田頭菇菌種分離與培養(yǎng)特性*

吳 芳，黃曉輝，喻初權，王春暉，馮立國

（湖南省食用菌研究所，湖南 長沙 410000）

田頭菇（Agrocybe praecox） 屬擔子菌綱（Basidiomycota） 傘菌目（Agaricales） 球蓋菇科（Strophariaceae） 田頭菇屬（Agrocybe），亦稱春生田頭菇[1-3]。常見于春、秋季林中、田野和草地，子實體乳白色至淡黃色，菌蓋直徑2 cm～8 cm，扁半球形，后漸平展，菌肉白色，較厚；菌褶銹褐色，直生或彎生；菌柄圓柱形，白色，后變污白色，有粉末狀鱗片；菌環(huán)白色，膜質，易脫落，是一種味道鮮美的野生食用菌。目前國內(nèi)研究較少，尚未形成栽培產(chǎn)業(yè)。

本試驗菌株采集于洞庭湖區(qū)漉湖蘆葦濕地，經(jīng)ITS測序結合形態(tài)學分析鑒定為田頭菇Agrocybe praecox(Pers.)Fayod。田頭菇子實體主要生長于郁閉度較低的空曠蘆葦?shù)?，單生或叢生于土壤環(huán)境呈弱酸性的腐爛蘆葦根系及附近。其味道鮮美，口感鮮嫩爽滑，深受當?shù)鼐用裣矏邸ａ槍μ镱^菇菌種生產(chǎn)和培養(yǎng)所需條件以及營養(yǎng)成分，篩選其菌絲生長和培養(yǎng)所需合適的碳源、氮源，以及培養(yǎng)所需的溫度、pH，以期為標準化、規(guī)?；a(chǎn)業(yè)化人工栽培田頭菇提供理論依據(jù)[4-6]。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗菌種

采集于沅江漉湖蘆葦場，采用組織分離法獲得。

1.1.2 培養(yǎng)基

加富PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200.0 g、麥麩10.0 g、葡萄糖 20.0 g、KH2PO53.0 g、MgSO41.5 g、瓊脂20.0 g?；A培養(yǎng)基：馬鈴薯200.0 g、葡萄糖20.0 g、瓊脂20.0 g。

1.1.3 儀器設備

PRX-250A恒溫箱、YX-400A高壓蒸汽滅菌鍋、超凈工作臺、電子天平等。

1.2 試驗方法

取新鮮田頭菇子實體，用75%酒精棉擦凈菇體表面雜質，于超凈工作臺將已消毒處理的種菇用滅菌解剖刀在菌柄與菌蓋交界處，切取米粒大組織塊接種于無菌平板培養(yǎng)基表面，于24℃恒溫箱中倒置培養(yǎng)。待形成白色菌絲后，取健壯優(yōu)勢菌絲轉接至平板純化培養(yǎng)1次后，再轉管至斜面培養(yǎng)基，經(jīng)24℃培養(yǎng)8 d，菌絲長滿斜面且無雜菌，即為田頭菇母種。

1.2.2 菌種培養(yǎng)條件研究

1） 溫度試驗

試驗選用加富PDA培養(yǎng)基，設置5℃、10℃、15℃、18℃、21℃、24℃、27℃、30℃、35℃、40℃，共10個溫度處理，其他條件相同，每個溫度處理重復3次。用已滅菌的打孔器打取菌絲塊分別接入已滅菌平板中央，倒置培養(yǎng)8 d，以平板培養(yǎng)基上菌絲長勢、菌絲密度和生長速度為菌絲生長指標，取其平均值，比較不同溫度對田頭菇菌絲生長的影響。

2） pH試驗

試驗選用加富PDA培養(yǎng)基，用0.1 mol·L-1NaOH和0.1 mol·L-1HCl將培養(yǎng)基pH分別調節(jié)到5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5和8.0這7個不同的處理，每個處理重復3次。處理與記錄參照溫度試驗。

3） 碳源試驗

燃料價格及電力需求不確定下電力生產(chǎn)決策的魯棒優(yōu)化··············································汪 建 王 挺 劉惠霞 (5,807)

在基礎培養(yǎng)基中，分別用蔗糖、麥芽糖、甘露醇代替葡萄糖，制成固體培養(yǎng)基，接種田頭菇菌種塊，在24℃條件下避光培養(yǎng)7 d，以菌絲長勢、菌絲密度和生長速度為菌絲生長指標。每個處理3次重復，取平均值，比較不同碳源對田頭菇菌絲生長的影響[7-8]。

4） 氮源試驗

在基礎培養(yǎng)基中，分別用2%蛋白胨、2%酵母膏、2%牛肉膏代替馬鈴薯，制成固體培養(yǎng)基，接種田頭菇菌種塊，在24℃條件下避光培養(yǎng)7 d，以菌絲長勢、菌絲密度和生長速度為菌絲生長指標。每個處理3次重復，取平均值，比較不同氮源對田頭菇菌絲生長的影響[7-8]。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 19.0數(shù)據(jù)處理軟件分析試驗數(shù)據(jù)，結果用平均值表示，數(shù)據(jù)采用LSD法，P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著。

2 結果與分析

2.1 溫度對田頭菇菌絲生長的影響

不同溫度對田頭菇菌絲生長的影響見表1。

表1 不同溫度對田頭菇菌絲的影響Tab.1 Effect of different temperatures on the mycelium of Agrocybe praecox

由表1可知，隨著溫度升高，田頭菇菌絲生長速度與溫度呈正相關，各處理之間相互存在極顯著差異。溫度越低，菌絲密度越大，隨著溫度的增加，菌絲密度降低，在21℃～30℃，菌絲長勢較好。試驗溫度設置在5℃與40℃時，菌絲均不生長，但5℃時，菌絲依然具有生命力，恢復適宜溫度即可萌發(fā)生長，40℃超過一定時間，菌絲死亡?？梢?，在試驗設置范圍內(nèi)，溫度對菌絲生長存在顯著影響，綜合生長速度、菌絲長勢與菌絲密度觀察，溫度在24℃～27℃，適宜于田頭菇菌絲培養(yǎng)。

2.2 pH對田頭菇菌絲生長的影響

不同pH對田頭菇菌絲生長的影響見表2。

表2 不同pH對田頭菇菌絲的影響Tab.2 Effect of different pH on the myceliumof Agrocybe praecox

由表2可知，田頭菇菌絲在中性和弱酸、弱堿性條件下均可生長，pH在6.0～7.0菌絲長勢較好，菌絲濃密，生長較快，其中，pH為6.5時，菌絲生長速度最快，菌絲長勢最佳，且菌絲潔白，濃密均勻，與其他處理呈極顯著差異，可見，弱酸性培養(yǎng)基最適宜培養(yǎng)田頭菇菌絲。

2.3 碳源對田頭菇菌絲生長的影響

不同碳源對田頭菇菌絲生長的影響見表3。

表3 不同碳源對田頭菇菌絲的影響Tab.3 Effect of different carbon sources on the mycelium of Agrocybe praecox

由表3可知，田頭菇菌絲以葡萄糖和麥芽糖為碳源時，生長速度和長勢最佳，菌絲較密，與蔗糖存在顯著差異，與甘露醇存在極顯著差異?？梢姡咸烟呛望溠刻蔷鶠樘镱^菇菌絲生長的合適碳源，但使用葡萄糖時生長速度略高。

2.4 氮源對田頭菇菌絲生長的影響

不同氮源對田頭菇菌絲生長的影響結果見表4。

表4 不同氮源對田頭菇菌絲的影響Tab.4 Effect of different nitrogen sources on the mycelium of Agrocybe praecox

由表4可知，以蛋白胨為氮源時，田頭菇菌絲生長速度和長勢最佳，其次為酵母膏和馬鈴薯，以牛肉膏為氮源時，菌絲速度偏慢，長勢較差，菌絲密度與生長勢變化基本一致。

3 討論

試驗結果表明，田頭菇菌絲生長合適碳源為葡萄糖和麥芽糖，合適氮源為蛋白胨、馬鈴薯和酵母膏，菌絲培養(yǎng)適宜溫度為24℃～27℃，適宜pH為6.0～6.5。結合生境調查，田頭菇為一種中溫型蘑菇，適合弱酸性條件培養(yǎng)，是一種適用于規(guī)模化、標準化、產(chǎn)業(yè)化的具備開發(fā)潛力的食用菌新品種。通過試驗探索田頭菇生物學特性，以期為后續(xù)培養(yǎng)配方篩選、液體發(fā)酵工藝和栽培生產(chǎn)標準化以及產(chǎn)業(yè)化開發(fā)提供理論基礎，有望實現(xiàn)后續(xù)的產(chǎn)業(yè)化栽培。

目前，我國作為食用菌生產(chǎn)大國，食用菌產(chǎn)量與栽培品種均居世界前列，但新優(yōu)品種的馴化與選育，工廠化與標準化栽培仍處于較落后的水平。田頭菇味道鮮美，口感嫩滑，商品性能佳，是一種適宜標準化生產(chǎn)和開發(fā)的食用菌新優(yōu)品種。因此，研究田頭菇菌絲培養(yǎng)基礎特性，選育優(yōu)良菌株進行產(chǎn)業(yè)化開發(fā)，具有重要經(jīng)濟意義[9]。