宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變患者宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查及高危型人乳頭瘤病毒檢測(cè)的臨床價(jià)值

杜 禎, 陳錫山, 盛贈(zèng)美

(1. 湖南省長(zhǎng)沙市第三醫(yī)院 血液腫瘤科, 湖南 長(zhǎng)沙, 410000;2. 廣西柳州市工人醫(yī)院 腫瘤科, 廣西 柳州, 545005)

宮頸癌作為最常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤之一，多發(fā)于30～35歲患者，浸潤(rùn)癌的高發(fā)年齡為45～55歲。目前，宮頸癌在中國(guó)發(fā)病率較高，每年可造成約53 000名女性死亡。研究[1-3]發(fā)現(xiàn)，宮頸癌早期癥狀不典型，多數(shù)患者在婦科體檢時(shí)才被發(fā)現(xiàn)。隨著病情的不斷進(jìn)展，患者會(huì)出現(xiàn)陰道分泌物增多、陰道出血等表現(xiàn)。高危型人乳頭瘤病毒感染作為與宮頸癌密切相關(guān)的主要因素，定期進(jìn)行宮頸癌篩查可及早發(fā)現(xiàn)癌前期病變，預(yù)防宮頸癌的發(fā)生，從而最大限度地提高患者生存率[4-6]。宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查(TCT)以及高危型人乳頭瘤病毒(hrHPV)檢測(cè)是目前宮頸癌前病變以及宮頸癌的主要診斷手段，單獨(dú)診斷雖然具有一定的指導(dǎo)意義，但是應(yīng)用效果具有一定的局限性。本研究回顧性分析9例宮頸癌患者以及63例宮頸上皮內(nèi)瘤變患者的臨床資料，探討宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變患者TCT以及hrHPV檢測(cè)的臨床價(jià)值，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2017年5月—2019年5月收治的72例患者的臨床治療情況，包括9例宮頸癌患者及63例宮頸上皮內(nèi)瘤變患者。納入標(biāo)準(zhǔn): ① 患者均已婚，并且具有2年以上性生活史; ② 近3 d內(nèi)未進(jìn)行陰道沖洗，且未使用陰道內(nèi)藥物者; ③ 患者3 d內(nèi)未進(jìn)行性生活，且并未處于生理期; ④ 患者及家屬知情并簽署同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn): ① 患者曾行子宮頸切除術(shù)，具有盆腔放射治療史以及腫瘤病史; ② 嚴(yán)重肝、腎功能等重要臟器不全者; ③ 近3個(gè)月內(nèi)進(jìn)行過(guò)特殊婦科治療者; ④ 孕期及哺乳期患者?；颊吣挲g21～62歲，平均(38.6±5.8)歲; 孕次1～3次，平均(2.1±0.3)次; 產(chǎn)次1～3次，平均(1.9±0.4)次。本研究均在患者知情情況下進(jìn)行，并經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集: 采用無(wú)菌棉簽清潔患者宮頸外表面，然后采用宮頸刷插入患者宮頸外口鱗柱交界部位，逆時(shí)針?lè)较蛐D(zhuǎn)4～6圈，獲得分泌物標(biāo)本后置于無(wú)菌試管內(nèi)保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 hrHPV檢測(cè): 采用熒光定量PCR法進(jìn)行檢測(cè)。采用2對(duì)特異性引物和2條特異性熒光探針配以PCR反應(yīng)液、耐熱DNA聚合酶、核苷酸單體等成分，熒光PCR體外擴(kuò)增法定量檢測(cè)hrHPV。試劑盒以及熒光定量PCR儀購(gòu)自杭州迪安生物技術(shù)有限公司，所有操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)執(zhí)行。具體操作如下: ① 向采樣試管中加入1 mL滅菌生理鹽水后充分震蕩混勻; ② 吸取1.5 mL待測(cè)液體置于離心管, 3 500轉(zhuǎn)/min離心5 min; ③ 取沉淀物加入滅菌生理鹽水1mL震蕩混勻, 3 500轉(zhuǎn)/min離心5 min; ④ 取沉淀物并加入50 μL DNA提取液，混勻后置于100 ℃恒溫下處理10 min, 處理好后置于4 ℃環(huán)境中靜置10 min; ⑤ 取沉淀物3 500轉(zhuǎn)/min離心5 min, 取沉淀物置于4 ℃環(huán)境中保存?zhèn)溆? ⑥ 擴(kuò)增條件: 93 ℃預(yù)處理2 min、93 ℃環(huán)境下處理45 s、55 ℃環(huán)境下處理1 min, 重復(fù)10個(gè)循環(huán)后, 93 ℃環(huán)境下處理30 s、55 ℃環(huán)境下處理45 s, 重復(fù)30個(gè)循環(huán)，待所有反應(yīng)結(jié)束后，由計(jì)算機(jī)自動(dòng)分析結(jié)果。

1.2.3 TCT檢測(cè): 采用杭州迪安生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的細(xì)胞保存液進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢查。婦科醫(yī)師于患者宮頸處取材，由2名高年資病理科醫(yī)師閱片。采用TBS系統(tǒng)對(duì)結(jié)果進(jìn)行診斷，診斷結(jié)果包括: 正常范圍(WNL)、意義不明不典型鱗狀細(xì)胞(ASCUS)、不典型腺上皮細(xì)胞(AGCUS)、鱗狀上皮內(nèi)病變(SIL)、高度鱗狀上皮內(nèi)病變(HSIL)，ASCUS及以上病變均為陽(yáng)性。

1.3 觀察指標(biāo)

將宮頸活檢病理檢查結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)中的Ⅰ級(jí)為低級(jí)別CIN, CINⅡ級(jí)及以上為高級(jí)別CIN。hrHPV檢測(cè)結(jié)果為5×102基因拷貝數(shù)以下說(shuō)明患者體內(nèi)不存在hrHPV, hrHPV檢測(cè)結(jié)果為5×102基因拷貝數(shù)以上說(shuō)明患者體內(nèi)存在hrHPV。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以[n(%)]表示，采用χ2檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同組織學(xué)分級(jí)的細(xì)胞學(xué)情況

結(jié)果顯示, 72例患者進(jìn)行TCT檢測(cè)后，檢測(cè)結(jié)果正常者42例(58.3%), 檢測(cè)結(jié)果異常者30例(41.7%)。病理標(biāo)本檢查結(jié)果表明，宮頸上皮內(nèi)瘤變(低級(jí)別及高級(jí)別)患者為43例; TCT檢測(cè)與病理學(xué)檢查結(jié)果的符合率在宮頸上皮內(nèi)瘤變中為 44.2%(19/43), TCT檢測(cè)與病理學(xué)檢查結(jié)果的符合率在宮頸癌中為72.7%(8/11), 見(jiàn)表1。

2.2 hrHPV在不同宮頸病變中的分布情況

對(duì)72例患者進(jìn)行hrHPV檢測(cè)，結(jié)果陽(yáng)性患者52例(72.2%), 陰性20例(27.8%), 其中hrHPV檢測(cè)與病理學(xué)檢查結(jié)果的符合率在宮頸上皮內(nèi)瘤變中為86.0%(37/43), TCT檢測(cè)與病理學(xué)檢查結(jié)果的符合率在宮頸癌中為90.9%(10/11), 見(jiàn)表2。

表1 2組患者不同組織學(xué)分級(jí)的細(xì)胞學(xué)情況[n(%)]

表2 hrHPV在不同宮頸病變中的分布情況[n(%)]

2.3 不同檢測(cè)方法的靈敏度和特異性比較

72例患者進(jìn)行TCT及hrHPV檢測(cè)后結(jié)果顯示, 2者聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度為94.4%, 診斷符合率為90.3%, 均顯著高于TCT及hrHPV單一檢測(cè)方式，見(jiàn)表3。

表3 不同檢測(cè)方法的靈敏度和特異性比較[n(%)]

3 討 論

宮頸疾病包括宮頸區(qū)域內(nèi)發(fā)生的各種病變，包括炎癥、腫瘤、損傷以及各種癌前病變等，是女性最常見(jiàn)的疾病[7-8]。近年來(lái)，研究[9-11]發(fā)現(xiàn)病原體感染、醫(yī)源性損傷、免疫缺陷性疾病以及宮頸解剖結(jié)構(gòu)異常等是宮頸疾病發(fā)生的主要因素，并且患者早期病變多以良性為主，不會(huì)對(duì)患者生活以及身體健康造成較為嚴(yán)重的影響。若患者得不到積極有效的治療，最終易發(fā)展為惡性腫瘤，導(dǎo)致病死率升高。因此，全面有效的疾病篩查并實(shí)施介入治療對(duì)于提高患者生活質(zhì)量有重要意義[12-14]。

目前，臨床上宮頸疾病篩查手段較多，但是篩查結(jié)果極易受到外界因素以及患者自身因素的影響，導(dǎo)致不同程度的漏診和誤診。研究[15-17]發(fā)現(xiàn), HPV感染是誘發(fā)宮頸病變的重要因素，持續(xù)性的HPV感染極易導(dǎo)致患者進(jìn)展為宮頸癌，因此HPV檢測(cè)對(duì)于患者疾病診斷有重要意義。TCT是通過(guò)液基薄層細(xì)胞學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)宮頸細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞學(xué)分類診斷的一種手法，不僅對(duì)癌變細(xì)胞的檢出率較高，而且對(duì)于微生物感染以及癌前病變也具有一定的診斷價(jià)值[18-19]。但是TCT受主觀影響較大，不同細(xì)胞學(xué)醫(yī)生讀片結(jié)果可能存在差異，因此單一檢測(cè)手段往往達(dá)不到預(yù)期診斷效果，而采用TCT聯(lián)合hrHPV診斷能夠有效提高確診率，減少漏診和誤診的發(fā)生[20]。

本研究結(jié)果顯示, 72例患者進(jìn)行TCT檢測(cè)后顯示，患者檢測(cè)結(jié)果正常者為42例(58.3%), 檢測(cè)結(jié)果異常者為30例(41.7%), 其中TCT檢測(cè)與病理學(xué)檢查結(jié)果的符合率在宮頸上皮內(nèi)瘤變中為44.2%, TCT檢測(cè)與病理學(xué)檢查結(jié)果的符合率在宮頸癌中為72.7%。72例患者進(jìn)行hrHPV檢測(cè)后顯示，陽(yáng)性患者為72例(72.2%), 陰性為20例(27.8%), 其中hrHPV檢測(cè)與病理學(xué)檢查結(jié)果的符合率在宮頸上皮內(nèi)瘤變中為86.0%, TCT檢測(cè)與病理學(xué)檢查結(jié)果的符合率在宮頸癌中為90.9%。上述結(jié)果說(shuō)明了TCT與hrHPV在篩查宮頸癌以及宮頸上皮內(nèi)瘤變時(shí)均有陽(yáng)性人群，并且HPV檢出陽(yáng)性率較高，可作為宮頸癌以及宮頸上皮內(nèi)瘤變的臨床診斷指標(biāo)，但是hrHPV檢測(cè)靈敏度高，特異度較低[21-23]。因此，在行TCT檢測(cè)的基礎(chǔ)上聯(lián)合hrHPV檢測(cè)，既是對(duì)hrHPV檢測(cè)結(jié)果的驗(yàn)證，又能夠較好地篩查高危人群，并且聯(lián)合檢測(cè)還能提高檢測(cè)靈敏度，降低漏診率[24-25]。

綜上所述, TCT、hrHPV聯(lián)合檢測(cè)有助于提高宮頸癌以及宮頸上皮內(nèi)瘤變患者的檢出率。