小兒HbH病血清中sTfR水平變化及臨床意義

賴梅梅 于霞 廖志勇

[摘要] 目的 研究可溶性轉鐵蛋白受體（sTfR）在血紅蛋白H（HbH）病患兒血清中的表達及其臨床意義。 方法 選取2017年1月—2018年9月電子科技大學醫(yī)學院附屬婦女兒童醫(yī)院（以下簡稱“我院”）診治的79例HbH病患兒為病例組，根據(jù)基因型檢測結果將其分為非缺失型組26例，缺失型組53例，選取同期于我院健康體檢的兒童40名作為對照組。比較三組血清sTfR、血紅蛋白（Hb）、平均血紅蛋白含量（MCH）、紅細胞數(shù)目（RBC）、平均紅細胞體積（MCV）和血清鐵蛋白（SF）水平;分析HbH病患兒血清sTfR水平與血液學指標之間的相關性。 結果 病例組缺失型（-α3.7/--SEA、-α4.2/--SEA）占67.1%，非缺失型（αCSα/--SEA、αQSα/--SEA、αΔ30α/--SEA）占32.9%。缺失型組和非缺失型組血清sTfR、SF水平高于對照組，而Hb、RBC、MCH、MCV水平低于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（均P < 0.05）。非缺失型組血清sTfR、MCH、MCV、SF水平高于缺失型組，而Hb、RBC水平低于缺失型組，差異均有統(tǒng)計學意義（均P < 0.05）。病例組患兒血清sTfR水平與血清MCH、MCV、SF呈顯著正相關（r = 0.621、0.734、0.521，P < 0.05），而與RBC、Hb呈顯著負相關（r = -0.721、-0.675，P < 0.05）。 結論 血清sTfR水平與HbH病患兒貧血嚴重程度、鐵代謝情況有關，有可能成為反映患兒病情的血清學指標。

[關鍵詞] 小兒;血紅蛋白H病;可溶性轉鐵蛋白受體;臨床意義

[中圖分類號] R556 ? ? ? ? ?[文獻標識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1673-7210（2020）09（b）-0117-04

[Abstract] Objective To study the expression of soluble transferrin receptor （sTfR） in the serum of children with hemoglobin H （HbH） disease and its clinical significance. Methods From January 2017 to September 2018， 79 patients with HbH disease who diagnosed and treated in Women and Children′s Hospital Affiliated to Medical College of Electronic Science and Technology University （“our hospital” for short） were selected as case group， and they were divided into non-deletion group （26 cases） and deletion group （53 cases） according to the genotype test results. A total of 40 healthy children in our hospital during the same period were selected as control group. The sTfR， hemoglobin （Hb）， mean corpuscular hemoglobin （MCH）， red blood cell （RBC）， mean corpuscular volume （MCV） and serum ferritin level berween three groups were statistically analyzed and the correlation between serum sTfR level and hematological indexes in children with HbH disease were analyzed. Results In case group， deletion type （-α3.7/--SEA， -α4.2/--SEA） accounted for 67.1%， non-deletion type （αCSα/--SEA， αQSα/--SEA， αΔ30α/--SEA） accounted for 32.9%. The serum levels of sTfR and SF in deletion group and non-deletion group were higher than those in control group， while the levels of Hb， RBC， MCH and MCV were lower than those in control group， with statistically significant differences （all P < 0.05）. The serum levels of sTfR， MCH， MCV and SF in non-deletion group were higher than those in deletion group， while the levels of Hb and RBC were lower than those in deletion group， with statistically significant differences （all P < 0.05）. In case group， the serum sTfR level was significantly positively correlated with serum MCH， MCV and SF （r = 0.621， 0.734， 0.521， P < 0.05）， but negatively correlated with RBC and Hb （r = -0.721， -0.675， P < 0.05）. Conclusion Serum level of sTfR is related to the severity of anemia and iron metabolism in children with HbH disease， which may be a serological indicator of the disease.

[Key words] Children; Hemoglobin H disease; Soluble transferrin receptor; Clinical significance

血紅蛋白H（HbH）病又稱中間型α-地中海貧血，是常見的人類單基因疾病之一，其特征是血紅蛋白鏈（α-珠蛋白）的產(chǎn)生減少或缺失[1]。全世界約有5%的人口攜帶α-地中海貧血突變體，特別在熱帶地區(qū)發(fā)生頻率較高[2]。HbH病異?；蛐偷念愋投鄻樱瑢е禄颊吲R床表現(xiàn)差異較大。由于持續(xù)溶血，導致患者輕度到中度貧血，必要時需要輸血治療[3]。反復的鐵丟失和過量的補充易導致HbH病患兒出現(xiàn)鐵代謝紊亂，使患兒免疫系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)及運動系統(tǒng)功能受到損害[4]。因此，尋找血清學指標評估HbH病患兒貧血及鐵代謝狀況具有重要的臨床意義。可溶性轉鐵蛋白受體（sTfR）是近年來發(fā)現(xiàn)的評估機體鐵代謝及機體紅細胞生成能力的指標，是不含跨膜片段和胞漿區(qū)片段的轉鐵蛋白受體（TfR），長度為671個氨基酸，能夠結合轉鐵蛋白形成復合物，血清中sTfR水平與總TfR成正比，可以反映機體鐵代謝情況，且不易受感染、炎癥等慢性疾病的影響[5-6]。本研究通過檢測HbH病患兒血清sTfR的表達，初步探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月—2018年9月電子科技大學醫(yī)學院附屬婦女兒童醫(yī)院（以下簡稱“我院”）診治的79例HbH病的患兒為病例組，其中男43例，女36例;年齡4個月～13歲，平均（4.2±1.3）歲;根據(jù)基因型檢測結果將其分為非缺失型組26例，缺失型組53例。納入標準：①HbH病診斷標準參照張之南主編《血液病診斷及療效標準》[7];②臨床資料完整。排除標準：①因葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏、感染、自身免疫性疾病及藥物因素導致的溶血性貧血者;②β-地中海貧血等其他血液系統(tǒng)疾病者;③患兒既往有輸血或鐵劑等治療病史;④監(jiān)護人或患兒家屬拒絕此研究者。選取同期于我院健康體檢的兒童40名作為對照組，其中男24例，女16例;年齡6個月～14歲，平均（4.5±1.5）歲。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05），具有可比性。本研究經(jīng)我院醫(yī)學倫理委員會批準，患者知情同意。

1.2 方法及觀察指標

采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）雙抗體夾心法檢測血清sTfR水平。采取受試者清晨空腹靜脈血約3 mL，枸櫞酸鈉抗凝，4℃條件下3000 r/min離心10 min，離心半徑為10 cm，取上清液，-80℃冰箱保存。實驗步驟嚴格按照試劑盒說明書進行，試劑盒購自上海遠慕生物科技有限公司（生產(chǎn)批號：20161207）。

以標準品的濃度梯度值為橫坐標，以酶標儀（Bio-Rad iMark，美國伯樂）測定的吸光度（OD）值為縱坐標，繪制標準曲線。應用樣品稀釋液將樣本以1∶20 000稀釋，根據(jù)血清樣品的OD值，計算相應的樣品濃度。

全自動五分類血球計數(shù)儀（XT-2000i，日本希森美康株式會社）檢測外周血的血紅蛋白（Hb）、平均血紅蛋白含量（MCH）、紅細胞數(shù)目（RBC）、平均紅細胞體積（MCV）。應用ELISA雙抗體夾心法檢測血清鐵蛋白（SF）濃度，試劑盒購自上海仁捷生物公司（生產(chǎn)批號：20170102）。

采用α-地中海貧血基因檢測試劑盒（多重Gap-PCR法）檢測病例組患兒三種缺失型基因型（-α/--SEA），包括--SEA，-α3.7，-α4.2，試劑盒購自中山大學達安基因股份有限公司（生產(chǎn)批號：20161124）。采用非缺失型α-地中海貧血基因檢測試劑盒（PCR探針法）檢測4種非缺失型，包括αCSα/--SEA、αQSα/--SEA、αΔ30α/--SEA、αCD59α/--SEA，試劑盒購自深圳益生堂生物有限公司（生產(chǎn)批號：20161203）。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料用均數(shù)±標準差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用t檢驗;Pearson線性相關分析血清sTfR水平與血液學指標的相關性。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 病例組患兒基因型結果

鑒定出--SEA、-α3.7、-α4.2、HbCS、HbQS、αΔ30共6種基因突變。其中缺失型組占67.1%（53/79），-α3.7/--SEA、-α4.2/--SEA分別占48.1%（38/79）、19.0%（15/79）;非缺失型組占32.9%（26/79），非缺失型組中αCSα/--SEA、αQSα/--SEA、αΔ30α/--SEA分別占21.5%（17/79）、7.6%（6/79）、3.8%（3/79）。

2.2 三組血清sTfR及血液學指標比較

三組血清sTfR、Hb、RBC、MCH、MCV、SF水平比較，差異均有統(tǒng)計學意義（均P < 0.05）。缺失型組和非缺失型組血清sTfR、SF水平高于對照組，而Hb、RBC、MCH、MCV水平低于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（均P < 0.05）。非缺失型組血清sTfR、MCH、MCV、SF水平高于缺失型組，而Hb、RBC水平低于缺失型組，差異均有統(tǒng)計學意義（均P < 0.05）。見表1。

2.3 病例組患兒血清sTfR水平與血液學指標的相關性

病例組患兒血清sTfR水平與血清MCH、MCV、SF呈顯著正相關（r = 0.621、0.734、0.521，P < 0.05），而與RBC、Hb呈顯著負相關（r = -0.721、-0.675，P < 0.05）。見圖1。

3 討論

α-地中海貧血是α-珠蛋白基因異常導致，臨床表現(xiàn)多種多樣，其中HbH病是較為嚴重的一種，特點是α-珠蛋白鏈和β-珠蛋白鏈比例失衡，β-珠蛋白形成四聚體的HbH，進一步損傷紅細胞膜，出現(xiàn)慢性溶血性貧血的臨床表現(xiàn)[8]。HbH病又可分為缺失型和非缺失型，缺失型是由α-珠蛋白基因缺失所致，非缺失型是基因的功能性點突變導致。我國HbH病以缺失型最為常見。本研究納入的79例患兒中，缺失型占67.1%，非缺失型占32.9%，缺失型中-α3.7/--SEA、-α4.2/--SEA分別占48.1%、19.0%，與以往研究報道一致[9]。研究顯示[3，10-13]，HbH病基因型具有顯著的地域性和異質性，不同地區(qū)、民族HbH病基因型各不相同。我國南方包括廣東、深圳、香港及臺灣地區(qū)HbH病基因型以缺失型為主，而廣西地區(qū)則以非缺失型為主。

sTfR蛋白是分子量為85 kDa單多肽鏈，能夠在血清中檢測出。細胞表面的TfR胞外段在基質金屬蛋白酶解作用下，使第100位精氨酸和第101位亮氨酸之間酶解，參與鐵轉運的生理過程。血清中sTfR不僅能反映機體總TfR水平，還能反映機體鐵代謝情況和紅細胞生成能力[14]。

本研究結果顯示，缺失型組和非缺失型組血清sTfR水平高于對照組（均P < 0.05），分析原因可能與HbH病患兒長期慢性貧血有關，導致鐵反應元件結合蛋白特異性結合到TfR信使RNA的鐵反應元件區(qū)域的能力增加，使TfR信使RNA增加，促進TfR的表達，血清sTfR水平也明顯升高[15]。本研究結果顯示，非缺失型組血清sTfR高于缺失型組（P < 0.05）。目前其原因尚不清楚，可能是非缺失型組HbH患兒臨床貧血癥狀更嚴重，部分患兒可能需要長期輸血治療，長期的溶血及貧血刺激骨髓無效性造血活躍，紅細胞生成顯著增加，導致血清sTfR明顯升高[16]。此外，由于非缺失型HbH患兒輸血次數(shù)較多，其更易發(fā)生鐵超負荷[17]。

本研究結果顯示，血清sTfR水平與血清SF呈正相關（P < 0.05）。其原因一方面是血清sTfR水平升高促進腸道鐵吸收增加;另一方面，部分貧血嚴重的患者需要間斷輸血治療，導致大量鐵進入機體，而機體尚無有效的排鐵機制，致使部分HbH患者發(fā)生鐵超載的現(xiàn)象[18-20]。此外，sTfR水平與血清MCH、MCV呈顯著正相關，而與RBC、Hb呈顯著負相關（均P < 0.05）。提示sTfR水平越高，患兒貧血情況越嚴重，與Huang等[15]研究結果一致。因此，臨床上檢測HbH病患兒血清sTfR水平，有助于判斷患兒貧血嚴重程度，如聯(lián)合檢測SF等指標，可能有助于判斷患兒鐵代謝情況，指導臨床合理用藥，避免補鐵過量引起的各種并發(fā)癥。

綜上所述，血清sTfR水平與HbH病患兒貧血嚴重程度、鐵代謝情況有關，有可能成為反映患兒病情的血清學指標。

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（收稿日期：2019-12-17）