蜜環(huán)菌提取物對運(yùn)動性損傷的改善作用*

范子哲，孫宇岸

（1.遵義醫(yī)科大學(xué)，貴州 遵義 563110；2.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 610000）

蜜環(huán)菌（Armillaria mellea） 是藥食兼用真菌，主要產(chǎn)于我國東北地區(qū)，其子實(shí)體又稱榛蘑，傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為其有祛風(fēng)活絡(luò)、強(qiáng)筋壯骨等功效，民間常用于治療腰腿疼痛等疾患[1]?，F(xiàn)代研究表明，蜜環(huán)菌內(nèi)含有多糖、有機(jī)酸、萜類、甾醇和腺苷等多種有機(jī)成分，其發(fā)酵產(chǎn)物有鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛、降血糖、降血脂、護(hù)肝、抑菌、抗氧化、提高免疫力以及延緩衰老等作用[2]。

體育運(yùn)動訓(xùn)練后，易誘發(fā)骨骼肌、心肌和其他臟器等發(fā)生運(yùn)動性損傷，在一定限度內(nèi)，可以重塑肌纖維、強(qiáng)化肌肉和臟器功能[3]。但長期高強(qiáng)度的運(yùn)動下，容易出現(xiàn)肌纖維變性、壞死、血腫，表現(xiàn)出肌肉酸痛，同時這種損傷常伴隨著炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激等過程，可直接影響體育訓(xùn)練者的運(yùn)動訓(xùn)練水平與身心健康，在此過程中代謝因素可能是中心環(huán)節(jié)[4]。從代謝因素出發(fā)，探索蜜環(huán)菌提取物在減輕和緩解運(yùn)動員運(yùn)動性損傷中的作用，為相關(guān)膳食和營養(yǎng)補(bǔ)劑的研究與搭配提供參考。

1 研究對象與方法

1.1 研究對象

納入標(biāo)準(zhǔn)：四川省排球隊(duì)女隊(duì)二級以上運(yùn)動員；近3月內(nèi)正常參加訓(xùn)練及比賽活動；近1年內(nèi)身體健康狀況良好，未有外傷手術(shù)史，無心血管、肝腎功能異常；試驗(yàn)前2周內(nèi)未服用過抗疲勞、增強(qiáng)耐力、補(bǔ)充能量的相關(guān)藥品、食品，無吸煙、酗酒。共選取48名運(yùn)動員，隨機(jī)分為4組，每組12人。其中試驗(yàn)組共3組，另設(shè)1組為對照組。各組運(yùn)動員在年齡、身體質(zhì)量指數(shù)（BMI）、訓(xùn)練內(nèi)容與強(qiáng)度方面均無顯著性差異（P＜0.05）。

1.2 方法

1.2.1 干預(yù)措施

蜜環(huán)菌購自通化萬嘉生物科技有限公司，根據(jù)水提法進(jìn)行蜜環(huán)菌提取物的實(shí)驗(yàn)室制備[4]。對提取物進(jìn)行精密稱定，裝入空白膠囊中，每粒膠囊含蜜環(huán)菌提取物0.25 g。

所有運(yùn)動員進(jìn)行為期14 d的中等強(qiáng)度訓(xùn)練，其中試驗(yàn)1組、2組、3組運(yùn)動員每日清晨分別服用1粒（0.25 g·d-1）、2粒（0.50 g·d-1）、4粒（1.00 g·d-1）蜜環(huán)菌提取物膠囊，對照組不進(jìn)行特殊干預(yù)。14 d后，受試者在跑臺上進(jìn)行大強(qiáng)度的跑步訓(xùn)練，起始速度為6 km·h-1，速度每20 s增加0.2 km·h-1，直至運(yùn)動員力竭。在運(yùn)動前1 h、運(yùn)動后1 h、6 h、12 h分別抽取受試者的靜脈血，離心機(jī)離心、取上清液測定相關(guān)指標(biāo)。

1.2.2 檢測方法

所有檢測試劑盒均購自南京建成生物科技公司，對血清中肌酸激酶（Creatingkinase,CK）、乳酸脫氫酶（Lactate dehydrogenase,LDH）、谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathione peroxidase,GSH-Px） 活性、丙二醛（Malondialdehyde,MDA）含量、血清腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（interleukin-6,IL-6）的水平分別進(jìn)行測定，所有指標(biāo)的測定均按照說明書嚴(yán)格操作。

1.2.3 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料均符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s） 表示，各組間同一時間點(diǎn)數(shù)據(jù)的兩兩比較采取多因素方差分析，組內(nèi)各個時間點(diǎn)的比較采用重復(fù)測量方差分析法，如P＜0.05，則認(rèn)為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組組運(yùn)動員血清CK、LDH的水平比較

各組血清CK、LDH的測定結(jié)果表明，處理因素與時間的交互效應(yīng)均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）、處理主效應(yīng)有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）、時間主效應(yīng)有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.05），見表1。

表1 各組運(yùn)動員血清肌酸激酶、乳酸脫氫酶的水平比較（±s）Tab.1 Comparison of serum CK and LDH levels of athletes in each group（±s）

表1 各組運(yùn)動員血清肌酸激酶、乳酸脫氫酶的水平比較（±s）Tab.1 Comparison of serum CK and LDH levels of athletes in each group（±s）

注：組內(nèi)各時間點(diǎn)比較：a表示與運(yùn)動前比較，P＜0.05；b表示與運(yùn)動后1 h比較，P＜0.05；c表示與運(yùn)動后6 h比較，P＜0.05。組間比較：d表示與同時間點(diǎn)的與對照組比較，P＜0.05。Note:Comparison of time points in the group:a compared with before exercise,P＜0.05,b compared with 1 hour after exercise,P＜0.05,c compared with 6 hours after exercise,P＜0.05.Comparison between groups:d compared with the control group at the same time point,P＜0.05.

運(yùn)動前1h 運(yùn)動后1h對照組 80.32 ±9.65 473.81±51.43a 511.63±65.54ab 449.35±53.43abc組別肌酸激酶/（U·L-1）運(yùn)動后6h 運(yùn)動后12h試驗(yàn) 1 組 77.23±11.36 465.52±47.34a 490.34±72.28abd 438.86±54.63abcd試驗(yàn)2組 74.54 ±10.54 447.43±32.76ad試驗(yàn) 3 組 69.46±9.78 448.58±42.54ad 459.78±68.68abd 413.42±55.36abcd 474.58±76.43abd 419.42±56.43abcd

由表1、表2可知，組內(nèi)比較，與運(yùn)動前相比，對照組與各試驗(yàn)組的CK、LDH水平在運(yùn)動后各時間點(diǎn)均顯著升高（P＜0.05），運(yùn)動后6 h的CK、LDH水平最高。組間比較，試驗(yàn)2組、3組運(yùn)動后各時間點(diǎn)的CK水平均顯著低于對照組（P＜0.05），運(yùn)動前、后各時間點(diǎn)的LDH水平均顯著低于對照組（P＜0.05）；試驗(yàn)1組在運(yùn)動后6 h的CK、LDH水平分別為（490.34±72.28） U·L-1、（339.23±43.62） U·L-1；運(yùn)動后12 h的CK、LDH水平分別為（438.86±54.63）U·L-1、（278.41±41.45） U·L-1，顯著低于對照組運(yùn)動后6 h和12 h的CK、LDH水平（P＜0.05）。

表2 各組運(yùn)動員血清乳酸脫氫酶的水平比較（±s）Tab.2 Comparison of serum LDH levels of athletes in each group（±s）

表2 各組運(yùn)動員血清乳酸脫氫酶的水平比較（±s）Tab.2 Comparison of serum LDH levels of athletes in each group（±s）

注：組內(nèi)各時間點(diǎn)比較：a表示與運(yùn)動前比較，P＜0.05；b表示與運(yùn)動后1 h比較，P＜0.05；c表示與運(yùn)動后6 h比較，P＜0.05。組間比較：d表示與同時間點(diǎn)的與對照組比較，P＜0.05。Note:Comparison of time points in the group:a compared with before exercise,P＜0.05,b compared with 1 hour after exercise,P＜0.05,c compared with 6 hours after exercise,P＜0.05,Comparison between groups:d compared with the control group at the same time point,P＜0.05.

運(yùn)動前1h 運(yùn)動后1h對照組 216.54±31.47 314.23±43.56a 354.52±44.56ab 303.27±43.43abc組別乳酸脫氫酶/（U·L-1）運(yùn)動后6h 運(yùn)動后12h試驗(yàn) 1 組 208.32±32.38 307.37±38.53a 339.23±43.62abd 278.41±41.45abcd試驗(yàn) 2 組 192.43±33.24d 281.55±39.43ad試驗(yàn) 3 組 190.15±33.57d 265.55±37.25ad 298.35±41.86abd 245.41±37.59abcd 311.42±42.54abd 255.41±39.52abcd

2.2 各組運(yùn)動員血清GSH-Px、MDA的水平比較

各組血清GSH-Px、MDA的測定結(jié)果表明，處理因素與時間的交互效應(yīng)均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），處理主效應(yīng)有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），時間主效應(yīng)有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表3、表4。

表3 各組運(yùn)動員血清谷胱甘肽過氧化物、丙二醛的水平比較（±s）Tab.3 Comparison of serum GSH-Px levels of athletes in each group（±s）

表3 各組運(yùn)動員血清谷胱甘肽過氧化物、丙二醛的水平比較（±s）Tab.3 Comparison of serum GSH-Px levels of athletes in each group（±s）

注：組內(nèi)各時間點(diǎn)比較：a表示與運(yùn)動前比較，P＜0.05；b表示與運(yùn)動后1 h比較，P＜0.05；c表示與運(yùn)動后6 h比較，P＜0.05。組間比較：d表示與同時間點(diǎn)與對照組比較，P＜0.05。Note:Comparison of time points in the group:a compared with before exercise,P＜0.05,b compared with 1 hour after exercise,P＜0.05,c compared with 6 hours after exercise,P＜0.05.Comparison between groups:d compared with the control group at the same time point,P＜0.05.

運(yùn)動前1h 運(yùn)動后1h對照組 98.72±12.32 90.14±12.22a 80.45±13.12ab 109.55±12.63abc組別谷胱甘肽過氧化物酶/（U·L-1）運(yùn)動后6h 運(yùn)動后12h試驗(yàn) 1 組 100.21±11.97 89.58±13.43a 79.56±14.37ab 112.28±14.35abc試驗(yàn) 2 組 121.35±10.36d 106.35±11.56ad試驗(yàn) 3 組 129.45±12.76d 112.21±12.73ad 103.56±15.26abd 141.32±15.80abcd 99.47±12.32abd 135.28±13.55abcd

表4 各組運(yùn)動員血清丙二醛水平比較（±s）Tab.4 Comparison of serum MDA levels of athletes in each group（±s）

表4 各組運(yùn)動員血清丙二醛水平比較（±s）Tab.4 Comparison of serum MDA levels of athletes in each group（±s）

注：組內(nèi)各時間點(diǎn)比較：a表示與運(yùn)動前比較，P＜0.05；b表示與運(yùn)動后1 h比較，P＜0.05；c表示與運(yùn)動后6 h比較，P＜0.05。組間比較：d表示與同時間點(diǎn)與對照組比較，P＜0.05。Note:Comparison of time points in the group:a compared with before exercise,P＜0.05,b compared with 1 hour after exercise,P＜0.05,c compared with 6 hours after exercise,P＜0.05.Comparison between groups:d compared with the control group at the same time point,P＜0.05.

運(yùn)動前1h 運(yùn)動后1h對照組 4.37±0.43 5.83±0.56a 6.19±0.69ab 4.51±0.52bc組別丙二醛/（mmol·L-1）運(yùn)動后6h 運(yùn)動后12h試驗(yàn) 1 組 4.22±0.55 5.91±0.51a 5.87±0.48ad 4.12±0.71bcd試驗(yàn) 2 組 3.57±0.68d 5.15±0.70ad試驗(yàn) 3 組 3.65±0.45d 4.93±0.59ad 5.21±0.56abd 3.73±0.58bcd 5.31±0.51abd 3.68±0.45bcd

由表3、表4可知，組內(nèi)比較，與運(yùn)動前相比，對照組與各試驗(yàn)組的GSH-Px水平在運(yùn)動后1 h、6 h時顯著下降，在運(yùn)動后12 h時較運(yùn)動前顯著升高（P＜0.05）。對照組與各試驗(yàn)組的MDA水平在運(yùn)動后1 h、6 h時較運(yùn)動前顯著升高（P＜0.05），在運(yùn)動后12 h時下降，較運(yùn)動前無顯著性差異。

組間比較，試驗(yàn)組2組、3組的GSH-Px水平在運(yùn)動前、后均顯著高于對照組 （P＜0.05）；MDA水平在運(yùn)動前、后均顯著低于對照組（P＜0.05），試驗(yàn)組1組在運(yùn)動后6 h、12 h的MDA水平分別為 （5.87±0.48） mmol·L-1、 （4.12±0.71）mmol·L-1，顯著低于對照組運(yùn)動后6 h、12 h的MDA 水平 （P＜0.05）。

2.3 各組運(yùn)動員血清TNF-α、IL-6的水平比較

各組血清TNF-α、IL-6的測定結(jié)果表明，處理因素與時間的交互效應(yīng)均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）、處理主效應(yīng)有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）、時間主效應(yīng)有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表5、表6。

表5 各組運(yùn)動員血清TNF-α、IL-6的水平比較（±s）Tab.5 Comparison of serum TNF-α and IL-6 levels of athletes in each group （±s）

表5 各組運(yùn)動員血清TNF-α、IL-6的水平比較（±s）Tab.5 Comparison of serum TNF-α and IL-6 levels of athletes in each group （±s）

注：組內(nèi)各時間點(diǎn)比較：a表示與運(yùn)動前比較，P＜0.05；b表示與運(yùn)動后1 h比較，P＜0.05；c表示與運(yùn)動后6 h比較，P＜0.05。組間比較：d表示與同時間點(diǎn)與對照組比較，P＜0.05。Note:Comparison of time points in the group:a compared with before exercise,P＜0.05,b compared with 1 hour after exercise,P＜0.05;,c compared with 6 hours after exercise,P＜0.05.Comparison between groups:d compared with the control group at the same time point,P＜0.05.

運(yùn)動前1h 運(yùn)動后1h對照組 13.17±2.47 38.53±6.05a 37.72±6.19a 29.85±7.01abc組別血清腫瘤壞死因子-α/（μg·L-1）運(yùn)動后6h 運(yùn)動后12h試驗(yàn) 1 組 13.03±2.29 36.86±7.57a 35.82±7.42a 28.78±6.29abc試驗(yàn) 2 組 13.01±2.28 30.58±7.38ad試驗(yàn) 3 組 12.98±2.16 29.27±6.53ad 27.82±6.38ad 16.78±6.36abcd 29.82±6.59ad 18.23±6.23abcd

表6 各組運(yùn)動員血清IL-6的水平比較（±s）Tab.6 Comparison of serum IL-6 levels of athletes in each group （±s）

表6 各組運(yùn)動員血清IL-6的水平比較（±s）Tab.6 Comparison of serum IL-6 levels of athletes in each group （±s）

注：組內(nèi)各時間點(diǎn)比較：a表示與運(yùn)動前比較，P＜0.05；b表示與運(yùn)動后1 h比較，P＜0.05；c表示與運(yùn)動后6 h比較，P＜0.05。組間比較：d表示與同時間點(diǎn)與對照組比較，P＜0.05。Note:Comparison of time points in the group:a compared with before exercise,P＜0.05,b compared with 1 hour after exercise,P＜0.05;,c compared with 6 hours after exercise,P＜0.05.Comparison between groups:d compared with the control group at the same time point,P＜0.05.

運(yùn)動前1h 運(yùn)動后1h對照組 10.45±1.29 34.68±3.62a 33.69±3.74a 28.44±4.11abc組別白細(xì)胞介素-6/（pg·mL-1）運(yùn)動后6h 運(yùn)動后12h試驗(yàn)組 1 組 10.91±1.26 31.91±5.44a 30.85±5.21a 26.26±5.09abc試驗(yàn)組 2 組 10.86±1.23 32.39±5.23a試驗(yàn)組 3 組 10.75±1.17 31.26±4.86a 29.85±4.71a 20.52±5.25abcd 31.96±4.21a 22.36±4.33abcd

由表5、表6可知，組內(nèi)比較，與運(yùn)動前相比，對照組與各試驗(yàn)組的TNF-α、IL-6水平在運(yùn)動后1 h顯著升高（P＜0.05），運(yùn)動后6 h、12 h的絕對值有所下降，但仍顯著高于運(yùn)動前（P＜0.05）。組間比較，與對照組相比，各試驗(yàn)組的TNF-α水平在運(yùn)動前無顯著性差異，試驗(yàn)組2組、3組在運(yùn)動后6 h、12 h 時 IL-6 水平分別為 （22.36±4.33） pg·mL-1和20.52±5.25） pg·mL-1，顯著低于對照組 （P＜0.05）。而運(yùn)動后1 h、6 h也無顯著性差異。

3 討論

CK是機(jī)體ATP-CP系統(tǒng)代謝的關(guān)鍵酶，廣泛存在于骨骼肌、心肌細(xì)胞中。在機(jī)體供氧不足時，需要通過無氧酵解部分供能，無氧酵解使血LD水平升高，機(jī)體無氧代謝能力常用于LDH活性評價[5]。正常情況下血清CK、LDH水平較低，而在高強(qiáng)度運(yùn)動下，肌肉組織損傷、繼發(fā)炎癥反應(yīng)，細(xì)胞受到破壞、或者自由基和過氧化物攻擊細(xì)胞膜，導(dǎo)致細(xì)胞膜通透性升高，使CK、LDH釋放入血。同時，細(xì)胞內(nèi)CK、LDH的流失也影響了細(xì)胞能量代謝，進(jìn)一步加重肌肉損傷[6]。血清中的CK、LDH水平與運(yùn)動損傷有密切關(guān)系[7]。本研究中，各時間段試驗(yàn)組的CK、LDH水平顯著低于對照組，提示蜜環(huán)菌提取物可能有助于減輕肌肉細(xì)胞損傷、調(diào)節(jié)細(xì)胞膜通透性，從而減輕運(yùn)動性損傷。

高強(qiáng)度高負(fù)荷的運(yùn)動下，機(jī)體內(nèi)的氧化和抗氧化系統(tǒng)容易出現(xiàn)失衡，致使氧自由基過度積累，多種酶活性改變，并破壞細(xì)胞膜、線粒體等重要結(jié)構(gòu)，從而引起器官損傷。GSH－Px是機(jī)體內(nèi)重要的過氧化物分解酶，可催化有毒的過氧化物還原為無毒的羥基化合物，保護(hù)細(xì)胞和機(jī)體內(nèi)重要生物分子的結(jié)構(gòu)與功能[8]。MDA是反映體內(nèi)氧化應(yīng)激水平的重要指標(biāo)[9]。已經(jīng)有研究證明了蜜環(huán)菌中的多糖、氨基酸等成分有著良好的抗氧化、清除自由基作用[10-11]。本研究中，各組運(yùn)動后的GSH-Px水平顯著升高，MDA水平則顯著降低，且在12 h后恢復(fù)到了運(yùn)動前水平。各時間段試驗(yàn)組的GSH-Px水平較對照組升高，MDA水平降低，與相關(guān)文獻(xiàn)報道相一致。

適度運(yùn)動可以促進(jìn)某些炎癥因子，如IL-6和TNF-α等釋放，可以發(fā)揮其抗炎作用，促進(jìn)糖脂代謝，保證運(yùn)動中骨骼肌以及其他臟器組織的能量供給[12]。而高強(qiáng)度的運(yùn)動可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生廣泛的炎癥反應(yīng)，炎癥細(xì)胞浸潤和炎癥介質(zhì)的大量釋放可以觸發(fā)級聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致瀑布式的細(xì)胞炎癥，造成細(xì)胞不可逆性的損傷[13]。本研究中，運(yùn)動后的TNF-α、IL-6水平顯著升高，而試驗(yàn)組2組、3組的指標(biāo)顯著低于同時段對照組，說明蜜環(huán)菌提取物具有一定的免疫調(diào)節(jié)和減輕炎癥反應(yīng)的作用。既往也有研究表明，蜜環(huán)菌提取物具有改善睡眠、免疫調(diào)節(jié)等功效和作用[14]。

4 結(jié)論

對運(yùn)動員高強(qiáng)度運(yùn)動前、后各時間點(diǎn)的血清中相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行了檢測與比較，結(jié)果顯示，蜜環(huán)菌提取物可以顯著降低CK、LDH等骨骼肌、心肌損傷標(biāo)志物，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化活性、減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)，減少炎癥因子，調(diào)節(jié)免疫。表明蜜環(huán)菌提取物對運(yùn)動員的運(yùn)動性損傷有一定的改善作用。但服藥劑量較低時（0.25 g·d-1）上述作用并不顯著，其具體機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。