察后,得到最佳脫色條件:采用HBT為介體、50℃、pH分別為4.0(AR1,RV5R)和5.0(RB5)、染料質(zhì)量濃度分別為30 mg/L(AR1)和50 mg/L(RB5、RV5R)、漆酶用量1 U/mL。在該條件下,AR1脫色2.5 h達(dá)到最大脫色率96.1%,RB5和RV5R在5 h分別達(dá)到最大脫色率83.8%和97.8%。Lac-L催化3種偶氮染料脫色的效果良好,時(shí)間相對(duì)較短,并且能夠在較高的溫度下進(jìn)行脫色反應(yīng),具有一定的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。

    工業(yè)廢水排放后有可能被用于灌溉田地。脫色前染料對(duì)種子發(fā)芽率、根和胚芽的生長(zhǎng)有顯著的抑制作用,可見(jiàn)未經(jīng)處理的染料廢水不可用于農(nóng)田灌溉,而降解后的染料廢水對(duì)小麥和水稻發(fā)芽率沒(méi)有影響,對(duì)根和胚芽生長(zhǎng)的影響也大大降低,說(shuō)明其毒性有所降低。在偶氮染料廢水處理中,除了顏色的脫去外,也需要關(guān)注有機(jī)物的降解及毒性的變化。染料脫色后產(chǎn)生的是何種降解產(chǎn)物,這些產(chǎn)物對(duì)不同的動(dòng)物、植物、微生物是否有毒性,仍需要開(kāi)展深入研究。

    猜你喜歡
    介體偶氮染料漆酶
    利用正構(gòu)烷烴建立快速篩查禁用偶氮染料定性分析方法探究
    介體不同投加方式強(qiáng)化低溫污水生物反硝化脫氮
    以竹粉為基質(zhì)固態(tài)培養(yǎng)蟲(chóng)擬蠟菌及其產(chǎn)漆酶條件研究
    紡織品偶氮染料中致癌芳香胺檢測(cè)的研究進(jìn)展及存在問(wèn)題
    漆酶用于環(huán)境修復(fù)的研究及應(yīng)用前景
    漆酶介體催化的研究進(jìn)展
    偶氮染料與化合物的顏色及危害
    西藏科技(2015年1期)2015-09-26 12:09:32
    無(wú)介體微生物燃料電池陽(yáng)極生物膜傳質(zhì)分析
    一種基于電荷轉(zhuǎn)移的電催化氧化還原系統(tǒng)
    石油化工(2015年11期)2015-08-15 00:43:05
    青霉菌產(chǎn)漆酶的研究及在木質(zhì)素降解中的應(yīng)用
    小蜜桃在线观看免费完整版高清| 成年女人看的毛片在线观看| 亚洲av二区三区四区| 成人精品一区二区免费| 国产成人欧美在线观看| 熟女电影av网| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产精品电影一区二区三区| 人人妻人人看人人澡| 一本综合久久免费| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 成人永久免费在线观看视频| 日韩大尺度精品在线看网址| 直男gayav资源| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 免费在线观看日本一区| 男女那种视频在线观看| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 极品教师在线视频| 亚洲中文日韩欧美视频| 国内精品美女久久久久久| 精品一区二区免费观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 99久久精品国产亚洲精品| 国产精品野战在线观看| 成年女人看的毛片在线观看| 91麻豆精品激情在线观看国产| 岛国在线免费视频观看| 最新在线观看一区二区三区| 免费av观看视频| 老熟妇仑乱视频hdxx| 日韩欧美三级三区| 亚洲av.av天堂| 免费看美女性在线毛片视频| 热99re8久久精品国产| 精品国内亚洲2022精品成人| 成年女人看的毛片在线观看| 亚洲,欧美精品.| 国产精品伦人一区二区| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产一级毛片七仙女欲春2| 我的女老师完整版在线观看| 久久午夜福利片| 校园春色视频在线观看| 特级一级黄色大片| 欧美日本亚洲视频在线播放| 中文字幕熟女人妻在线| 三级毛片av免费| 欧美最黄视频在线播放免费| 成年女人看的毛片在线观看| 亚洲av免费在线观看| 午夜老司机福利剧场| 久久精品国产亚洲av天美| 伦理电影大哥的女人| 3wmmmm亚洲av在线观看| 一区二区三区四区激情视频 | 日韩精品中文字幕看吧| 亚洲欧美日韩无卡精品| 深爱激情五月婷婷| 首页视频小说图片口味搜索| 久久久久久久久久成人| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 欧美性感艳星| 99热这里只有是精品在线观看 | 欧美zozozo另类| 99久国产av精品| 欧美+日韩+精品| 亚洲美女黄片视频| 免费看美女性在线毛片视频| 久久久国产成人精品二区| 欧美乱色亚洲激情| 村上凉子中文字幕在线| 国产精品女同一区二区软件 | 成人特级av手机在线观看| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 国产伦在线观看视频一区| 波多野结衣高清无吗| 久久久久久国产a免费观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 免费一级毛片在线播放高清视频| 悠悠久久av| 国产精品日韩av在线免费观看| 无人区码免费观看不卡| 日韩欧美在线乱码| av中文乱码字幕在线| 亚洲性夜色夜夜综合| 青草久久国产| 午夜免费激情av| 偷拍熟女少妇极品色| 69人妻影院| 精品熟女少妇八av免费久了| 色尼玛亚洲综合影院| 欧美+日韩+精品| 99视频精品全部免费 在线| 婷婷精品国产亚洲av在线| 欧美三级亚洲精品| 人人妻人人澡欧美一区二区| 深夜a级毛片| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产黄a三级三级三级人| 听说在线观看完整版免费高清| 99riav亚洲国产免费| 美女 人体艺术 gogo| www.熟女人妻精品国产| 欧美+日韩+精品| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 日韩精品青青久久久久久| 亚洲国产精品999在线| 久久这里只有精品中国| 欧美黑人欧美精品刺激| 天美传媒精品一区二区| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲天堂国产精品一区在线| 黄色配什么色好看| 无遮挡黄片免费观看| 黄色一级大片看看| 我要看日韩黄色一级片| 18美女黄网站色大片免费观看| 国产美女午夜福利| 国产v大片淫在线免费观看| 免费在线观看日本一区| 亚洲av二区三区四区| 亚洲国产精品999在线| av在线天堂中文字幕| 少妇人妻精品综合一区二区 | 97人妻精品一区二区三区麻豆| 一区二区三区四区激情视频 | 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 亚洲欧美激情综合另类| 又黄又爽又免费观看的视频| 草草在线视频免费看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 久久久精品大字幕| 麻豆久久精品国产亚洲av| 男女床上黄色一级片免费看| 欧美日韩福利视频一区二区| 亚洲一区二区三区不卡视频| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 两个人视频免费观看高清| 免费看光身美女| 一a级毛片在线观看| 日韩高清综合在线| 美女被艹到高潮喷水动态| 久久欧美精品欧美久久欧美| 亚洲av第一区精品v没综合| 色尼玛亚洲综合影院| 精品一区二区三区人妻视频| 极品教师在线免费播放| 成熟少妇高潮喷水视频| 久久精品91蜜桃| 成人特级av手机在线观看| 亚洲精品456在线播放app | 久久这里只有精品中国| 精品欧美国产一区二区三| 亚洲中文日韩欧美视频| 欧美在线黄色| 嫁个100分男人电影在线观看| 真人做人爱边吃奶动态| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 欧美激情久久久久久爽电影| 香蕉av资源在线| 久9热在线精品视频| 日韩欧美在线乱码| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 久久国产乱子免费精品| 欧美三级亚洲精品| 九九热线精品视视频播放| 欧美中文日本在线观看视频| av天堂中文字幕网| 久久久久久国产a免费观看| 99久国产av精品| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 国产一区二区激情短视频| 久久久国产成人精品二区| 国产老妇女一区| 天堂√8在线中文| 国产成人欧美在线观看| 亚洲成人免费电影在线观看| a级毛片免费高清观看在线播放| 老司机福利观看| 在线天堂最新版资源| 欧美一区二区国产精品久久精品| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 精品日产1卡2卡| 一个人看的www免费观看视频| 亚洲18禁久久av| 欧美3d第一页| 日本黄色视频三级网站网址| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 欧美高清性xxxxhd video| 成人特级黄色片久久久久久久| 国产精品日韩av在线免费观看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 亚洲在线自拍视频| 亚洲自拍偷在线| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 国产精品野战在线观看| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 国产探花在线观看一区二区| av国产免费在线观看| 欧美成狂野欧美在线观看| 搡老熟女国产l中国老女人| 久久久久久久久大av| x7x7x7水蜜桃| 免费av不卡在线播放| 国产成人福利小说| 欧美极品一区二区三区四区| 国内精品美女久久久久久| 男女之事视频高清在线观看| 午夜精品一区二区三区免费看| 无遮挡黄片免费观看| 给我免费播放毛片高清在线观看| 亚洲成av人片在线播放无| 丰满的人妻完整版| 少妇人妻精品综合一区二区 | 51午夜福利影视在线观看| 亚洲在线自拍视频| 日韩中字成人| 熟女人妻精品中文字幕| 亚洲av二区三区四区| 午夜福利免费观看在线| 国产久久久一区二区三区| 91字幕亚洲| 欧美成人性av电影在线观看| 亚洲成a人片在线一区二区| 国产精品电影一区二区三区| 欧美日本视频| 日韩欧美国产一区二区入口| 九色成人免费人妻av| 欧美成狂野欧美在线观看| 看免费av毛片| 日韩欧美 国产精品| 国产av不卡久久| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 麻豆一二三区av精品| 亚洲 国产 在线| 国产成人福利小说| bbb黄色大片| 中文字幕高清在线视频| 亚洲乱码一区二区免费版| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 成人av在线播放网站| 免费av观看视频| 国产不卡一卡二| 毛片女人毛片| 欧美+日韩+精品| 少妇的逼好多水| 校园春色视频在线观看| 波多野结衣高清无吗| 亚洲五月婷婷丁香| 真人做人爱边吃奶动态| 国产高清激情床上av| 国产日本99.免费观看| 国产一区二区三区视频了| 丝袜美腿在线中文| 在线观看舔阴道视频| 天堂动漫精品| 色av中文字幕| 精品人妻偷拍中文字幕| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产成+人综合+亚洲专区| 哪里可以看免费的av片| 日韩欧美国产在线观看| 99国产极品粉嫩在线观看| 露出奶头的视频| 国产v大片淫在线免费观看| 少妇丰满av| 国产av不卡久久| 国产淫片久久久久久久久 | 免费人成在线观看视频色| 神马国产精品三级电影在线观看| 久久久精品欧美日韩精品| 亚洲人与动物交配视频| 中文资源天堂在线| 国产精品av视频在线免费观看| 男插女下体视频免费在线播放| 99精品在免费线老司机午夜| 久久精品人妻少妇| 最近视频中文字幕2019在线8| 色综合欧美亚洲国产小说| 一个人看的www免费观看视频| 亚洲av免费在线观看| 亚洲人成伊人成综合网2020| 国产精品乱码一区二三区的特点| 色哟哟·www| 大型黄色视频在线免费观看| 啪啪无遮挡十八禁网站| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 欧美色视频一区免费| 欧美不卡视频在线免费观看| 美女xxoo啪啪120秒动态图 | 午夜亚洲福利在线播放| 久久久久久久久中文| 日韩欧美三级三区| www.熟女人妻精品国产| 男人舔女人下体高潮全视频| 99热这里只有是精品在线观看 | 亚洲av不卡在线观看| 亚洲专区中文字幕在线| 日本一二三区视频观看| 少妇高潮的动态图| 免费观看人在逋| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 日韩欧美一区二区三区在线观看| 亚洲av不卡在线观看| 日本与韩国留学比较| 一级作爱视频免费观看| 欧美日韩黄片免| 一边摸一边抽搐一进一小说| 欧美精品啪啪一区二区三区| 免费大片18禁| 国产在线男女| 免费高清视频大片| 亚洲人成网站高清观看| 高清日韩中文字幕在线| 99热这里只有精品一区| 亚洲国产精品999在线| xxxwww97欧美| 亚洲 国产 在线| 一级作爱视频免费观看| 国内精品一区二区在线观看| 亚洲激情在线av| 无人区码免费观看不卡| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 国产精品爽爽va在线观看网站| 高清在线国产一区| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 久久人妻av系列| 一进一出抽搐gif免费好疼| 日日干狠狠操夜夜爽| 亚洲av成人精品一区久久| 国产男靠女视频免费网站| 午夜福利在线观看吧| av专区在线播放| 精品人妻视频免费看| 高清毛片免费观看视频网站| 亚洲成av人片在线播放无| 97碰自拍视频| 亚洲精华国产精华精| 免费一级毛片在线播放高清视频| 搡老岳熟女国产| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产精品99久久久久久久久| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 看免费av毛片| 丰满人妻一区二区三区视频av| 国产中年淑女户外野战色| 免费无遮挡裸体视频| 成人特级av手机在线观看| 日本在线视频免费播放| 日韩免费av在线播放| 欧美黑人巨大hd| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 美女被艹到高潮喷水动态| 国内揄拍国产精品人妻在线| 精品人妻熟女av久视频| 婷婷精品国产亚洲av| 精品久久久久久久久av| 亚洲人成网站在线播| 精品人妻偷拍中文字幕| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 久久久久免费精品人妻一区二区| 宅男免费午夜| 老司机午夜福利在线观看视频| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 搡老妇女老女人老熟妇| 成人欧美大片| 亚洲,欧美精品.| 中文在线观看免费www的网站| 亚洲综合色惰| 久久国产精品人妻蜜桃| 在线免费观看的www视频| av在线老鸭窝| 久久精品影院6| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 天堂√8在线中文| 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲国产欧美人成| 免费av观看视频| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产精品女同一区二区软件 | www日本黄色视频网| 成人鲁丝片一二三区免费| 久久热精品热| 男人的好看免费观看在线视频| 欧美激情国产日韩精品一区| 亚洲国产欧美人成| 黄色丝袜av网址大全| 两个人的视频大全免费| 丝袜美腿在线中文| 中文字幕av在线有码专区| 男人舔女人下体高潮全视频| 精品久久久久久成人av| 久久草成人影院| 91字幕亚洲| 亚洲最大成人手机在线| 国产精品国产高清国产av| 亚洲七黄色美女视频| 国产毛片a区久久久久| 日本 欧美在线| 国产视频一区二区在线看| 在线观看午夜福利视频| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 最近在线观看免费完整版| 中文字幕av成人在线电影| 老司机午夜十八禁免费视频| 成人三级黄色视频| 日本三级黄在线观看| 亚洲综合色惰| 国内精品久久久久精免费| 亚洲国产欧美人成| 一本综合久久免费| 欧美在线一区亚洲| 国产视频一区二区在线看| 丰满的人妻完整版| 男人狂女人下面高潮的视频| 白带黄色成豆腐渣| 人妻制服诱惑在线中文字幕| АⅤ资源中文在线天堂| 色综合欧美亚洲国产小说| 久久精品人妻少妇| 国产亚洲精品久久久com| 国产毛片a区久久久久| 国产精品日韩av在线免费观看| 天堂影院成人在线观看| av国产免费在线观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 一区二区三区激情视频| 日韩欧美免费精品| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国产91精品成人一区二区三区| 亚洲男人的天堂狠狠| 成年人黄色毛片网站| 亚洲最大成人中文| av在线天堂中文字幕| 99久久精品一区二区三区| 免费电影在线观看免费观看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 97碰自拍视频| 麻豆国产av国片精品| 男人的好看免费观看在线视频| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 久久久精品欧美日韩精品| 日韩大尺度精品在线看网址| 免费电影在线观看免费观看| 别揉我奶头 嗯啊视频| 欧美在线黄色| 色视频www国产| 91字幕亚洲| 国产真实乱freesex| 身体一侧抽搐| 国产亚洲精品久久久com| 99久久无色码亚洲精品果冻| av专区在线播放| 五月玫瑰六月丁香| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 亚洲av熟女| 亚洲一区二区三区不卡视频| 久久精品综合一区二区三区| av在线老鸭窝| 香蕉av资源在线| 国产成人啪精品午夜网站| eeuss影院久久| 婷婷丁香在线五月| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产麻豆成人av免费视频| 国产高清视频在线播放一区| 97热精品久久久久久| 一区二区三区免费毛片| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 最近视频中文字幕2019在线8| 国产精品野战在线观看| 亚洲内射少妇av| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲av免费在线观看| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 亚洲美女视频黄频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 丁香欧美五月| 成人鲁丝片一二三区免费| 精品人妻1区二区| 久9热在线精品视频| 国产极品精品免费视频能看的| 欧美成人一区二区免费高清观看| 黄色配什么色好看| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产伦一二天堂av在线观看| 欧美一区二区国产精品久久精品| 美女被艹到高潮喷水动态| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 国产综合懂色| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 婷婷丁香在线五月| 99国产极品粉嫩在线观看| 亚洲人成电影免费在线| 久久香蕉精品热| 欧美成人a在线观看| 精品福利观看| 嫩草影院新地址| 9191精品国产免费久久| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产精品久久久久久精品电影| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产精品影院久久| av女优亚洲男人天堂| 久久精品91蜜桃| 午夜免费激情av| 日本成人三级电影网站| 久久久久久久精品吃奶| 亚洲欧美日韩东京热| 18禁在线播放成人免费| 人人妻人人看人人澡| 精品久久久久久久久av| 免费在线观看日本一区| 天堂√8在线中文| 免费人成在线观看视频色| 麻豆国产97在线/欧美| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 久久人人精品亚洲av| 麻豆av噜噜一区二区三区| 久久国产乱子伦精品免费另类| 男人狂女人下面高潮的视频| 3wmmmm亚洲av在线观看| 日本三级黄在线观看| 色吧在线观看| 看免费av毛片| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 国产精品爽爽va在线观看网站| 色5月婷婷丁香| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 婷婷亚洲欧美| 最后的刺客免费高清国语| 欧美日韩黄片免| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲美女黄片视频| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| av在线老鸭窝| 国产精品三级大全| 免费av观看视频| 日本a在线网址| 国产精品1区2区在线观看.| 男人的好看免费观看在线视频| 国产精品一区二区性色av| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 夜夜躁狠狠躁天天躁| 久久久久久国产a免费观看| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 亚洲最大成人手机在线| 一进一出抽搐gif免费好疼| 国产日本99.免费观看| 成人三级黄色视频| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 精品久久久久久久久久久久久| 88av欧美| 国产伦精品一区二区三区四那| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 一级毛片久久久久久久久女| 欧美激情久久久久久爽电影| 日本 欧美在线| 在线观看免费视频日本深夜| 在线观看午夜福利视频| 不卡一级毛片| 精品熟女少妇八av免费久了| 日本免费一区二区三区高清不卡| 熟女人妻精品中文字幕| 精品人妻偷拍中文字幕| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲真实伦在线观看| 性欧美人与动物交配| 久久国产乱子免费精品| 99久国产av精品| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 亚洲色图av天堂| 日韩高清综合在线| 99视频精品全部免费 在线| 嫁个100分男人电影在线观看| 999久久久精品免费观看国产| 亚洲国产色片| 亚洲精品一区av在线观看| xxxwww97欧美| 婷婷色综合大香蕉| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 美女黄网站色视频| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 日本黄大片高清| 99热这里只有是精品在线观看 | 国产在视频线在精品| 国产精品日韩av在线免费观看| 日本熟妇午夜| 亚洲五月婷婷丁香| 久久久久亚洲av毛片大全| 亚洲avbb在线观看| 男女床上黄色一级片免费看| 在线观看舔阴道视频| 亚洲五月天丁香| 国产一区二区三区视频了| 一级黄片播放器| 一级a爱片免费观看的视频|