• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    類泛素蛋白酶1及低氧誘導(dǎo)因子-1α在人卵巢癌組織中的表達(dá)及意義的探索

    2015-10-21 07:43:44
    關(guān)鍵詞:交界泛素低氧

    王 偉

    (黃岡職業(yè)技術(shù)學(xué)院 醫(yī)藥衛(wèi)生學(xué)院,湖北 黃岡 438000)

    類泛素蛋白酶1及低氧誘導(dǎo)因子-1α在人卵巢癌組織中的表達(dá)及意義的探索

    王偉

    (黃岡職業(yè)技術(shù)學(xué)院 醫(yī)藥衛(wèi)生學(xué)院,湖北 黃岡 438000)

    目的:觀察類泛素蛋白酶1和低氧誘導(dǎo)因子-1α在卵巢癌中的表達(dá)情況,并探討類泛素蛋白酶1和低氧誘導(dǎo)因子-1α在卵巢癌中的表達(dá)相關(guān)性及其與卵巢癌臨床病理特征之間的聯(lián)系。方法:利用免疫組織化學(xué)的方法分別對(duì)卵巢的非腫瘤性病和腫瘤組織類泛素蛋白酶1及HIF-1α的表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果:HIF-1α在非腫瘤性病卵巢組織中未見(jiàn)表達(dá),在良性和交界性卵巢腫瘤組織中見(jiàn)少量表達(dá)。惡性卵巢腫瘤表達(dá)明顯較高,在高級(jí)別惡性腫瘤中的表達(dá)明顯高于低級(jí)別惡性腫瘤。腫瘤分化程度越低,HIF-1α的表達(dá)越顯著。結(jié)論:人卵巢癌中存在SENP1和HIF-1α蛋白的高表達(dá)可能參與了卵巢癌的發(fā)生和進(jìn)展及其惡性演進(jìn)過(guò)程。聯(lián)合檢測(cè)SENP-1和HIF-1α的表達(dá)可能對(duì)人卵巢癌的分級(jí)、分期和預(yù)后判斷有重要參考意義。

    卵巢癌;類泛素蛋白酶1;低氧誘導(dǎo)因子1-α

    在卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌和宮頸癌這三大婦科腫瘤中,卵巢癌的治愈率差、死亡率高。其腫瘤病理學(xué)分類多樣,發(fā)病原因不清。隨著我國(guó)工業(yè)化程度的增加,卵巢癌發(fā)病率有上升趨勢(shì)[1]。卵巢癌作為實(shí)體腫瘤,低氧是其重要的生存微環(huán)境因素,為了適應(yīng)低氧,增加氧的利用和減少氧的消耗,低氧誘導(dǎo)產(chǎn)生的低氧誘導(dǎo)因子(HIF-1)作為一個(gè)最重要的核轉(zhuǎn)錄因子,會(huì)激活卵巢癌腫瘤細(xì)胞的很多基因的轉(zhuǎn)錄活性異常,直接導(dǎo)致其一系列生物學(xué)行為改變,如紅細(xì)胞的異常生長(zhǎng)、刺激新生血管的形成、增加無(wú)氧糖酵解、減少有氧代謝及放、化療耐受等,與卵巢癌的發(fā)生、進(jìn)展、臨床病理分期、分級(jí)及預(yù)后均相關(guān)[2]。目前對(duì)HIF-1的調(diào)控機(jī)制主要關(guān)注在其翻譯后水平的調(diào)控,包括羥基化、乙?;?、磷酸化、泛素化和小泛素類蛋白化等機(jī)制,其中,類泛素蛋白酶1(SENP-1)對(duì)HIF-1α 的調(diào)控是通過(guò)去SUMO化過(guò)程來(lái)增加HIF-1α的穩(wěn)定性越來(lái)越受到人們關(guān)注。其本身對(duì)腫瘤的血管生成有一定的促進(jìn)作用[3]。因此,本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)SENP-1和HIF-1α在卵巢惡性、交界性、良性腫瘤及非腫瘤性病組織中的表達(dá)情況,判斷其臨床診療價(jià)值。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    收集黃岡市各醫(yī)院病理科2010~2014卵巢上皮性腫瘤標(biāo)本共130例(標(biāo)本全部為初治病例,術(shù)前均未進(jìn)行放療、化療和免疫治療等其他治療)并查詢其臨床資料,另選10例非腫瘤病變的卵巢組織設(shè)為對(duì)照組。其中漿液性腫瘤50例,包括良性10例、交界性10例和惡性30例;粘液性腫瘤50例,包括良性10例、交界性10例和惡性30例;卵巢子宮內(nèi)膜樣腺癌20例和透明細(xì)胞癌10例。卵巢癌的病例中發(fā)病年齡:17~73歲,中位年齡50歲;臨床分期:Ⅰ~Ⅱ期:28例,Ⅲ~Ⅳ期:62例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移:有:62例,無(wú):28例。

    1.2 方法

    采用免疫組織化學(xué)染色法(EnVisionTM二步法)對(duì)上述實(shí)驗(yàn)病例(共140例)進(jìn)行SENP-1和HIF-1α蛋白表達(dá)檢測(cè),并分析它們的表達(dá)情況與臨床病理特征的相關(guān)性。

    2 結(jié)果

    (1)在上述140例實(shí)驗(yàn)病例中,免疫組化結(jié)果顯示:SENP-1和HIF-1α在正常卵巢組織中無(wú)表達(dá),而在130例腫瘤性病變中有不同程度的表達(dá)。其表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在腫瘤性病變中,SENP-1和HIF-1α在良性病變和交界性病變中均有少量表達(dá),而在惡性病變中表達(dá)相對(duì)較高。其表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),并且SENP-1和HIF-1α在卵巢低級(jí)別癌的表達(dá)程度明顯低于高級(jí)別癌的表達(dá)程度(P<0.05)。SENP-1和HIF-1α在10例透明細(xì)胞癌均有表達(dá),與正常卵巢、良性病變及交界性病變的表達(dá)均有明顯差異(P<0.05)(見(jiàn)表1、表2)。

    (2)SENP-1和HIF-1α在卵巢上皮源性腫瘤中的表達(dá)存在明顯的相關(guān)性(P<0.05)(見(jiàn)表3)。

    (3)SENP-1和HIF-1α在卵巢癌中的表達(dá)與患者的臨床分期(FIGO分期)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05),與年齡無(wú)明顯關(guān)系(P>0.05)(見(jiàn)表4)。

    表1 SENP-1在10例正常卵巢組織和130例卵巢上皮性腫瘤中的表達(dá)情況

    表2 HIF 在10例正常卵巢組織和130例卵巢上皮性腫瘤中的表達(dá)情況

    表3  SENP-1和HIF-1α在卵巢癌中表達(dá)的相關(guān)性

    3 討論

    本研究利用免疫組織化學(xué)的方法分別對(duì)正常卵巢組織、交界性卵巢腫瘤、惡性卵巢腫瘤分為漿液性卵巢癌、粘液性卵巢癌、子宮內(nèi)膜樣腺癌和卵巢透明細(xì)胞癌組織HIF-1α的表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè),發(fā)現(xiàn)HIF-1α 在正常卵巢組織中未見(jiàn)表達(dá)。但在良性卵巢腫瘤和交界性腫瘤組織中見(jiàn)少量表達(dá)。惡性卵巢腫瘤中的表達(dá)明顯高于卵巢良性腫瘤、交界性腫瘤和正常卵巢組織,P<0.05, 差異有顯著性意義。而且在高級(jí)別惡性腫瘤中的表達(dá)明顯高于低級(jí)別惡性腫瘤,P<0.05, 差異有顯著性意義。另外,我們還檢測(cè)到在10例分化程度較低的卵巢透明細(xì)胞癌組織中也檢測(cè)到HIF-1α明顯表達(dá),提示HIF-1α在惡性腫瘤中高表達(dá),而且越是分化程度越低的腫瘤,HIF-1α的表達(dá)越顯著。這一結(jié)果與Akiko H等[5]文獻(xiàn)的報(bào)道相似。該文獻(xiàn)報(bào)道用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)HIF-1α蛋白表達(dá)水平,結(jié)果顯示在正常卵巢、卵巢漿液性囊腺瘤、卵巢交界性漿液性囊腺瘤及卵巢漿液性囊腺癌組織中表達(dá)率呈上升趨勢(shì)。在正常卵巢組織、卵巢交界性腫瘤和卵巢惡性腫瘤組織中HIF-1α mRNA表達(dá)陽(yáng)性率呈上升趨勢(shì)。另外,HIF-1α mRNA表達(dá)與卵巢癌的分化程度呈負(fù)相關(guān)。HIF-1α在卵巢癌早期階段升高,并隨著腫瘤進(jìn)一步發(fā)展和組織病理分級(jí)等級(jí)增加而有明顯增高趨勢(shì)??梢?jiàn)HIF-1α在卵巢腫瘤從良性向惡性轉(zhuǎn)化的過(guò)程中可能起到重要作用。Miyazawa等[6]研究發(fā)現(xiàn)卵巢癌中HIF-1α在蛋白水平上呈現(xiàn)出不同程度的強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),HIF-1α蛋白表達(dá)水平與腫瘤的FIGO臨床分期、分級(jí)呈正相關(guān),低分化卵巢癌表達(dá)HIF-1α更強(qiáng),由此推測(cè)HIF-1α可能在卵巢癌的血管生成中起到重要作用。 Zhong H[7]等的報(bào)道顯示HIF-1的增強(qiáng)表達(dá)發(fā)生于腫瘤早期,先于腫瘤的侵襲和血管的形成。HIF-1α蛋白在臨床分期較晚、分化較低的卵巢癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá),可能是由于腫瘤生長(zhǎng)過(guò)于迅速而導(dǎo)致組織血供不足而發(fā)生缺血壞死,誘導(dǎo)了HIF-1α蛋白的表達(dá),而過(guò)表達(dá)的HIF-1α 也可以進(jìn)一步促進(jìn)新生血管的形成和激活廣泛的下游靶基因,介導(dǎo)腫瘤適應(yīng)低氧而發(fā)生進(jìn)一步地侵襲和轉(zhuǎn)移,加重預(yù)后不良。

    這些研究均提示HIF-1α 在卵巢癌形成的早期就有表達(dá),檢測(cè)HIF-1α 的表達(dá)對(duì)于腫瘤的分期、分級(jí)和預(yù)后監(jiān)測(cè)都是非常有意義的??梢悦鞔_HIF-1α是卵巢腫瘤發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)移的啟動(dòng)因子,如果能夠阻抑啟動(dòng),就能有效控制腫瘤及其惡性表象。目前已發(fā)現(xiàn)羥基化、磷酸化、乙?;-亞基硝基化、泛素化及非泛素依賴性降解六種調(diào)節(jié)HIF-1的基本方式。其中,在常氧條件下,HIF-1在胞漿內(nèi)主要經(jīng)泛素-蛋白酶體途徑降解[8]。在低氧情況下,類泛素蛋白酶-1(SENP-1)通過(guò)去SUMO化過(guò)程增加HIF-1α的穩(wěn)定性的作用越來(lái)越受到人們的關(guān)注,而且,SENP-1其本身對(duì)腫瘤的血管生成有一定的促進(jìn)作用,從而引起人們對(duì)其更多的關(guān)注。

    小 泛 素 類 蛋 白 ( small ubiquitin-related modifier,SUMO)是一類小分子蛋白。其結(jié)構(gòu)與泛素類似,目前已發(fā)現(xiàn)四種亞型, 即SUMO-1、SUMO-2、SUMO-3、SUMO-4。SUMO家族屬于泛素樣蛋白家族,是分子量約為12KD的小分子蛋白,從擬南芥到人類普遍存在表達(dá)。SUMO與泛素競(jìng)爭(zhēng)同一賴氨酸修飾位點(diǎn)。SUMO與很多靶底物分子與共價(jià)結(jié)合,并對(duì)其進(jìn)行翻譯后修飾的過(guò)程叫做SUMO化(SUMOylation),通過(guò)對(duì)底物蛋白SUMO化修飾而改變其功能,胞內(nèi)定位、和/或半衰期[9]。SUMO化與泛素化作用途徑基本相似,但Sumo化并不介導(dǎo)底物蛋白降解,而且SUMOylation本身是個(gè)動(dòng)態(tài)可逆的過(guò)程,可被特異性蛋白酶從SUMO化底物上去除,即去SUMO化[10]。去SUMO 化酶稱為類泛素蛋白酶1(SENP1)。共有6種SENP,分別是SENP1~SENP6在哺乳動(dòng)物中已被確定。SENP-1不需要分子氧作為底物,就能使HIF-1α 發(fā)生去SUMO化修飾。這一過(guò)程對(duì)于對(duì)維持低氧條件下HIF-1α的穩(wěn)定性方面具有非常重要的作用。當(dāng)SENP1缺失時(shí),HIF-1α穩(wěn)定性下降,提示我們?nèi)UMO化修飾與HIF-1α蛋白降解有關(guān)。

    體內(nèi)腫瘤的低氧狀態(tài)是無(wú)法改變的,SENP1對(duì)HIF-1α蛋白這種不依賴氧分子的調(diào)控機(jī)制非常重要,聯(lián)合檢測(cè)SENP1和HIF-1α 對(duì)于評(píng)價(jià)腫瘤的分級(jí)、分期和預(yù)后均很有價(jià)值,目前尚未見(jiàn)到卵巢癌組織中對(duì)SENP1的檢測(cè)的報(bào)道。我們的研究發(fā)現(xiàn),發(fā)現(xiàn)SENP1在10例正常卵巢組織中可見(jiàn)一例弱陽(yáng)性表達(dá)。但在良性卵巢腫瘤中未見(jiàn)表達(dá),在交界性腫瘤組織中見(jiàn)少量表達(dá)。SENP1在惡性卵巢腫瘤中的表達(dá)明顯高于卵巢良性腫瘤、交界性腫瘤和正常卵巢組織,P<0.05, 差異有顯著性意義。而且在高級(jí)別惡性腫瘤中的表達(dá)明顯高于低級(jí)別惡性腫瘤,P<0.05, 差異有顯著性意義。在10例分化程度較低的卵巢透明細(xì)胞癌中也能檢測(cè)到SENP1的高表達(dá),提示我們SENP1的表達(dá)在惡性腫瘤中高表達(dá),而且越是分化程度越低的腫瘤,SENP1的表達(dá)越顯著。

    在對(duì)SENP1和HIF-1α 表達(dá)的相關(guān)性檢測(cè)中發(fā)現(xiàn),二者的表達(dá)呈正相關(guān),二者的表達(dá)情況均與疾病的發(fā)生年齡無(wú)關(guān),但是與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān),有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者相對(duì)預(yù)后欠佳,但是卻能發(fā)現(xiàn)SENP1和HIF-1α 的高表達(dá)。FIGO分期較晚的Ⅲ期和Ⅳ期患者組織切片中SENP1和HIF-1α 的表達(dá)明顯增強(qiáng)。提示在從正常卵巢組織到良性腫瘤到交界性腫瘤直至卵巢惡性腫瘤的疾病演進(jìn)過(guò)程中,可能是SENP1通過(guò)去SUMO化的過(guò)程實(shí)現(xiàn)了對(duì)HIF-1α的正向調(diào)控,參與了卵巢腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展、血管生成、種植、侵襲、轉(zhuǎn)移和放、化療耐受的惡性演進(jìn)過(guò)程。

    本研究說(shuō)明人卵巢癌中存在SENP1和HIF-1α蛋白的高表達(dá)可能參與了卵巢癌的發(fā)生和進(jìn)展及其惡性演進(jìn)過(guò)程。聯(lián)合檢測(cè)SENP-1和HIF-1α的表達(dá)可能對(duì)人卵巢癌的分級(jí)、分期和預(yù)后判斷有重要參考意義。

    [ 1] Rofstad EK.Microenvironment-induced cancer metastasis. Int J Radiat Biol. 2000,76(5):589-605.

    [2]Denko NC, Fontana LA, Hudson KM,et al. Investigating hypoxic tumor physiology through gene expression patterns.Oncogene.2003,1;22(37):5907-5914.

    [3]Semenza GL, Nejfelt MK, Chi SM, et al. Hypoxia-inducible nuclear factors bind to an enhancer element located 3' to the human erythropoietin gene. Proc Natl Acad Sci U S A. 1991,1:88(13): 5680-5684.

    [4]Semenza GL, Nejfelt MK, Chi SM, and Antonarakis SE. Hypoxia-inducible nuclear factors bind to and enhancer element located 3' to the human erythropoietin gene. Proc Natl Acad Sci USA 1991,88:5680-5684.

    [5]Horiuchi A, Imai T, Shimizu M, et al. Hypoxia-induced changes in the expression of VEGF,HIF-1 alpha and cell cycle-related molecules in ovarian cancer cells[J]. Anticancer Res,2002,22(5):2697-2702.

    [6]Miyazawa M, Yasuda M, Fujita M, et al. Association of hypoxia-inducible factor-1 expression with histology in epithelial ovarian tumors: a quantitative analysis of HIF-1[ J] . Arch Gynecol Obstet,2009,279(6):789-796.

    [7]Zagzag D, Zhong H, Scalzitti J M, et al. Expression of hypoxia-inducible factor 1alpha in brain tumors: association with angiogenesis, invasion, and progression[J]. Cancer,2000,88(11):2606-2618.

    [8]Wei W, Yu X D. Hypoxia-inducible factors:crosstalk between their protein stability and protein degradation[J].Cancer Lett,2007,257(2):145-156.

    [9]Agbor T A, Taylor C T. SUMO, hypoxia and the regulation of metabolism[J]. Biochem Soc Trans,2008,36(Pt 3):445-448.

    [10]Geiss-Friedlander R, Melchior F. Concepts in sumoylation: a decade on[J]. Nat Rev Mol Cell Biol,2007,8(12):947-956.

    [11]劉麗愉,楊力芳,曹亞. 低氧誘導(dǎo)因子信號(hào)通路的研究新進(jìn)展[J].國(guó)際病理科學(xué)與臨床雜志, 2011(03).

    [責(zé)任編輯:曾 華]

    R737.31

    A

    1672-1047(2015)06-0129-05

    10.3969/j.issn.1672-1047.2015.06.37

    2015-10-13

    王 偉,女,湖北黃岡人,講師。研究方向:卵巢腫瘤。

    猜你喜歡
    交界泛素低氧
    間歇性低氧干預(yù)對(duì)腦缺血大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)的影響
    哀傷
    法人(2021年12期)2021-05-09 17:24:24
    Wnt/β-catenin信號(hào)通路在低氧促進(jìn)hBMSCs體外增殖中的作用
    蛋白泛素化和類泛素化修飾在植物開(kāi)花時(shí)間調(diào)控中的作用
    泛RNA:miRNA是RNA的“泛素”
    泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域與泛素化信號(hào)的識(shí)別
    裸鼴鼠不同組織中低氧相關(guān)基因的表達(dá)
    SCF E3泛素化連接酶的研究進(jìn)展
    交界性卵巢腫瘤保留生育功能的治療進(jìn)展
    交界性卵巢上皮性腫瘤保守性手術(shù)的預(yù)后與生育狀況
    国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 亚洲精品中文字幕在线视频| 色视频在线一区二区三区| 九色成人免费人妻av| 国产精品无大码| tube8黄色片| 国产在视频线精品| 少妇的逼好多水| 日韩av在线免费看完整版不卡| 久久99热6这里只有精品| 黄色毛片三级朝国网站| av免费观看日本| 边亲边吃奶的免费视频| 老司机影院毛片| 成人亚洲精品一区在线观看| 97在线人人人人妻| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 国产一区亚洲一区在线观看| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲欧美一区二区三区国产| 国产成人a∨麻豆精品| 中国国产av一级| 欧美另类一区| 人妻夜夜爽99麻豆av| 亚洲人成网站在线观看播放| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲国产色片| 日本爱情动作片www.在线观看| 亚洲不卡免费看| 午夜老司机福利剧场| 免费大片18禁| 欧美日韩视频精品一区| 国产在线视频一区二区| 一级毛片aaaaaa免费看小| 亚洲国产精品国产精品| 嘟嘟电影网在线观看| 99热这里只有是精品在线观看| 日韩一区二区三区影片| 国精品久久久久久国模美| 丰满乱子伦码专区| 日本午夜av视频| 亚洲精品自拍成人| 母亲3免费完整高清在线观看 | 午夜视频国产福利| 新久久久久国产一级毛片| 婷婷色av中文字幕| 99热6这里只有精品| 男人爽女人下面视频在线观看| 日本欧美国产在线视频| 青青草视频在线视频观看| 激情五月婷婷亚洲| 国产国语露脸激情在线看| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 女人久久www免费人成看片| 久久婷婷青草| 丁香六月天网| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 丰满饥渴人妻一区二区三| 久久久精品区二区三区| 免费观看的影片在线观看| 亚洲,一卡二卡三卡| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产高清国产精品国产三级| 久久久久久久久大av| 色婷婷av一区二区三区视频| 日本av免费视频播放| 国产精品一国产av| av免费观看日本| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 中国美白少妇内射xxxbb| 国产不卡av网站在线观看| 男人添女人高潮全过程视频| 国产色爽女视频免费观看| tube8黄色片| 99久久精品一区二区三区| 精品人妻在线不人妻| 日本欧美视频一区| 精品久久久噜噜| 一本一本综合久久| videossex国产| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 女性被躁到高潮视频| 午夜激情av网站| 国产精品一区www在线观看| 在线 av 中文字幕| 日日爽夜夜爽网站| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 国产国语露脸激情在线看| 婷婷色麻豆天堂久久| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 免费人妻精品一区二区三区视频| 久久99蜜桃精品久久| 26uuu在线亚洲综合色| 亚洲欧洲国产日韩| 久久精品国产自在天天线| 欧美精品一区二区免费开放| 国产精品无大码| 国产 一区精品| 男的添女的下面高潮视频| 国产av精品麻豆| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 在线精品无人区一区二区三| 国产精品国产av在线观看| 日本欧美视频一区| 亚洲第一av免费看| 精品亚洲成a人片在线观看| 三上悠亚av全集在线观看| 婷婷成人精品国产| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 人妻少妇偷人精品九色| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 91精品伊人久久大香线蕉| 久久 成人 亚洲| 男男h啪啪无遮挡| 制服人妻中文乱码| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | av播播在线观看一区| 中文天堂在线官网| 国产成人精品久久久久久| 十八禁网站网址无遮挡| 亚洲不卡免费看| 飞空精品影院首页| 高清毛片免费看| 97在线人人人人妻| 国产一区有黄有色的免费视频| 乱码一卡2卡4卡精品| 涩涩av久久男人的天堂| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 高清在线视频一区二区三区| 十八禁高潮呻吟视频| 成年av动漫网址| 亚洲av在线观看美女高潮| 曰老女人黄片| 在线 av 中文字幕| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲人成网站在线播| 精品亚洲成a人片在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产精品人妻久久久久久| 亚洲成色77777| 伦理电影大哥的女人| 久久国产精品大桥未久av| 国产高清不卡午夜福利| 成人亚洲精品一区在线观看| 久久久精品免费免费高清| 久久精品国产a三级三级三级| 久久久久久久久久久丰满| av黄色大香蕉| 在线观看人妻少妇| 久热这里只有精品99| 亚洲国产精品999| 亚洲久久久国产精品| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 熟女电影av网| 日韩一本色道免费dvd| 欧美bdsm另类| 黑人高潮一二区| 激情五月婷婷亚洲| 91在线精品国自产拍蜜月| 美女福利国产在线| 嫩草影院入口| 一本大道久久a久久精品| 亚洲五月色婷婷综合| 久久久久精品性色| 嘟嘟电影网在线观看| av在线老鸭窝| 午夜免费观看性视频| 不卡视频在线观看欧美| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 亚洲国产精品一区二区三区在线| av.在线天堂| 久久久午夜欧美精品| 少妇被粗大猛烈的视频| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 18在线观看网站| www.色视频.com| 国产一区亚洲一区在线观看| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 一区二区三区免费毛片| 国产 精品1| 最近的中文字幕免费完整| 韩国av在线不卡| 中文字幕免费在线视频6| 国产69精品久久久久777片| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 国产日韩欧美视频二区| av专区在线播放| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 美女内射精品一级片tv| 99热6这里只有精品| 成年女人在线观看亚洲视频| 老女人水多毛片| 久久久久国产网址| 日韩av在线免费看完整版不卡| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 亚洲成色77777| 国产黄色免费在线视频| 看非洲黑人一级黄片| 婷婷色麻豆天堂久久| 色吧在线观看| 久久久精品94久久精品| 国产成人免费观看mmmm| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 高清午夜精品一区二区三区| 美女大奶头黄色视频| 少妇丰满av| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 97在线视频观看| 综合色丁香网| 我要看黄色一级片免费的| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产爽快片一区二区三区| 国产成人一区二区在线| 九草在线视频观看| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 少妇被粗大猛烈的视频| 欧美精品国产亚洲| 黄片播放在线免费| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 嘟嘟电影网在线观看| 中文字幕久久专区| 男人爽女人下面视频在线观看| 一二三四中文在线观看免费高清| 亚洲精品日本国产第一区| 91成人精品电影| 黄色欧美视频在线观看| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 国产熟女午夜一区二区三区 | 精品人妻熟女av久视频| 乱人伦中国视频| 国产伦理片在线播放av一区| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲国产av新网站| 免费av中文字幕在线| 男男h啪啪无遮挡| 狂野欧美激情性bbbbbb| 中文字幕制服av| 在线观看一区二区三区激情| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 两个人的视频大全免费| 国产极品粉嫩免费观看在线 | 成人漫画全彩无遮挡| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 久久久精品区二区三区| 日韩一区二区视频免费看| 亚洲经典国产精华液单| 亚洲精品,欧美精品| 一边亲一边摸免费视频| 美女内射精品一级片tv| 午夜激情福利司机影院| 亚洲人成网站在线播| 日韩成人伦理影院| 久久久久久久久久久免费av| 街头女战士在线观看网站| 一区二区av电影网| 99热网站在线观看| 久久久久人妻精品一区果冻| av国产久精品久网站免费入址| 亚洲精品中文字幕在线视频| 成人午夜精彩视频在线观看| 99精国产麻豆久久婷婷| 最新中文字幕久久久久| 2018国产大陆天天弄谢| 黄色毛片三级朝国网站| 午夜激情福利司机影院| 黄色欧美视频在线观看| 性高湖久久久久久久久免费观看| 边亲边吃奶的免费视频| 少妇人妻 视频| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 校园人妻丝袜中文字幕| 黄色视频在线播放观看不卡| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 久久精品国产亚洲av涩爱| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 国模一区二区三区四区视频| av在线app专区| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 国产精品偷伦视频观看了| 欧美精品国产亚洲| 老司机影院成人| 内地一区二区视频在线| 亚洲精品美女久久av网站| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 亚洲国产精品专区欧美| 视频中文字幕在线观看| 久久99热6这里只有精品| 精品久久久噜噜| 欧美三级亚洲精品| 婷婷色综合大香蕉| 国产一区二区在线观看av| 久久午夜综合久久蜜桃| 大香蕉97超碰在线| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 国产精品蜜桃在线观看| 久久这里有精品视频免费| 日韩一本色道免费dvd| 黑人猛操日本美女一级片| 久久久久精品性色| 国产精品人妻久久久久久| 国产 一区精品| 欧美另类一区| 日本黄色片子视频| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产免费福利视频在线观看| 亚州av有码| 九色亚洲精品在线播放| 午夜免费男女啪啪视频观看| 国产永久视频网站| 国产精品一区二区在线不卡| 婷婷色av中文字幕| 插逼视频在线观看| 中文字幕最新亚洲高清| 飞空精品影院首页| 满18在线观看网站| 久久久精品94久久精品| a级毛色黄片| www.av在线官网国产| 搡女人真爽免费视频火全软件| 我要看黄色一级片免费的| 两个人免费观看高清视频| 满18在线观看网站| 色婷婷av一区二区三区视频| 嫩草影院入口| 欧美丝袜亚洲另类| 国产精品不卡视频一区二区| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产日韩欧美视频二区| 亚洲性久久影院| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 欧美精品一区二区大全| 777米奇影视久久| 高清欧美精品videossex| 新久久久久国产一级毛片| 中文字幕人妻丝袜制服| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 性高湖久久久久久久久免费观看| 亚洲美女黄色视频免费看| 国产视频首页在线观看| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 久久亚洲国产成人精品v| freevideosex欧美| 免费大片18禁| 欧美成人精品欧美一级黄| 女性生殖器流出的白浆| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 欧美xxxx性猛交bbbb| 一级毛片aaaaaa免费看小| 最近中文字幕2019免费版| 亚洲av男天堂| 高清欧美精品videossex| 精品一品国产午夜福利视频| 两个人的视频大全免费| 丰满乱子伦码专区| 亚洲av综合色区一区| 国产高清不卡午夜福利| 99热网站在线观看| 99久国产av精品国产电影| 国产高清三级在线| 熟女电影av网| 亚洲国产精品专区欧美| 国模一区二区三区四区视频| 丁香六月天网| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 午夜激情av网站| 免费黄频网站在线观看国产| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 97超视频在线观看视频| 国产精品久久久久成人av| 午夜福利视频在线观看免费| 国产av精品麻豆| 欧美精品国产亚洲| 国产日韩欧美视频二区| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 亚洲美女视频黄频| 亚洲综合精品二区| 午夜免费观看性视频| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 午夜精品国产一区二区电影| .国产精品久久| 各种免费的搞黄视频| 老司机影院成人| 亚洲欧美成人精品一区二区| 中文欧美无线码| 91久久精品国产一区二区成人| 高清在线视频一区二区三区| 寂寞人妻少妇视频99o| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 美女视频免费永久观看网站| 亚洲成人av在线免费| 大片电影免费在线观看免费| 国产精品99久久99久久久不卡 | 欧美成人精品欧美一级黄| 在线精品无人区一区二区三| 久久久久精品久久久久真实原创| 国产免费视频播放在线视频| 日本91视频免费播放| 亚洲精品日韩在线中文字幕| a级毛片免费高清观看在线播放| a 毛片基地| 国产毛片在线视频| 亚洲国产精品专区欧美| 午夜激情av网站| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 欧美另类一区| 国产精品一二三区在线看| 国产一区二区三区综合在线观看 | 亚洲精品aⅴ在线观看| 久久影院123| 老女人水多毛片| 伊人亚洲综合成人网| 国产精品免费大片| 三级国产精品片| 色94色欧美一区二区| 国产男人的电影天堂91| 免费日韩欧美在线观看| h视频一区二区三区| 日韩一本色道免费dvd| 免费大片18禁| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲av成人精品一二三区| 啦啦啦啦在线视频资源| 亚洲在久久综合| 精品一区二区免费观看| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲中文av在线| 女人精品久久久久毛片| 日韩一区二区三区影片| 免费av不卡在线播放| 成人漫画全彩无遮挡| 91成人精品电影| 2022亚洲国产成人精品| 亚洲高清免费不卡视频| 成人午夜精彩视频在线观看| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 春色校园在线视频观看| 久久毛片免费看一区二区三区| 国产成人91sexporn| 久久精品国产亚洲网站| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产精品免费大片| 少妇人妻精品综合一区二区| 春色校园在线视频观看| 国产毛片在线视频| 最近最新中文字幕免费大全7| 麻豆乱淫一区二区| 人体艺术视频欧美日本| 成人影院久久| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 一本久久精品| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 欧美激情国产日韩精品一区| 国产亚洲欧美精品永久| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 亚洲av欧美aⅴ国产| 男男h啪啪无遮挡| kizo精华| 97超视频在线观看视频| 欧美 日韩 精品 国产| 人成视频在线观看免费观看| 久久韩国三级中文字幕| 91精品三级在线观看| xxx大片免费视频| 亚洲精品国产av蜜桃| 两个人的视频大全免费| 日日爽夜夜爽网站| 久热这里只有精品99| 女人精品久久久久毛片| 青春草国产在线视频| av.在线天堂| 日本av手机在线免费观看| 成年女人在线观看亚洲视频| 女人精品久久久久毛片| 免费黄色在线免费观看| 女人久久www免费人成看片| 在线观看国产h片| 国产成人精品一,二区| 久久久久精品久久久久真实原创| 在线免费观看不下载黄p国产| 色网站视频免费| 精品少妇久久久久久888优播| 99久久精品一区二区三区| 美女国产视频在线观看| 亚洲精品456在线播放app| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 国产精品久久久久成人av| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产精品三级大全| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 欧美日韩成人在线一区二区| 免费观看的影片在线观看| 国产一区二区三区综合在线观看 | 国产精品 国内视频| 嫩草影院入口| 伦精品一区二区三区| 国产精品欧美亚洲77777| 十八禁高潮呻吟视频| 国产黄频视频在线观看| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲中文av在线| 欧美性感艳星| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 日本av免费视频播放| 精品一区二区三区视频在线| 99精国产麻豆久久婷婷| av国产精品久久久久影院| 午夜免费观看性视频| 99热网站在线观看| 欧美丝袜亚洲另类| 伊人亚洲综合成人网| 精品卡一卡二卡四卡免费| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 五月开心婷婷网| 天堂8中文在线网| 考比视频在线观看| 国产精品人妻久久久影院| 老熟女久久久| 日韩中字成人| 婷婷色av中文字幕| 亚洲精品视频女| 老司机影院成人| 人体艺术视频欧美日本| 亚洲色图综合在线观看| 欧美激情 高清一区二区三区| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产日韩欧美亚洲二区| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | freevideosex欧美| 最近手机中文字幕大全| 日本黄色日本黄色录像| 免费av中文字幕在线| 十八禁高潮呻吟视频| 在线观看免费日韩欧美大片 | 一级毛片aaaaaa免费看小| 精品国产一区二区久久| 亚洲精品成人av观看孕妇| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 国产高清国产精品国产三级| 亚洲三级黄色毛片| 99热网站在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲av日韩在线播放| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲久久久国产精品| 欧美另类一区| av在线老鸭窝| 极品人妻少妇av视频| 久久精品久久久久久久性| 成人亚洲精品一区在线观看| 制服人妻中文乱码| 少妇的逼水好多| 在线观看三级黄色| 极品少妇高潮喷水抽搐| 看非洲黑人一级黄片| 亚洲精品成人av观看孕妇| av在线观看视频网站免费| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 永久网站在线| 亚洲精品日本国产第一区| 精品酒店卫生间| 国产视频首页在线观看| 精品久久久噜噜| 日本wwww免费看| 十八禁高潮呻吟视频| 最新中文字幕久久久久| 免费黄色在线免费观看| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 午夜福利视频精品| 亚洲在久久综合| 在线观看国产h片| 成人综合一区亚洲| 日日撸夜夜添| 飞空精品影院首页| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲国产精品成人久久小说| 人体艺术视频欧美日本| 久久国内精品自在自线图片| 亚洲欧美精品自产自拍| 美女内射精品一级片tv| 蜜桃在线观看..| 2018国产大陆天天弄谢| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 女的被弄到高潮叫床怎么办| 欧美日韩在线观看h| 欧美丝袜亚洲另类| 视频在线观看一区二区三区| 国产 精品1| 国产成人精品久久久久久| 午夜老司机福利剧场| 九草在线视频观看| 黄片播放在线免费| 欧美激情 高清一区二区三区| 精品久久久久久久久av| 涩涩av久久男人的天堂| 久久久久久久久大av| 丝瓜视频免费看黄片| 美女主播在线视频| 亚洲精品中文字幕在线视频| 一区在线观看完整版| 一边摸一边做爽爽视频免费| 亚洲精品日韩在线中文字幕|