活血潤(rùn)腸軟膠囊揮發(fā)油的提取工藝優(yōu)化及氣相色譜質(zhì)譜分析

牛向偉 ，姜莉莉 ，周國(guó)忠 ，張 寧

（1.頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司，河北 承德 067000； 2.河北省中藥新輔料技術(shù)創(chuàng)新中心，河北 承德 067000）

活血潤(rùn)腸軟膠囊由大黃、火麻仁、當(dāng)歸、桃仁、瓜簍子、防風(fēng)、羌活7味藥材組方，用于治療功能性便秘［1］。方中，當(dāng)歸、防風(fēng)、羌活為主藥，且這3味藥材中所含揮發(fā)性成分與該制劑的活血潤(rùn)腸功效密切相關(guān)。水蒸氣蒸餾法是將含有易揮發(fā)成分的藥材與水一同蒸餾，使揮發(fā)性成分隨同水蒸氣一起餾出，再經(jīng)過(guò)冷凝回流提取揮發(fā)性成分，是常用的中藥揮發(fā)油提取方法，適用于具有揮發(fā)性、能隨水蒸氣蒸餾而不被破壞其結(jié)構(gòu)、不與水發(fā)生反應(yīng)的揮發(fā)性成分的提取，且不使用有機(jī)溶劑，不易造成環(huán)境污染，適宜工業(yè)化生產(chǎn)。本研究中采用水蒸氣蒸餾法對(duì)這3味藥材的揮發(fā)性成分的提取工藝進(jìn)行研究，采用正交試驗(yàn)法確定其最佳提取條件，采用氣相色譜質(zhì)譜（GC-MS）法對(duì)所提揮發(fā)油進(jìn)行化學(xué)成分分析并鑒定?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

7000C＋7890B型氣相色譜質(zhì)譜儀（美國(guó)安捷倫公司，包括三重四極桿）；Agilent HP-5 MS石英毛細(xì)管色譜柱（30.0 m ×0.25 mm，0.25 μm，美國(guó)安捷倫公司）；ME204型電子天平（梅特勒-托利多公司，精度為萬(wàn)分之一）。

1.2 試藥

當(dāng)歸（北京市藥材公司，批號(hào)為160035），羌活（江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)為160141），防風(fēng)（赤峰榮興堂藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)為170113），均經(jīng)頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司王春民高級(jí)工程師鑒定為正品；正乙烷（分析純，天津歐博凱化工有限公司，批號(hào)為20170302）。

2 方法與結(jié)果

2.1 揮發(fā)油提取

按活血潤(rùn)腸軟膠囊處方工藝取當(dāng)歸、羌活、防風(fēng)3味藥材，粉碎成粗粉，混合。取混合粉適量，置圓底燒瓶中，加水適量，浸泡，連接揮發(fā)油測(cè)定器與回流冷凝管，置電熱套中加熱至沸，并保持微沸，收集揮發(fā)油，稱定質(zhì)量，計(jì)算揮發(fā)油提取率。采用GC-MS法對(duì)所得揮發(fā)油進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)其所含化學(xué)成分進(jìn)行分析和鑒定。

2.2 因素水平設(shè)計(jì)

分別以加水量（因素A）、浸泡時(shí)間（因素B）、提取時(shí)間（因素C）和加鹽量（因素D）為考察因素，以揮發(fā)油提取率為考察指標(biāo)，按L9（34）正交試驗(yàn)表進(jìn)行試驗(yàn)。因素水平見(jiàn)表1。

表1 因素水平表

2.3 試驗(yàn)方案與結(jié)果

試驗(yàn)方案與結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析結(jié)果見(jiàn)表3。可見(jiàn)，因素A、因素B、因素C、因素D對(duì)提取揮發(fā)油的提取率均無(wú)顯著影響。各因素對(duì)揮發(fā)油提取率的影響順序依次為因素B＞因素A＞因素C＞因素D，最佳提取工藝條件為 A1（或 A2）B2C2D1，即加 6（或 8）倍量水，浸泡1.5 h，提取4 h。按最佳提取工藝即加6倍量水，浸泡1.5 h，提取4 h，對(duì)3味藥材混合粉進(jìn)行提取，結(jié)果揮發(fā)油的提取率為0.34%。

2.4 揮發(fā)油的GC-MS檢測(cè)

色譜條件：程序升溫，初始溫度為50℃，保持2 min；以 1℃ ／min的速率升至 180℃，保持 5 min；以1℃ ／min的速率升至202℃；以2℃ ／min的速率升至250℃；以5℃ ／min的速率升至280℃。進(jìn)樣口溫度為 250℃；分流比為 10∶1；進(jìn)樣量為 1 μL；載氣為氦氣（≥99.999% ）；流速為 1 mL ／min。

表2 正交試驗(yàn)方案與結(jié)果

表3 方差分析結(jié)果

質(zhì)譜條件：EI離子源，電子能源70 eV，傳輸線溫度為250℃，離子源溫度為230℃，四極桿溫度為150℃，全掃描檢測(cè)方式，掃描范圍（m／z）20～550amu。

檢測(cè)法：將得到的揮發(fā)油進(jìn)行GC-MS法檢測(cè)，用面積歸一法確定其主要成分及相對(duì)含量。

結(jié)果分析：結(jié)果見(jiàn)表4?？梢?jiàn)，共檢測(cè)出244種成分，共鑒別出 50種主要成分。其中，1，4-雙（1-甲基乙基）-苯含量最高（含量為9.99%），其次依次為1R-α -蒎烯（8.148% ）、β -蒎烯（6.221% ）、醋酸呋喃酯（4.101%）、（R）-4-甲基-1-（1-甲基乙基）-3- 環(huán)己烯 -1- 醇（3.733% ）、檸檬烯（3.647% ）。

3 討論

采用GC-MS法對(duì)水蒸氣蒸餾法提取的羌活揮發(fā)油進(jìn)行計(jì)算機(jī)檢索，并與標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照［2-3］，共鑒定出136個(gè)成分（羌活78個(gè)成分、寬葉羌活58個(gè)成分），其中多數(shù)為單萜、單萜醇、倍半萜、倍半萜醇類化合物，含量在1%以上的有α-蒎烯、β-蒎烯、γ-松油烯、對(duì)一聚傘花素、檸檬烯、水芹烯、香檜烯、纈草萜烯醇等成分。當(dāng)歸揮發(fā)油［4］中含量最高的為藁本內(nèi)酯，其次為2-乙基-1-己醇、十三烷、9，12-十八烯酸單甘油酯、9，12-十八二烯酸乙酯、十七酸乙酯等。防風(fēng)揮發(fā)油［5-6］的主要成分為3-苯基-2-丙烯醛、亞油酸乙酯、9，12-十八二烯酸、芹菜腦、人參醇等。羌活、防風(fēng)藥對(duì)配伍后有新的活性成分產(chǎn)生［4］。經(jīng)與文獻(xiàn)［5-6］對(duì)比，正十六烷酸、金合歡烯、羅漢柏烯、3-蒈烯、α-蒎烯、β-蒎烯、α-水芹烯、檸檬烯等在單味藥材提取的揮發(fā)油中存在；而1-甲基-2（1H）-喹啉酮、γ-欖香烯、菖蒲酮、側(cè)柏酮等是單味藥材提取揮發(fā)油中所沒(méi)有的，提示藥材在混合提取時(shí)其所含成分間可能發(fā)生了氧化、聚合、異構(gòu)化等作用，這些新提取的化合物的藥理活性、功效等還有待進(jìn)一步研究。

本研究結(jié)果表明，水蒸氣蒸餾法提取3味藥材的揮發(fā)油提取率為0.34%，與超臨界二氧化碳萃取法提取揮發(fā)油的收率無(wú)優(yōu)勢(shì)。GC-MS法分析結(jié)果顯示，其成分種類也多于超臨界二氧化碳萃取法。因此，水蒸氣蒸餾法是否適宜于活血潤(rùn)腸軟膠囊的生產(chǎn)有待進(jìn)一步研究。

表4 揮發(fā)油化學(xué)成分GC-MS分析結(jié)果