多穗金粟蘭的化學成分及其抗炎活性研究

黃偉明，陳芳有，卞玉婷，張睿增，劉定平，雙鵬程，羅永明

江西中醫(yī)藥大學藥學院，南昌 330004

多穗金粟蘭(ChloranthusmultistachysPei)為金粟蘭科(Chloranthaceae)金粟蘭屬(ChloranthusSw.)植物，又名四塊瓦、大四塊瓦、四葉對、白毛七等，廣泛分布于我國南方地區(qū)。該植物常以全草入藥，其性味辛、苦、有小毒，具有祛濕散寒、活血止痛、散瘀解毒等功效，主治風寒咳嗽、瘀血腫痛、腰腿痛、癤腫、皮膚瘙癢等病癥，是江西民間常用中草藥之一[1]。多穗金粟蘭的藥理學研究表明，其具有抗炎、抑菌、抗腫瘤等作用[2]。目前對于多穗金粟蘭的化學成分研究報道較少，只見少量的倍半萜類、酰胺、甾醇等類型化合物的研究報道[3]，致使其藥效物質基礎不清楚，嚴重影響了該藥的研究與開發(fā)。因此，對該植物進行系統(tǒng)的化學成分研究與藥理活性篩選十分必要。本課題組在前期的活性篩選中發(fā)現(xiàn)，多穗金粟蘭的二氯甲烷部位有較好的抗炎活性。為進一步闡明其抗炎活性的有效活性成分，為其臨床合理用藥提供科學依據(jù)，我們對多穗金粟蘭的二氯甲烷部物的化學成分進行了較深入的研究，并對部分化合物進行了抗炎活性研究，以期為多穗金粟蘭的進一步開發(fā)和利用提供一定的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

Bruker AVANCE III HD 600MHz型核磁共振波譜儀(Bruker，瑞士)；AB SCIEX Triple TOF5600+型高分辨飛行時間質譜聯(lián)用儀(AB SCIEX，美國)；RAW264.7細胞株(中科院上海生命科學研究院)；脂多糖(LPS)；Griess試劑(碧云天公司)；酶標儀(BioTek公司，Synergy 4 MLFPTAD)；氨基胍(Aminoguanidine)；胰蛋白酶(Gibco)；離心機(Beckman公司，AllegraX-15R)；培養(yǎng)皿(Corning)、培養(yǎng)瓶(Corning)、48孔板(Corning)；Waters 2695-2998型高效液相(Waters，美國)；Waters 515 制備型液相(Waters，美國)；葡聚糖凝膠Sephadex LH-20(Amersham Pharmacia Biotech，美國)；YMC-Pack ODS-A制備色譜柱(250 mm×20 mm，5 μm，YMC，日本)；Buchi中壓制備液相色譜儀(Buchi，瑞士)；YMC ODS反相色譜填料(50 μm，YMC，日本)；PRP 512 A樹脂(75～100 μm，北京聚福樹脂廠)；AB-104N型分析天平(METTLER TOLEDO，瑞士)；薄層硅膠板GF254(青島海洋化工廠)；柱色譜用硅膠(100～200，200～300目)青島海洋化工廠；純凈水(哇哈哈，杭州)；甲醇(星可，上海)為色譜純，其他所用試劑均為分析純(西隴科學股份有限公司)。

多穗金粟蘭全草于2018年11月采自江西井岡山，由江西中醫(yī)藥大學藥學院鄧可眾副教授鑒定為金粟蘭科金粟蘭屬多穗金粟蘭(ChloranthusmultistachysPei)的全草。憑證標本(20181128)保存于江西中醫(yī)藥大學藥學院中藥化學科研室。

1.2 提取與分離

多穗金粟蘭全草20 kg，切碎后加4倍量的95%乙醇提取2次，合并提取液，減壓濃縮至無醇味，得浸膏1 100 g。取部分總浸膏經硅藻土柱色譜，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇洗脫，各洗脫液分別減壓濃縮后得石油醚部位130 g、二氯甲烷部位375 g、乙酸乙酯部位30 g、甲醇部位300 g。

二氯甲烷部位浸膏經PRP 512 A樹脂柱色譜分離(梯度依次為30%、50%、70%、95%乙醇)得到4個組分A～D。其中B組分(100 g)經硅膠(100～200目)柱色譜分離，以石油醚∶乙酸乙酯(20∶1→0∶1)為流動相梯度洗脫，經薄層色譜合樣后得到10個組分Fr1～Fr10。Fr8(8 g)通過中壓ODS柱色譜(甲醇-水)、葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱色譜(甲醇)和重結晶分離純化得到化合物5(20 mg)、11(20 mg)、14(9 mg)、15(8 mg)。Fr9(14.9 g)經硅膠柱色譜分離(二氯甲烷-甲醇，50∶1→0∶1)、中壓ODS柱色譜(甲醇-水)和制備液相柱色譜(甲醇-水)分離純化得到化合物9(10 mg)、10(11 mg)、21(2 mg)、22(4 mg)；其中C組分(107 g)經硅膠(100～200目)柱色譜分離，以石油醚∶乙酸乙酯(30∶1→0∶1)為流動相梯度洗脫，經薄層色譜合樣后得到8個組分Fr1～Fr8。Fr4(18 g)通過硅膠柱色譜分離(二氯甲烷-甲醇，50∶1→0∶1)、中壓ODS柱色譜(甲醇-水)、葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱色譜(甲醇)和重結晶分離純化得到化合物1(2 mg)、6(15 mg)、7(14 mg)、12(13 mg)、13(10 mg)、16(11 mg)、17(12 mg)、18(4 mg)、19(3 mg)、20(4 mg)；其中D組分(30 g)經硅膠(100～200目)柱色譜分離，以石油醚∶乙酸乙酯(50∶1→0∶1)為流動相梯度洗脫，經薄層色譜合樣后得到5個組分Fr1～Fr5。Fr4(4.2 g)通過葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱色譜(甲醇)、薄層制備色譜和重結晶得到化合物2(3 mg)、3(3 mg)、4(3 mg)、8(9 mg)。

1.3 抗炎活性篩選方法

本實驗采用脂多糖(LPS)誘導的RAW264.7細胞炎癥篩選模型，對分離得率較高的化合物(5～17)進行了抗炎活性檢測，采用Griess試劑法測定其中產生一氧化氮(NO)的含量[4]以評價化合物的抗炎活性。取對數(shù)生長期的RAW264.7細胞經胰蛋白酶消化后重懸得到1×106個/mL的細胞懸液，鋪板于48孔板中，每孔200 μL，在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)12 h。再用10 μmol/L的單體化合物預處理1 h，再加入1 μg/mL LPS(終濃度)進行刺激，同時設置空白對照組(培養(yǎng)液)、非樣品組(LPS+培養(yǎng)液)、陽性對照組(氨基胍+LPS+培養(yǎng)液)，繼續(xù)培養(yǎng)持續(xù)刺激18 h。每組實驗在相同條件下設置3個復孔。取100 μL細胞培養(yǎng)液，加入等量Griess試劑(含A B液分別50 μL，碧云天公司)，經搖床避光充分混勻15 min后，用酶標儀于570 nm波長下測定各孔OD值，計算化合物的NO生成抑制率[5]。

2 實驗結果

2.1 結構鑒定

化合物1白色無定型粉末；HR-ESI-MS：m/z383.146 2 [M+Na]+(calcd for C20H24O6Na，383.146 5)，分子式為C20H24O6；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.94(1H，d，J=1.8 Hz，H-2)，6.75(1H，d，J=8.1 Hz，H-5)，6.82(1H，dd，J=8.1，2.1 Hz，H-6)，5.48(1H，d，J=6.3 Hz，H-7)，3.82(1H，m，H-8)，3.75(1H，dd，J=11.1，7.2 Hz，H-9a)，3.46(1H，q，J=6.3 Hz，H-9b)，6.72(2H，s，H-2′，6′)，2.62(2H，dd，J=8.7，6.9 Hz，H-7′)，1.80(2H，m，H-8′)，3.56(2H，t，J=6.5 Hz，H-9′)，3.81(3H，s，3-OCH3)，3.85(3H，s，3′-OCH3)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：134.8(C-1)，110.5(C-2)，149.1(C-3)，147.5(C-4)，116.1(C-5)，119.7(C-6)，89.0(C-7)，55.5(C-8)，65.0(C-9)，136.9(C-1′)，114.0(C-2′)，145.2(C-3′)，147.5(C-4′)，129.9(C-5′)，117.9(C-6′)，32.9(C-7′)，35.8(C-8′)，62.2(C-9′)，56.3(3-OCH3)，56.7(3′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[6]對照基本一致，故鑒定化合物1為(7S,8R)-dihydrodehydrodiconiferyl alcohol。

化合物2無色針狀結晶(甲醇)；HR-ESI-MS：m/z429.372 2 [M+H]+(calcd for C29H49O2，429.372 7)，分子式為C29H48O2；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：3.68(1H，m，H-3)，5.69(1H，br s，H-6)，2.45(3H，m)，2.24(1H，ddd，J=12.6，10.8，2.4 Hz)，2.09～1.02(17H，m，包括1.19(3H，H-19))，0.69(3H，s，H-18)，0.93(3H，d，J=6.6 Hz，H-21)，0.83(3H，d，J=6.6 Hz，H-26)，0.81(3H，d，J=6.6 Hz，H-27)，0.85(3H，d，J=7.2 Hz，H-29)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：36.5(C-1)，31.3(C-2)，70.7(C-3)，41.9(C-4)，165.2(C-5)，126.3(C-6)，202.5(C-7)，45.6(C-8)，50.1(C-9)，38.8(C-10)，21.4(C-11)，38.4(C-12)，43.2(C-13)，50.1(C-14)，26.5(C-15)，28.7(C-16)，54.8(C-17)，12.1(C-18)，17.5(C-19)，36.2(C-20)，19.1(C-21)，34.1(C-22)，26.2(C-23)，45.9(C-24)，29.2(C-25)，19.2(C-26)，20.0(C-27)，23.2(C-28)，12.1(C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻[7]對照基本一致，故鑒定化合物2為7-ketositosterol。

化合物3無色針狀結晶(甲醇)；HR-ESI-MS：m/z429.372 4 [M+H]+(calcd for C29H49O2，429.372 7)，分子式為C29H48O2；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：5.82(1H，d，J=0.9 Hz，H-4)，4.35(1H，m，H-6)，2.03(1H，m，H-7)，0.74(3H，s，H-18)，1.38(3H，s，H-19)，0.92(3H，d，J=6.6 Hz，H-21)，1.70(1H，m，H-25)，0.81(3H，m，H-26)，0.84(3H，m，H-27)，0.85(3H，d，J=7.5 Hz，H-29)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：37.2(C-1)，34.4(C-2)，200.6(C-3)，126.5(C-4)，168.6(C-5)，73.4(C-6)，38.7(C-7)，29.9(C-8)，53.7(C-9)，38.1(C-10)，21.1(C-11)，39.7(C-12)，42.6(C-13)，56.2(C-14)，24.3(C-15)，28.3(C-16)，56.0(C-17)，12.2(C-18)，19.7(C-19)，36.3(C-20)，18.9(C-21)，34.0(C-22)，26.7(C-23)，46.0(C-24)，29.3(C-25)，20.0(C-26)，19.2(C-27)，23.2(C-28)，12.1(C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻[8]對照基本一致，故鑒定化合物3為6β-羥基豆甾-4-烯-3-酮。

化合物4無色針狀結晶(甲醇)；HR-ESI-MS：m/z429.372 4 [M+H]+(calcd for C29H49O2，429.372 7)，分子式為C29H48O2；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：6.17(1H，d，J=1.8 Hz，H-4)，4.33(1H，ddd，J=12.3，5.7，1.8 Hz，H-6)，0.71(3H，s，H-18)，1.18(3H，s，H-19)，0.92(3H，d，J=6.6 Hz，H-21)，0.83(3H，d，J=6.9 Hz，H-26)，0.81(3H，d，J=6.9 Hz，H-27)，0.85(3H，d，J=7.5 Hz，H-29)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：36.4(C-1)，34.3(C-2)，199.6(C-3)，119.8(C-4)，171.7(C-5)，68.9(C-6)，41.6(C-7)，34.0(C-8)，53.9(C-9)，39.2(C-10)，21.2(C-11)，39.6(C-12)，42.6(C-13)，55.7(C-14)，24.3(C-15)，28.3(C-16)，56.1(C-17)，12.1(C-18)，18.4(C-19)，36.2(C-20)，18.8(C-21)，34.0(C-22)，26.2(C-23)，45.9(C-24)，29.3(C-25)，20.0(C-26)，19.2(C-27)，23.2(C-28)，12.1(C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻[9]對照基本一致，故鑒定化合物4為6α-羥基豆甾-4-烯-3-酮。

化合物5白色粉末；HR-ESI-MS：m/z267.159 7 [M+H]+(calcd for C15H23O4，267.159 6)，分子式為C15H22O4；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：1.11(1H，m，H-1a)，1.51(1H，m，H-1b)，1.39(1H，m，H-2a)，1.93(1H，m，H-2b)，1.42(1H，m，H-3a)，1.70(1H，m，H-3b)，1.09(1H，t，J=3.5 Hz，H-5)，2.44(1H，m，H-6a)，2.82(1H，dd，J=13.2，2.7 Hz，H-6b)，1.35(1H，d，J=8.4 Hz，H-9a)，2.06(1H，d，J=13.2 Hz，H-9b)，1.79(3H，d，J=1.5 Hz，H-13)，1.32(3H，d，J=3.9 Hz，H-14)，1.24(3H，s，H-15)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：42.6(C-1)，18.7(C-2)，41.7(C-3)，72.3(C-4)，55.8(C-5)，23.1(C-6)，164.4(C-7)，105.8(C-8)，54.9(C-9)，36.1(C-10)，121.9(C-11)，174.6(C-12)，7.9(C-13)，19.7(C-14)，30.4(C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻[10]對比基本一致，故鑒定化合物5為4β,8β-二羥基-5α(H)-桉葉-7(11)-烯-8,12-內酯。

化合物6白色塊狀結晶(甲醇)；HR-ESI-MS：m/z307.263 4 [M+H]+(calcd for C20H35O2，307.263 1)，分子式為C20H34O2；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：1.05(1H，m，H-1a)，1.78(1H，m，H-1b)，1.48(2H，m，H-2)，1.02(1H，m，H-3a)，1.72(1H，m，H-3b)，1.22(1H，m，H-5)，1.29(1H，m，H-6a)，1.82(1H，m，H-6b)，2.38(1H，ddd，J=12.6，4.2，2.4 Hz，H-7a)，1.93(1H，td，J=12.6，5.1 Hz，H-7b)，1.54(1H，m，H-9)，1.36(1H，m，H-11a)，1.52(1H，m，H-11b)，1.24(1H，m，H-12a)，1.76(1H，m，H-12b)，5.92(1H，m，H-14)，5.21(1H，dd，J=17.4，1.2 Hz，H-15a)，5.06(1H，m，H-15b)，1.28(3H，s，H-16)，4.81(1H，q，J=1.5 Hz，H-17a)，4.47(1H，q，J=1.5 Hz，H-17b)，0.96(3H，s，H-18)，3.73(1H，d，J=10.8 Hz，H-19a)，3.36(1H，dd，J=10.8，1.2 Hz，H-19b)，0.63(3H，s，H-20)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：39.1(C-1)，19.1(C-2)，35.5(C-3)，39.0(C-4)，56.4(C-5)，24.5(C-6)，38.7(C-7)，148.3(C-8)，57.4(C-9)，39.8(C-10)，17.9(C-11)，41.4(C-12)，73.8(C-13)，145.2(C-14)，111.8(C-15)，27.2(C-16)，106.7(C-17)，28.2(C-18)，65.1(C-19)，15.4(C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻[11]對照基本一致，故鑒定化合物6為13-epitorulosol。

化合物7白色粉末；HR-ESI-MS：m/z305.210 6 [M+H]+(calcd for C19H29O3，305.211 1)，分子式為C19H28O3；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：1.15(1H，m，H-1a)，1.82(1H，m，H-1b)，1.54(1H，m，H-2a)，2.17(1H，m，H-3a)，1.37(1H，dd，J=12.0，2.7 Hz，H-5)，1.99(1H，m，H-6a)，2.42(1H，dt，J=9.9，2.5 Hz，H-7a)，1.90(1H，m，H-9)，2.56(1H，m，H-11a)，6.42(1H，ddd，J=7.4，5.9，1.5 Hz，H-12a)，9.32(1H，s，H-14)，1.74(3H，d，J=1.2 Hz，H-16a)，4.38(1H，s，H-17a)，4.85(1H，br s，H-17b)，1.25(3H，s，H-18)，0.67(3H，s，H-20)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：39.4(C-1)，20.0(C-2)，37.9(C-3)，44.3(C-4)，56.2(C-5)，25.8(C-6)，38.4(C-7)，147.7(C-8)，55.9(C-9)，40.5(C-10)，24.6(C-11)，156.4(C-12)，139.0(C-13)，195.5(C-14)，9.5(C-16)，108.0(C-17)，29.1(C-18)，184.1(C-19)，13.0(C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻[12]對照基本一致，故鑒定化合物7為15-nor-14-oxolabda-8(17),12E-dien-19-oic acid。

化合物8無色油狀；HR-ESI-MS：m/z263.127 4 [M+H]+(calcd for C15H19O4，263.127 7)，分子式為C15H18O4；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：2.45(1H，ddd，J=15.3，4.5，3.0 Hz，H-2a)，2.73(1H，td，J=15.3，6.0 Hz，H-2b)，1.91(1H，td，J=14.4，4.5 Hz，H-3a)，2.03(1H，ddd，J=13.5，6.0，3.0 Hz，H-3b)，2.89(1H，s，H-5)，3.07(1H，d，J=17.7 Hz，H-9a)，2.95(1H，d，J=17.7 Hz，H-9b)，7.12(1H，s，H-12)，2.20(3H，d，J=1.2 Hz，H-13)，1.73(3H，s，H-14)，1.27(3H，s，H-15)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：211.1(C-1)，34.8(C-2)，39.0(C-3)，70.4(C-4)，62.2(C-5)，195.5(C-6)，119.4(C-7)，165.9(C-8)，35.7(C-9)，51.2(C-10)，119.1(C-11)，140.3(C-12)，9.1(C-13)，23.9(C-14)，20.5(C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻[13]對照基本一致，故鑒定化合物8為4a-hydroxy-8,12-epoxyeudesma-7,11-diene-1,6-dione。

化合物9黃色油狀；HR-ESI-MS：m/z731.228 3 [M-H]-(calcd for C39H39O14，731.229 4)，分子式為C39H40O14；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：2.28(1H，d，J=5.7 Hz，H-1)，1.22(1H，d，J=5.1 Hz，H-2a)，1.02(1H，q，J=8.1 Hz，H-2b)，1.78(H，m，H-3)，1.81(3H，s，H-13)，1.16(3H，s，H-14)，2.68(1H，m，H-15a)，1.75(1H，t，J=12.3 Hz，H-15b)，1.55(1H，d，J=9.3 Hz，H-1′)，1.26(1H，m，H-2′a)，0.63(1H，q，J=7.8 Hz，H-2′b)，1.46(1H，s，H-3′)，2.23(1H，dd，J=12.6，6.6 Hz，H-5′)，3.04(1H，dd，J=18.3，12.6 Hz，H-6′a)，2.39(1H，dd，J=18.3，6.6 Hz，H-6′b)，2.60(1H，td，J=10.8，5.7 Hz，H-9′)，5.40(1H，d，J=12.0 Hz，H-13′a)，4.51(1H，d，J=12.0 Hz，H-13′b)，0.95(3H，s，H-14′)，4.32(1H，d，J=11.4 Hz，H-15′a)，4.03(1H，d，J=11.4 Hz，H-15′b)，6.57(1H，t，J=5.7 Hz，H-3′′)，4.75(1H，dd，J=14.7，5.4 Hz，H-4′′a)，4.63(1H，dd，J=14.7，6.0 Hz，H-4′′b)，1.86(3H，s，H-5′′)，2.79(1H，m，H-2′′′a)，2.52(1H，m，H-2′′′b)，2.71(1H，m，H-3′′′a)，2.48(1H，m，H-3′′′b)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：24.4(C-1)，9.5(C-2)，30.3(C-3)，77.6(C-4)，160.9(C-5)，122.8(C-6)，148.0(C-7)，94.3(C-8)，200.3(C-9)，57.1(C-10)，129.2(C-11)，170.4(C-12)，11.5(C-13)，21.1(C-14)，40.2(C-15)，26.8(C-1′)，10.1(C-2′)，29.4(C-3′)，77.4(C-4′)，55.1(C-5′)，24.1(C-6′)，173.7(C-7′)，85.7(C-8′)，52.1(C-9′)，45.2(C-10′)，123.9(C-11′)，171.3(C-12′)，53.5(C-13′)，24.4(C-14′)，74.3(C-15′)，168.0(C-1′′)，129.5(C-2′′)，136.6(C-3′′)，61.9(C-4′′)，13.0(C-5′′)，172.3(C-1′′′)，29.0(C-2′′′)，29.0(C-3′′′)，172.3(C-4′′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻[14]對照基本一致，故鑒定化合物9為金粟蘭素 A。

化合物10黃色油狀；HR-ESI-MS：m/z639.256 1 [M+Na]+(calcd for C36H40O9Na，639.256 4)，分子式為C36H40O9；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：2.18(1H，dt，J=8.7，4.8 Hz，H-1)，1.19(1H，m，H-2a)，0.63(1H，m，H-2b)，1.96(1H，ddd，J=8.4，5.4，3.0 Hz，H-3)，3.95(1H，s，H-9)，1.36(3H，s，H-13)，1.16(3H，s，H-14)，2.96(1H，dd，J=18.0，7.2 Hz，H-15a)，2.31(1H，dd，J=18.0，9.6 Hz，H-15b)，1.66(1H，m，H-1′)，0.66(1H，m，H-2′a)，1.22(1H，m，H-2′b)，1.66(1H，m，H-3′)，1.65(1H，m，H-5′)，2.46(1H，d，J=11.7 Hz，H-6′a)，1.71(1H，d，J=14.1 Hz，H-6′b)，2.65(1H，dd，J=9.6，7.2 Hz，H-9′)，5.52(1H，s，H-13′a)，6.21(1H，s，H-13′b)，0.95(3H，s，H-14′)，4.24(1H，d，J=11.1 Hz，H-15′a)，4.19(1H，d，J=11.1 Hz，H-15′b)，6.86(1H，m，H-2′′)，1.82(3H，s，H-4′′)，1.83(3H，s，H-5′′)，3.45(3H，s，12-OCH3)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：28.5(C-1)，15.8(C-2)，26.6(C-3)，151.3(C-4)，135.4(C-5)，151.4(C-6)，129.7(C-7)，197.1(C-8)，83.2(C-9)，57.6(C-10)，65.3(C-11)，172.0(C-12)，18.9(C-13)，14.9(C-14)，29.3(C-15)，26.6(C-1′)，10.3(C-2′)，29.8(C-3′)，79.0(C-4′)，55.7(C-5′)，27.8(C-6′)，59.1(C-7′)，95.6(C-8′)，52.2(C-9′)，43.0(C-10′)，145.9(C-11′)，168.4(C-12′)，123.1(C-13′)，24.0(C-14′)，69.6(C-15′)，167.9(C-1′′)，128.2(C-2′′)，138.7(C-3′′)，14.7(C-4″)，12.3(C-5″)，52.2(12-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[15]對照基本一致，故鑒定化合物10為fortunilide K。

化合物11淡黃色無定型粉末；HR-ESI-MS：m/z285.109 8 [M+Na]+(calcd for C15H18O4Na，285.109 7)，分子式為C15H18O4；1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：4.87(1H，m，H-1)，2.15(1H，m，H-2a)，2.02(1H，m，H-2b)，2.68(1H，m，H-3a)，2.03(1H，m，H-3b)，6.30(1H，s，H-5)，2.70(1H，d，J=12.6 Hz，H-9a)，2.39(1H，d，J=12.6 Hz，H-9b)，1.91(3H，s，H-13)，1.85(3H，d，J=1.5 Hz，H-14)，1.58(3H，s，H-15)；13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：127.8(C-1)，25.5(C-2)，29.4(C-3)，147.9(C-4)，129.0(C-5)，190.8(C-6)，154.7(C-7)，109.3(C-8)，48.2(C-9)，135.4(C-10)，135.4(C-11)，170.2(C-12)，9.9(C-13)，24.5(C-14)，17.8(C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻[16]對照基本一致，故鑒定化合物11為(1E,4Z)-8-hydroxy-6-oxogermacra-1(10),4,7(11)-trieno-12,8-1actone。

化合物12白色粉末；HR-ESI-MS：m/z359.218 8 [M+Na]+(calcd for C20H32O4Na，359.219 2)，分子式為C20H32O4；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：1.16(1H，m，H-1a)，1.88(1H，m，H-1b)，1.50(1H，m，H-2a)，1.86(1H，m，H-2b)，1.07(1H，td，J=13.2，4.0 Hz，H-3a)，2.13(1H，m，H-3b)，1.36(1H，dd，J=12.0，3.0 Hz，H-5)，1.94(2H，m，H-6)，1.85(1H，m，H-7a)，2.38(1H，m，H-7b)，1.74(1H，m，H-9)，2.00(1H，m，H-11a)，2.32(1H，m，H-11b)，5.38(1H，t，J=6.6 Hz，H-12)，3.94(1H，dd，J=7.2，5.1 Hz，H-14)，3.45(2H，m，H-15)，1.61(3H，d，J=1.5 Hz，H-16)，4.47(1H，s，H-17a)，4.82(1H，s，H-17b)，1.19(3H，s，H-18)，0.66(3H，s，H-20)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：40.6(C-1)，21.2(C-2)，39.4(C-3)，45.4(C-4)，57.5(C-5)，27.4(C-6)，39.7(C-7)，149.6(C-8)，57.9(C-9)，41.4(C-10)，23.6(C-11)，129.3(C-12)，135.1(C-13)，79.1(C-14)，65.9(C-15)，12.3(C-16)，107.9(C-17)，29.6(C-18)，181.3(C-19)，13.4(C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻[17]對照基本一致，故鑒定化合物12為henrilabdane B。

化合物13紅色塊狀結晶(甲醇)；HR-ESI-MS：m/z345.133 3 [M+H]+(calcd for C19H21O6，345.133 2)，分子式為C19H20O6；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：7.56(2H，m，H-2，6)，6.93(2H，m，H-3，5)，6.01(1H，s，H-5′)，7.77(1H，d，J=15.6 Hz，H-a)，7.81(1H，d，J=15.6 Hz，H-b)，3.84(3H，s，4-OCH3)，3.86(3H，s，3′-OCH3)，3.96(6H，d，J=0.9 Hz，4′，6′-OCH3)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：128.3(C-1)，130.3(C-2，6)，161.6(C-4)，114.5(C-3，5)，107.1(C-1′)，158.3(C-2′)，131.0(C-3′)，158.6(C-4′)，87.2(C-5′)，159.5(C-6′)，125.2(C-a)，143.0(C-b)，193.3(C=O)，55.6，56.1，56.2，60.9(OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[18]對照基本一致，故鑒定化合物13為2′-羥基-4,3′,4′,6′-四甲氧基查爾酮。

化合物14白色粉末；HR-ESI-MS：m/z265.143 0 [M+H]+(calcd for C15H21O4，265.143 4)，分子式為C15H20O4；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：3.69(1H，m，H-1)，1.82(1H，m，H-2a)，1.76(1H，m，H-2b)，1.63(2H，m，H-3)，2.56(1H，s，H-5)，3.09(1H，d，J=17.1 Hz，H-9a)，2.72(1H，dt，J=17.1，0.9 Hz，H-9b)，7.08(1H，s，H-12)，2.19(3H，d，J=1.5 Hz，H-13)，1.48(3H，s，H-14)，1.02(3H，s，H-15)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：78.3(C-1)，28.5(C-2)，38.3(C-3)，71.2(C-4)，62.1(C-5)，197.3(C-6)，119.4(C-7)，166.4(C-8)，40.0(C-9)，44.7(C-10)，139.7(C-11)，119.2(C-12)，9.2(C-13)，24.6(C-14)，14.7(C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻[3]對照基本一致，故鑒定化合物14為curcolonol。

化合物15無色透明結晶(甲醇)；HR-ESI-MS：m/z285.109 9 [M+Na]+(calcd for C15H18O4Na，285.109 7)，分子式為C15H18O4；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：2.91(1H，br d，J=11.1 Hz，H-1)，2.22(1H，br d，J=14.1 Hz，H-2a)，1.53(1H，m，H-2b)，2.40(1H，br d，J= 14.1 Hz，H-3a)，1.48(1H，m，H-3b)，3.76(1H，s，H-5)，2.80(1H，d，J=17.1 Hz，H-9a)，3.67(1H，d，J=17.1 Hz，H-9b)，7.08(1H，s，H-12)，2.16(3H，s，H-13)，1.31(3H，s，H-14)，1.14(3H，s，H-15)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：70.0(C-1)，24.5(C-2)，36.9(C-3)，64.9(C-4)，64.7(C-5)，192.3(C-6)，123.4(C-7)，159.2(C-8)，39.9(C-9)，59.1(C-10)，124.4(C-11)，140.0(C-12)，10.9(C-13)，15.6(C-14)，17.0(C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻[3]對照基本一致，故鑒定化合物15為zederone epoxide。

化合物16黃色油狀；HR-ESI-MS：m/z755.267 1 [M+Na]+(calcd for C40H44O13Na，755.267 4)，分子式為C40H44O13；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：2.05(1H，m，H-1)，1.00(1H，m，H-2a)，0.32(1H，m，H-2b)，1.87(1H，m，H-3)，3.95(1H，J=3.9 Hz，H-6)，3.87(1H，s，H-9)，1.94(3H，d，J=0.6 Hz，H-13)，1.03(3H，s，H-14)，2.80(1H，m，H-15a)，2.58(1H，m，H-15b)，1.60(1H，m，H-1′)，0.73(1H，m，H-2′a)，1.35(1H，m，H-2′b)，1.39(1H，m，H-3′)，1.85(1H，m，H-5′)，2.50(1H，m，H-6′a)，2.71(1H，m，H-6′b)，1.84(1H，m，H-9′)，4.53(1H，d，J=12.0 Hz，H-13′a)，5.09(1H，m，H-13′b)，0.82(3H，s，H-14′)，3.63(1H，d，J=11.7 Hz，H-15′a)，4.62(1H，m，H-15′b)，6.61(1H，ddq，J=6.6，5.1，1.2 Hz，H-c)，4.63(1H，d，J=12.0 Hz，H-da)，5.07(1H，m，H-db)，1.92(3H，d，J=1.2 Hz，H-e)，2.47(1H，m，H-ga)，2.89(1H，m，H-gb)，2.67(1H，m，H-ha)，2.77(1H，m，H-hb)，3.71(3Н，S，12-OCH3)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：26.1(С-1)，16.1(С-2)，24.9(C-3)，142.6(C-4)，132.2(C-5)，41.2(C-6)，131.5(C-7)，200.9(C-8)，80.1(C-9)，51.1(C-10)，147.6(C-11)，170.3(C-12)，20.3(C-13)，15.4(C-14)，25.5(C-15)，25.7(C-1′)，11.8(C-2′)，27.9(C-3′)，77.2(C-4′)，61.4(C-5′)，23.5(C-6′)，174.7(C-7′)，93.4(C-8′)，55.6(C-9′)，45.1(C-10′)，123.5(C-11′)，171.7(C-12′)，54.5(C-13′)，26.2(C-14′)，72.1(C-15′)，167.2(C-a)，129.3(C-b)，135.6(C-c)，61.4(C-d)，13.1(C-e)，171.7(C-f)，28.8(C-g)，29.3(C-h)，172.1(C-i)，52.5(12-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[19]對照基本一致，故鑒定化合物16為銀線草醇 B。

化合物17黃色油狀；HR-ESI-MS：m/z549.246 5 [M+H]+(calcd for C32H37O8，549.248 3)，分子式為C32H36O8；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：1.83(1H，m，H-1，1′)，0.87(1H，m，H-2，2′a)，0.21(1H，q，J=3.9 Hz，H-2，2′b)，1.96(1H，d，J=7.2 Hz，H-3，3′)，7.16(1H，s，H-6，6′)，3.80(1H，s，H-9，9′)，1.50(3H，s，H-13，13′)，0.99(3H，s，H-14，14′)，2.95(1H，d，J=13.5 Hz，H-15，15′a)，2.60(1H，d，J=13.5 Hz，H-15，15′b)，3.64(3H，s，12，12′-OCH3)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：24.8(C-1，1′)，14.1(C-2，2′)，28.1(C-3，3′)，147.5(C-4，4′)，136.0(C-5，5′)，138.5(C-6，6′)，137.4(C-7，7′)，199.2(C-8，8′)，81.1(C-9，9′)，58.6(C-10，10′)，47.9(C-11，11′)，175.6(C-12，12′)，28.7(C-13，13′)，16.1(C-14，14′)，38.4(C-15，15′)，52.2(12，12′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[19]對照基本一致，故鑒定化合物17為環(huán)銀線草醇 A。

化合物18白色無定型粉末；HR-ESI-MS：m/z337.237 3 [M + H]+(calcd for C20H33O4，337.237 3)，分子式為C20H32O4；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：1.19(3H，s，H-1a)，1.79(1H，m，H-1b)，1.49(1H，m，H-2a)，1.88(1H，m，H-2b)，1.08(1H，td，J=13.5，4.2 Hz，H-3a)，2.06(1H，m，H-3b)，1.40(1H，d，J=12.3，Hz，H-5)，2.01(1H，m，6a)，1.91(1H，m，H-6b)，1.97(1H，m，7a)，2.41(1H，m，H-7b)，2.13(1H，m，H-9)，1.52(1H，m，H-11a)，1.62(1H，m，H-11b)，3.97(1H，d，J=10.2 Hz，H-12)，5.52(1H，t，J=6.6 Hz，H-14)，4.11(2H，d，J=6.6 Hz，H-15)，1.66(3H，s，H-16)，4.49(1H，d，J=1.8 Hz，H-17a)，4.86(1H，s，H-17b)，1.20(3H，s，H-18)，0.61(3H，s，H-20)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：40.3(C-1)，21.1(C-2)，39.4(C-3)，45.2(C-4)，57.6(C-5)，27.6(C-6)，39.9(C-7)，150.3(C-8)，53.2(C-9)，41.2(C-10)，31.5(C-11)，75.9(C-12)，142.4(C-13)，124.7(C-14)，59.2(C-15)，12.1(C-16)，107.0(C-17)，29.6(C-18)，181.3(C-19)，13.5(C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻[17]對照基本一致，故鑒定化合物18為henrilabdane A。

化合物19黃色油狀；HR-ESI-MS：m/z315.196 1 [M-H]-(calcd for C20H27O3，315.196 0)，分子式為C20H28O3；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ：1.87(1H，m，H-1a)，1.26(H，s，H-1b)，1.90(1H，m，H-2a)，1.54(1H，m，H-2b)，2.17(1H，m，H-3a)，1.10(1H，td，J=13.5，4.2 Hz，H-3b)，1.43(1H，m，H-5)，2.00(1H，m，H-6a)，1.89(1H，m，H-6b)，2.36(1H，m，H-7a)，1.92(1H，m，H-7b)，2.30(1H，m，H-9)，2.74(1H，dd，J=15.3，3.3 Hz，H-11a)，2.63(1H，dd，J=15.3，10.4 Hz，H-11b)，6.11(1H，d，J=1.8 Hz，H-14)，7.17(1H，d，J=1.8 Hz，H-15)，1.96(3H，d，J=0.6 Hz，H-16)，4.79(1H，d，J=1.5 Hz，H-17a)，4.59(1H，s，H-17b)，1.26(3H，s，H-18)，0.70(3H，s，H-20)；13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ：39.2(C-1)，20.1(C-2)，38.1(C-3)，44.3(C-4)，56.3(C-5)，26.0(C-6)，38.6(C-7)，148.1(C-8)，53.8(C-9)，40.5(C-10)，21.8(C-11)，150.8(C-12)，113.5(C-13)，113.0(C-14)，139.5(C-15)，10.3(C-16)，107.1(C-17)，29.2(C-18)，182.9(C-19)，12.8(C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻[20]對照基本一致，故鑒定化合物19為12-(3-methyl-furan)-labd-8(17)-en-19-oic acid。

化合物20無色無定型粉末；HR-ESI-MS：m/z307.226 4 [M+H]+(calcd for C19H31O3，307.226 7)，分子式為C19H30O3；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：1.04(1H，td，J=12.6 ，5.4 Hz，H-1a)，1.70(1H，m，H-1b)，1.52(2H，m，H-2)，1.25(2H，m，H-3)，1.32(1H，m，H-5)，1.45(1H，d，J=5.1 Hz，H-6a)，1.32(1H，d，J=1.5 Hz，H-6b)，2.26(1H，m，H-7a)， 2.11(1H，m，H-7b)，1.80(1H，m，H-9)，1.66(2H，m，H-11)，1.76(1H，m，H-12a)，1.67(2H，m，H-12b)，5.53(1H，s，H-14)，1.22(3H，s，H-17)，3.34(1H，d，J=10.8 Hz，H-18a)，2.99(1H，d，J=10.8 Hz，H-18b)，0.78(3H，s，H-19)，0.85(3H，s，H-20)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：40.1(C-1)，19.4(C-2)，36.5(C-3)，38.8(C-4)，48.5(C-5)，23.3(C-6)，36.6(C-7)，139.7(C-8)，49.6(C-9)，39.1(C-10)，19.6(C-11)，32.8(C-12)，43.8(C-13)，126.2(C-14)，181.6(C-15，16)，25.2(C-17)，72.0(C-18)，18.5(C-19)，16.1(C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻[21]對照基本一致，故鑒定化合物20為ent-8(9)-pimarene-20-hydroxy-16-nor-15-oic acid。

化合物21黃色油狀；HR-ESI-MS：m/z314.138 8 [M+H]+(calcd for C18H19NO4，314.138 6)，分子式為C18H18NO4；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.10(1H，d，J=1.8 Hz，H-2)，6.78(1H，d，J=8.1 Hz，H-5)，7.01(1H，dd，J=8.1，2.1 Hz，H-6)，7.42(1H，d，J=15.6 Hz，H-7)，6.39(1H，d，J=15.6 Hz，H-8)，7.05(1H，d，J=2.1 Hz，H-2′)，6.71(1H，d，J=2.1 Hz，H-3′)，6.70(1H，d，J=2.1 Hz，H-5′)，7.04(1H，d，J=2.1 Hz，H-6′)，2.74(2H，t，J=7.5 Hz，H-7′)，3.45(2H，t，J=7.5 Hz，H-8′)，3.87(3H，s，3-OCH3)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：128.1(C-1)，111.5(C-2)，150.0(C-3)，149.3(C-4)，116.5(C-5)，123.2(C-6)，142.1(C-7)，118.6(C-8)，169.2(C-9)，131.3(C-1′)，130.7(C-2′)，116.3(C-3′)，157.0(C-4′)，116.2(C-5′)，130.7(C-6′)，35.8(C-7′)，42.6(C-8′)，56.4(3-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[22]對照基本一致，故鑒定化合物21為反式-N-阿魏酰酪胺。

化合物22白色粉末；HR-ESI-MS：m/z625.254 0 [M+H]+(calcd for C36H37N2O8，625.254 4)，分子式為C36H36N2O8；1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：7.13(1H，s，H-2)，6.89(1H，s，H-6)，7.35(1H，d，J=15.6 Hz，H-7)，6.46(1H，d，J=15.6 Hz，H-8)，7.02(2H，m，H-2′，6′)，6.68(2H，d，J=3.9 Hz，H-3′，5′)，2.66(2H，d，J=8.1 Hz，H-7′)，3.33(2H，m，H-8′)，6.99(2H，d，J=8.4 Hz，H-2′′，6′′)，6.67(2H，d，J=3.9 Hz，H-3′′，5′′)，2.64(2H，d，J=7.5 Hz，H-7′′)，3.32(2H，m，H-8′′)，6.89(1H，s，H-2′′′)，6.78(1H，d，J=8.1 Hz，H-5′′′)，6.71(1H，dd，J=8.1，2.1 Hz，H-6′′′)，5.88(1H，d，J=8.1 Hz，H-7′′′)，4.21(1H，d，J=8.1 Hz，H-8′′′)，3.83(3H，s，3-OCH3)，3.75(3H，s，3′′′-OCH3)，9.21(1H，s，4-OH)，9.18(1H，s，4′′-OH)，9.15(1H，s，4′′′-OH)，8.06(1H，t，J=5.7 Hz，9′-NH)，8.39(1H，t，J=5.7 Hz，9′′-NH)；13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：128.6(C-1)，111.7(C-2)，144.1(C-3)，148.7(C-4)，128.5(C-5)，115.9(C-6)，138.7(C-7)，119.7(C-8)，129.6(C-1′)，129.6(C-2′，6′)，115.1(C-3′，5′)，155.6(C-4′)，34.4(C-7′)，40.9(C-8′)，165.2(C-9′)，129.3(C-1′′)，129.5(C-2′′，6′′)，115.2(C-3′′，5′′)，155.7(C-4′′)，34.2(C-7′′)，40.7(C-8′′)，169.5(C-9′′)，130.6(C-1′′′)，110.4(C-2′′′)，147.7(C-3′′′)，146.9(C-4′′′)，115.5(C-5′′′)，118.8(C-6′′′)，87.7(C-7′′′)，55.9(C-8′′′)，55.8(3-OCH3)，55.7(3′′′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[23]對照基本一致，故鑒定化合物22為grossamide。

2.2 抗炎活性篩選結果

本實驗采用脂多糖(LPS)誘導的RAW264.7細胞炎癥篩選模型，以氨基胍為陽性對照，對多穗金粟蘭中分離得率較高的13個化合物(5～17)進行了抗炎活性檢測。結果顯示，當化合物濃度為10 μmol/L時化合物5、8、9、10、11、13、14、15、16、17具有一定的NO生成抑制作用，表現(xiàn)出一定的抗炎活性，其中化合物5、10、11和13有較好的NO生成抑制作用，表現(xiàn)出中等的抗炎活性，結果見表1。

表1 化合物5～17的抗炎活性大小Table 1 The anti-inflammatory activity of compounds 5-17

3 結論

本實驗從多穗金粟蘭具有抗炎活性的二氯甲烷部位中分離得到22個化合物，包括9個倍半萜類(5、8～11、14～17)、6個二萜(6、7、12、18～20)、2個酰胺(21、22)，3個甾醇(2～4)、1個查爾酮(13)、1個木脂素(1)，其中化合物2、4、21、22為首次從金粟蘭屬中分離得到，化合物1～10、18～22為首次從多穗金粟蘭中分離得到。并采用脂多糖(LPS)誘導的小鼠巨噬細胞RAW264.7釋放一氧化氮(NO)免疫炎癥細胞模型，對多穗金粟蘭中得率較高的13個化合物(5～17)進行了抗炎活性測定，結果表明：9個倍半萜類化合物和查爾酮(化合物13)都有一定的抗炎活性，其中化合物5、10、11、13表現(xiàn)出較好的抗炎活性。通過比較倍半萜化合物(5、8、11、14、15)的抗炎活性大小，可以發(fā)現(xiàn)倍半萜內酯化合物(5、11)的抗炎活性明顯優(yōu)于其他倍半萜化合物(8、14、15)，并且所分離的化合物中倍半萜內酯的得率也是最高的，據(jù)此初步推測倍半萜內酯類化合物可能是多穗金粟蘭抗炎的主要活性成分。且此前也有大量文獻表明倍半萜內酯類化合物具有較好的抗腫瘤、強心等藥理活性[24]，因此，應更加注重多穗金粟蘭中倍半萜內酯類化學成分及其藥理活性的研究。本文進一步豐富了多穗金粟蘭植物的研究內容，同時也為抗炎活性較好的先導化合物的發(fā)現(xiàn)、創(chuàng)新藥物的研發(fā)，以及該藥用植物資源的開發(fā)和利用提供了一定的參考依據(jù)。