SERPINH1在結(jié)腸腺癌中的表達(dá)及臨床意義

宋佳星,王 曌

(吉林大學(xué)第一醫(yī)院 檢驗(yàn)科，吉林 長(zhǎng)春130021)

結(jié)直腸癌(CRC)是全世界較為常見的癌癥和癌癥死亡原因。在診斷時(shí)，男性和女性患者患結(jié)腸癌的中位年齡分別為68歲和72歲，而直腸癌患者的中位年齡均為63歲[1]。流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，2008年至2016年期間，CRC發(fā)病率每年增加6%[2,3]。確診后五年的總生存率(OS)約為60%[1,4]。盡管在疾病的治療上我們?nèi)〉昧艘恍┻M(jìn)展，但轉(zhuǎn)移性CRC表現(xiàn)出不良的預(yù)后，并且在現(xiàn)有技術(shù)水平下，僅有14%的患者在診斷后5年內(nèi)存活[1,4]。因此，發(fā)現(xiàn)一個(gè)可以輔助判斷結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移及預(yù)后的指標(biāo)對(duì)于改善患者的生存率具有一定的現(xiàn)實(shí)意義。本研究通過TCGA數(shù)據(jù)庫檢索，獲取差異表達(dá)基因SERPINH1，通過免疫印跡驗(yàn)證其差異表達(dá)水平，同時(shí)分析其表達(dá)水平與結(jié)腸腺癌腫瘤轉(zhuǎn)移與預(yù)后之間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象將手術(shù)中切取的新鮮腫瘤組織、正常組織收集于無菌容器內(nèi)，PBS沖洗處理，液氮速凍。

1.2 方法通過TCGA數(shù)據(jù)庫檢索，獲取差異表達(dá)基因SERPINH1，免疫印跡方法驗(yàn)證其差異表達(dá)情況，免疫組化觀察其表達(dá)水平與結(jié)腸腺癌腫瘤轉(zhuǎn)移與預(yù)后之間的關(guān)系。

1.3 主要試劑中性樹膠，蛋白定量試劑盒，無水乙醇，蛋白抽提試劑盒，DAB 試劑盒，二甲苯。

2 結(jié) 果

2.1 TCGA數(shù)據(jù)庫檢索差異表達(dá)基因SERPINH1

通過在線數(shù)據(jù)庫UALCAN，檢索TCGA數(shù)據(jù)庫中結(jié)腸腺癌基因表達(dá)譜，搜索SERPINH1基因在結(jié)腸腺癌以及癌旁組織中的轉(zhuǎn)錄水平存在差異。如圖1所示。

圖1 TCGA數(shù)據(jù)庫檢索差異表達(dá)基因SERPINH1

2.2 SERPINH1在結(jié)腸腺癌組織與癌旁組織表達(dá)水平的比較

通過免疫印跡法，觀察結(jié)腸腺癌以及癌旁組織中SERPINH1 的表達(dá)水平，SERPINH1在結(jié)腸腺癌的腫瘤組織的表達(dá)水平顯著高于配對(duì)的癌旁組織，見圖2。

A:結(jié)腸腺癌組織；B：結(jié)腸腺癌癌旁組織

2.3 SERPINH1在結(jié)腸腺癌組織與癌旁組織的表達(dá)意義

通過免疫組化法，我們觀察到SERPINH1的表達(dá)，如圖3。分析本研究收集的50例組織樣本，發(fā)現(xiàn)SERPINH1的高表達(dá)與腫瘤的轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05),見表1。

3 討論

結(jié)腸直腸癌作為全世界較為常見癌癥同時(shí)也是導(dǎo)致癌癥死亡的比較常見的原因[5]，手術(shù)切除是CRC的唯一治療方法，特別是對(duì)于局限性腫瘤的患者。治愈性手術(shù)切除通常涉及所有可能受影響的淋巴結(jié)(LN)的初步、標(biāo)準(zhǔn)化和系統(tǒng)性解剖，以確定腸切除的程度。最近的一項(xiàng)meta分析揭示了原發(fā)性CRC的組織病理學(xué)特征，可以預(yù)測(cè)LN轉(zhuǎn)移，并分類如下(按重要性降序排列)：淋巴侵襲，腫瘤深度，腫瘤分化差和腫瘤出芽[6]。然而，這是通過對(duì)手術(shù)后切除的腫瘤標(biāo)本的蘇木精和伊紅染色來確定的。因此，開發(fā)用于準(zhǔn)確檢測(cè)術(shù)前LN轉(zhuǎn)移情況的檢測(cè)方法對(duì)于判斷使用例如微創(chuàng)手術(shù)或新輔助化療等方式是重要的。

圖3 SERPINH1在結(jié)腸腺癌及癌旁正常組織中的陰性表達(dá)(×200)

表1 SERPINH1在結(jié)腸腺癌表達(dá)水平與腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)系

HSP47是染色體11q13.5上的由SERPINH1編碼的產(chǎn)物，同時(shí)也是細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的組分，在人類常見的癌癥中上調(diào)表達(dá)[7]。在應(yīng)激條件下，HSP47在細(xì)胞表面上的表達(dá)表明HSP47在腫瘤發(fā)生和隨后的腫瘤進(jìn)展時(shí)期可以調(diào)節(jié)細(xì)胞遷移，表現(xiàn)為腫瘤向周圍組織的侵襲和轉(zhuǎn)移。臨床上，與正常組織相比，HSP47在肺癌，膠質(zhì)瘤，食管鱗狀細(xì)胞癌和潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)腫瘤中的表達(dá)增加[7-12]，并且一些研究報(bào)道了HSP47的表達(dá)在惡性疾病中與預(yù)后相關(guān)[10,13,14]。

在本研究中，我們使用生物信息學(xué)方法觀察SERPINH1基因在結(jié)腸腺癌中的差異表達(dá)；然后，我們使用免疫印記方法，驗(yàn)證其產(chǎn)物HSP47在結(jié)腸腺癌腫瘤組織中的表達(dá)。為了進(jìn)一步確定HSP47的差異表達(dá)，我們接下來使用免疫組織化學(xué)方法來確定它們?cè)贑RC組織和鄰近的正常結(jié)腸黏膜中的表達(dá)水平。研究顯示，結(jié)腸腺癌組織中HSP47的高表達(dá)與腫瘤的轉(zhuǎn)移相關(guān)。