云南蘿芙木的生物堿成分

何祖亮，林銘洺，陳業(yè)高

（云南師范大學(xué) 化學(xué)化工學(xué)院，云南 昆明 650500）

云南蘿芙木（Rauvolfia yunnanensis Tsiang）是夾竹桃科蘿芙木屬的灌木，主要分布于我國云南、貴州、廣西等西南省區(qū)，生長于海拔900～1300 m的山地灌木叢中或山地密林蔭處及溪旁濕潤肥沃地方。在中國民間，主要以根部入藥，可以治療疥癬，其根部含有的生物堿有降血壓作用[1]。國內(nèi)外學(xué)者對云南蘿芙木的研究表明，云南蘿芙木中含有大量的單萜吲哚生物堿成分及其他類型生物堿和非生物堿[2-7]。這些成分的藥理活性主要表現(xiàn)為抗腫瘤、降血壓、抗心律失常、抗炎、鎮(zhèn)靜和抗瘙癢等作用[8-13]。為了進(jìn)一步了解云南蘿芙木中的生物堿成分，從中尋找新的具有良好活性的生物堿成分，本研究對云南西雙版納的云南蘿芙木進(jìn)行分離純化，得到5 個生物堿（圖1），利用波譜分析鑒定結(jié)構(gòu)分別為strictamine (1)，10-hydroxystrictamine (2)，nortertraphyllicine(3)，raucaffrinoline(4)and venoterpine(5)。

1 實(shí)驗(yàn)儀器、試劑與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

超導(dǎo)核磁共振儀DRX 500 MHz，瑞士布魯克公司；EYELA ROTARY EVAPORATOR N-1001，東京理化器械獨(dú)資工廠；ZF-2型三用紫外儀，上海安亭電子儀器廠。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

層析硅膠，青島海洋化工廠；SephadexLH-20凝膠，GE Healthcare Bio-Sciences AB；高效薄層層析硅膠板GF25，煙臺化工研究院；顯色劑為改良碘化鉍鉀溶液，所用溶劑均為工業(yè)純；其他為分析純或化學(xué)純試劑。

圖1 云南蘿芙木中的生物堿Figure 1 Alkaoloids isolated from R.yunnanensis

1.3 實(shí)驗(yàn)材料

云南蘿芙木枝葉由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物開發(fā)研究所云南分所彭朝中老師于云南西雙版納采集，并鑒定為Rauvolfia yunnanensis Tsiang。

2 化合物的提取與分離

云南蘿芙木枝葉部分（25.8 kg）晾干后粉碎，用甲醇（50 L）于室溫下浸泡提取5次，將得到提取液合并，進(jìn)行減壓蒸餾，得到甲醇粗提物（3.21 kg）。甲醇提取物用飽和酒石酸溶液進(jìn)行充分溶解，并將混合液的pH調(diào)節(jié)至2，用乙酸乙酯對混合液反復(fù)萃取，得到乙酸乙酯萃取部分，再向水溶液部分加入濃氨水，將水溶液的pH調(diào)節(jié)至10，以氯仿多次萃取，得到氯仿部分（主要為生物堿）73.6 g，將得到的73.6 g粗堿用硅膠（80～100目）進(jìn)行拌樣，進(jìn)行硅膠柱層析，以V氯仿∶V甲醇=0∶1～1∶0進(jìn)行梯度洗脫，經(jīng)合并后得到A、B、C三個部分，利用硅膠柱層析和Sephadex LH-20 凝膠柱層析對A 和B 部分進(jìn)行反復(fù)分離純化得到strictamine（1，8.7 mg），10-hydroxystrictamine（2，10.2 mg），nortertraphyllicine（3，13.0 mg），raucaffrinoline（4，8.4 mg）和venoterpine（5，20.9 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：淡黃色無定型固體，MF:C20H22N2O2，MW:322，1H NMR(CD3OD，500 MHz):δ 7.50(1H，d，J=7.8 Hz，H-9)，7.37(1H，d，J=7.4 Hz，H-12)，7.31(1H，t，J=7.8 Hz，H-10)，7.16(1H，t，J=7.4 Hz，H-11)，5.53(1H，q，J=6.4 Hz，H-19)，4.53(1H，d，J=5.1 Hz，H-3)，4.12(1H，d，J=16.6 Hz，H-21b)，3.68(3H，s，17-OCH3)，3.62 (1H，s，H-15)，3.63 (1H，m，H-6b)，3.20 (1H，d，J = 16.7 Hz，H-21a)，2.77 (1H，dd，J=14.2，5.7 Hz，H-5b)，2.74(1H，m，H-5a)，2.46(1H，td，J=14.4，5.2 Hz，H-14b)，2.09(1H，d，J=2.6 Hz，H-16)，1.90 (1H，dd，J = 14.9，5.0 Hz，H-6a)，1.74 (1H，d，J = 14.2 Hz，H-14a)，1.52 (3H，d，J =9.0 Hz，H-18).13C NMR (CD3OD，125 MHz): δ 191.7 (s，C-2)，172.8 (s，C=O)，155.6 (s，C-13)，147.3 (s，C-8)，137.6 (s，C-20)，129.5 (d，C-19)，127.3 (d，C-9)，124.6 (d，C-10)，122.2 (d，C-11)，121.6 (d，C-12)，57.3(s，C-7)，56.3(t，C-21)，56.2(d，C-3)，53.9(d，C-16)，52.5(t，C-5)，52.3(q，17-OCH3)，36.5(t，C-6)，33.6(t，C-14)，33.4(d，C-15)，13.4(q，C-18)。與文獻(xiàn)報道的strictamine 的1H NMR 和13C NMR 數(shù)據(jù)基本一致，因此化合物1確定為strictamine[3]。

化合物2：白色粉末狀固體，MF:C20H22N2O3，MW:338;1H NMR(CDCl3，500 MHz):δ 7.24(1H，d，J=8.1 Hz，H-12)，7.12 (1H，d，J = 2.2 Hz，H-9)，6.63 (1H，dd，J = 8.1，2.2 Hz，H-11)，5.52 (1H，q，J = 7.0 Hz，H-19)，4.71(1H，d，J=5.1 Hz，H-3)，4.04(1H，d，J=16.9 Hz，H-21b)，3.71(3H，s，17-OCH3)，3.66(1H，td，J=14.5，5.9 Hz，H-6b)，3.49(1H，s，H-15)，3.11(1H，d，J=16.9 Hz，H-21a)，2.70(1H，dd，J=14.2，5.6 Hz，H-14b)，2.68(1H，m，H-5b)，2.61(1H，m，H-5a)，2.07(1H，d，J=3.8 Hz，H-16)，1.99(1H，m，H-6a)，1.73 (1H，d，J = 14.2 Hz，H-14a)，1.54 (3H，d，J = 7.0 Hz，H-18).13C NMR (CDCl3，125 MHz): δ 192.5(s，C-2)，171.7 (s，C-17)，156.9 (s，C-10)，156.6 (s，C-13)，137.9 (s，C-8)，137.8 (s，C-20)，124.0 (d，C-12)，120.2(d，C-19)，112.7(d，C-9)，108.5(d，C-11)，55.8(d，C-16)，55.6(s，C-7)，55.0(d，C-3)，53.6(t，C-21)，51.9(q，10-OCH3)，51.7(t，C-5)，36.1(t，C-14)，33.8(t，C-6)，32.4(d，C-5)，13.1(q，C-18)。與文獻(xiàn)報道的10-hydroxystrictamine 的1H NMR 和13C NMR 數(shù)據(jù)基本一致，因此化合物2 確定為10-hydroxystrictamine[3]。

化合物3：白色固體，MF:C19H22N2O，MW:294;1H NMR(CD3OD，500 MHz):δ 7.46(1H，d，J=7.5 Hz，H-9)，7.03 (1H，t，J = 8.0 Hz，H-11)，6.87 (1H，t，J = 7.5 Hz，H-10)，6.68 (1H，d，J = 8.0 Hz，H-12)，5.41(1H，q，J=6.8 Hz，H-19)，4.42(lH，s，H-17)，3.64(1H，d，J=15.1 Hz，H-2)，3.59(1H，d，J=9.3 Hz，H-3)，3.51(1H，d，J=15.2 Hz，H-21b)，3.38(1H，s，H-21a)，3.26(1H，s，H-15)，3.25(1H，t，J=6.2 Hz，H-5)，2.30 (1H，t，J = 6.2 Hz，H-6b)，2.12 (1H，d，J = 12.5 Hz，H-16)，1.98 (1H，d，J = 5.1 Hz，H-6a)，1.97(1H，m，H-14b)，1.93(1H，m，H-14a)，1.72(3H，d，J=6.8 Hz，H-18).13C NMR(CD3OD，125 MHz):δ 152.9(s，C-13)，136.9 (s，C-20)，134.1 (s，C-8)，128.2 (d，C-11)，124.6 (d，C-9)，120.3 (d，C-10)，117.7 (d，C-19)，111.8(d，C-12)，77.2(d，C-17)，72.9(d，C-2)，58.1(s，C-7)，56.9(d，C-5)，55.2(t，C-21)，54.4(d，C-16)，52.9 (d，C-3)，34.4 (t，C-6)，29.5 (t，C-14)，28.8 (d，C-15)，12.9 (q，C-18)。與文獻(xiàn)報道的nortertraphyllicine的1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)基本一致，因此化合物3確定為nortertraphyllicine[14]。

化合物4：淡黃色油狀物，MF: C21H24N2O3，MW: 352;1H NMR (CD3OD，500 MHz): δ 7.53 (1H，d，J = 7.6 Hz，H-12)，7.51(1H，d，J=8.2 Hz，H-9)，7.38(1H，d，J=7.6 Hz，H-11)，7.24(1H，t，J=8.2 Hz，H-10)，5.12(1H，s，H-17)，4.11(1H，d，J=9.4 Hz，H-3)，3.86(1H，m，H-21b)，3.67(1H，m，H-5)，2.99(1H，m，H-21a)，2.89(2H，dd，J=12.3，5.1 Hz，H-6)，2.66(1H，dd，J=14.1，6.4 Hz，H-19)，2.55(1H，d，J=5.2 Hz，H-15)，2.43(1H，m，H-16)，2.13(3H，d，J=2.2 Hz，17-COCH3)，1.89(2H，d，J=5.1 Hz，H-14)，1.56(1H，m，H-20)，1.55 (3H，d J = 6.4，Hz，H-18).13C NMR (CD3OD，125 MHz): δ 183.4 (s，C-2)，170.2 (s，C=O)，155.2(s，C-13)，128.5(s，C-8)，125.9(d，C-11)，123.9(d，C-10)，123.3(d，C-9)，120.0(d，C-12)，77.5(d，C-17)，64.9(s，C-7)，60.2(t，C-21)，56.8(d，C-3)，53.2(d，C-19)，52.8(d，C-5)，48.9(d，C-16)，45.0(d，C-20)，36.5 (t，C-6)，26.2 (d，C-15)，20.5 (t，C-14)，19.5 (q，COCH3)，16.3 (q，C-18)。與文獻(xiàn)報道的raucaffrinoline的1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)基本一致，因此化合物4確定為raucaffrinoline[15]。

化合物5：淡黃色塊狀晶體，MF: C9H11NO，MW: 149；1H NMR (CD3OD，500 MHz): δ 8.20 (1H，s，H-1)，8.17(1H，d，J=4.8 Hz，H-9)，7.20(1H，d，J=4.8 Hz，H-8)，4.40(1H，s，H-5)，3.21(1H，d，J=19.5 Hz，H-3)，3.02(1H，dd，J=17.0，4.7 Hz，H-6b)，2.79(1H，d，J=17.0 Hz，H-6a)，1.23(3H，d，J=7.2 Hz，H-4).13C NMR(CD3OD，125MHz):δ 153.6(s，C-2)，147.7(d，C-1)，145.1(d，C-9)，144.2(s，C-7)，121.9(d，C-8)，75.8 (d，C-5)，43.9 (d，C-3)，41.5 (t，C-6)，12.4 (q，C-4)。與文獻(xiàn)報道的venoterpine 的1H NMR 和13C NMR數(shù)據(jù)基本一致，因此化合物5確定為venoterpine[16]。

4 結(jié)論

對云南蘿芙木的甲醇浸提物的氯仿萃取部分的生物堿成分進(jìn)行了研究，從中分離得到5個生物堿，包括4 個單萜吲哚生物堿和1 個簡單生物堿，分別為：strictamine(1)，10-hydroxystrictamine(2)，nortertraphyllicine(3)，raucaffrinoline(4)和venoterpine(5)。