液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測雞蛋中磺胺類藥物的應(yīng)用研究

楊嘉琪

廣東省惠州市質(zhì)量計量監(jiān)督檢測所 廣東惠州 516003

磺胺類藥物（SAs）通常應(yīng)用于防治雞內(nèi)球蟲病、肝炎、白痢等疾病，但因為SAs 在動物體內(nèi)存在的時間比較長，若服藥不當(dāng)會造成雞蛋中SAs 的藥物殘留，直接影響到人類的健康。近年來，我國逐漸加強(qiáng)了對動源食品中這類藥物殘留的監(jiān)控，該抗生素在被畜禽動物食用后，會在其腎臟、雞蛋中發(fā)現(xiàn)殘留，通過建立雞蛋中抗生素殘留的檢測方法，能有效提升家禽動物食品質(zhì)量的控制水平。當(dāng)前，國內(nèi)外對動物源性食品中磺胺類藥物殘留的檢測方法有氣相色譜法、微生物法及高效液相色譜法等。雞蛋作為生活必需品，研究報道主要應(yīng)用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行檢測，其穩(wěn)定性強(qiáng)，能滿足雞蛋中磺胺類藥物殘留的檢測標(biāo)準(zhǔn)。

1 實驗部分

1.1 試劑與耗材

磺胺乙酰、磺胺噻唑、磺胺甲惡唑、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、

磺胺二惡唑、磺胺嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺甲氧噠嗪、磺胺吡啶、磺胺地索辛、磺胺喹惡啉，德國DR.E 公司。甲醇、乙腈、甲酸等，為色譜純（國藥）。應(yīng)用甲醛把標(biāo)準(zhǔn)品配制單標(biāo)溶液，保存在-20℃的環(huán)境下。雞蛋經(jīng)液質(zhì)分析為陰性樣本[1]。

1.2 儀器設(shè)備

ACQUITYTM 型液相色譜儀、ACQUITY UPLC BEH C18 色譜柱（2.1mm×100mm，1.7μm），美國 Waters 公司；純水儀；氮吹儀；離心機(jī)。

1.3 試驗

1.3.1 樣品前處理方法

本實驗通過1%的甲酸乙酸提取空白雞蛋樣本，并進(jìn)行溶劑優(yōu)化試驗；對渦旋震蕩提取、渦旋振蕩+超聲配合提取進(jìn)行對比，對比加入10g 無水硫酸鈉對結(jié)果的影響，最終確定最佳的前處理條件[2]。

1.3.2 樣品后處理方法

選擇2g 樣品，置于無水硫酸鈉10g、混合內(nèi)標(biāo)工作液100ng，12ml 的 甲 酸 乙 腈，超 聲 提 取10min；7000rpm 離 心5min，60℃水浴氮進(jìn)行凈化，并加入2ml 流動相復(fù)溶，取下層溶液0.222μm 濾膜上機(jī)檢測。

1.3.3 液相條件

色譜柱：A cquity UPLC BEH C18（100mm×2.1mm，1.7μm）；2mmol 乙酸銨 -0.1% 甲酸（流動相 A）；乙腈（流動相B）。

1.3.4 質(zhì)譜條件

毛細(xì)管電壓1.2kv；RF 透鏡電壓：50V；脫溶劑溫度：600℃；電離子模式：ES+；碰撞氣流速：0.15mL/min；錐孔氣流速：150L/h；各種藥物優(yōu)化母離子和子離子及對應(yīng)聚焦電壓和碰撞電壓值，如表1 所示。

1.3.5 方法線性和靈敏度試驗

試驗應(yīng)用空白雞蛋樣品，用1.32 方法處理，在1.0-50μg/kg濃度范圍內(nèi)添加不同梯度磺胺類藥物混標(biāo)溶液，同時把處理好的空白雞蛋樣品稀釋至標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.6 方法的回收率試驗

實驗選取空白雞蛋液樣品，其濃度主要為2.0、10.0、25.0μg/kg 等不同水平的混標(biāo)溶液，根據(jù)方法開展回收試驗，應(yīng)用測定回收率及RSD 對方法的精準(zhǔn)度進(jìn)行評估。

表1 磺胺類藥物的監(jiān)測離子、保留時間及質(zhì)譜參數(shù)

2 結(jié)果與討論

本次研究結(jié)果顯示：在16 種磺胺類藥物的回收率介于75.51%-124.21%，RSD 介于0.07%-14.91%，表示該方法精密度與準(zhǔn)確度均能滿足雞蛋中磺胺類藥物的檢測標(biāo)準(zhǔn)。檢測準(zhǔn)確性在儀器檢測中至關(guān)重要，而前處理方法是儀器檢測中的重要環(huán)節(jié)。當(dāng)前我國尚未明確規(guī)定雞蛋中磺胺類藥物的殘留限度，通過對雞蛋樣品的實際檢測，得出該方法適用于檢測雞蛋樣品中磺胺類藥物的殘留量[3]。本文通過與優(yōu)化提取劑、提取方法等，創(chuàng)建了雞蛋中磺胺的UPLC-MS-MS 檢測方法。該方法的樣品經(jīng)過振蕩及超聲混合提取取得了顯著的凈化效果，并使用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜對其進(jìn)行檢測。這種方法具有極高的靈敏度、穩(wěn)定性，能滿足雞蛋中磺胺類藥物殘留的檢測要求，為禽蛋中磺胺類藥物檢測提供了有效參考。