華支睪吸蟲病診斷方法的研究進(jìn)展

王貝貝 吳婉君

【摘?要】華支睪吸蟲又稱肝吸蟲，成蟲寄生于人體的肝膽管內(nèi)，引起肝吸蟲病，可導(dǎo)致患者肝部損害，嚴(yán)重者可致原發(fā)性膽管癌?？梢姼挝x感染對(duì)人體的傷害很嚴(yán)重，但肝吸蟲在臨床上的檢出率低，因此擁有更好更為簡潔的方法檢測出肝吸蟲就變得極為迫切，現(xiàn)將目前檢測肝吸蟲的方法做一綜述。

【關(guān)鍵詞】華支睪吸蟲;診斷方法;PCR;免疫

【中圖分類號(hào)】R197???【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A????【文章編號(hào)】1672-3783（2020）10-0247-01

Research Progress in the Diagnostic Methods of Clonorchiasis

Wang Beibei?Wu Wanjun

（Liuzhou Traditional Chinese Medical Hospital，Liuzhou，545000）

【Abstract】Clonorchis sinensis， also known as liver fluke， parasites in the liver and bile duct of the human body， causing liver fluke disease.It can cause liver damage in patients， severe cases can cause primary cholangiocarcinoma. It can be seen that the infection of liver fluke is very serious to the human body， but the clinical detection rate of liver fluke is low. Therefore， it is extremely urgent to have a better and more concise method to detect liver fluke. Now this paper provides an overview on research progress in the ways of detection of liver fluke.

【Key words】Clonorchis sinensis;DiagnosticMethods;PCR;Inmunization

華支睪吸蟲又稱肝吸蟲，成蟲寄生于人體的肝膽管內(nèi)，引起肝吸蟲病，可導(dǎo)致患者肝部損害，嚴(yán)重者可致原發(fā)性膽管癌。1可見肝吸蟲感染對(duì)人體的傷害很嚴(yán)重，但肝吸蟲在臨床上的檢出率低，因此擁有更好更為簡潔的方法檢測出肝吸蟲就變得極為迫切，現(xiàn)將目前檢測肝吸蟲的方法做一綜述。

1 病原生物學(xué)方法

生理鹽水涂片法是目前臨床上用于檢測寄生蟲卵的主要方法，此法經(jīng)濟(jì)簡便，但因其容易漏診，且檢出率不高，因此開始陸續(xù)出現(xiàn)其他的檢測方法，如改良加藤厚涂片法、十二指腸引流法、改良酸醚離心沉淀法等。雖然十二指腸引流法檢出率接近100%，但是有創(chuàng)檢查，故而在臨床上運(yùn)用較少。1而有一部分學(xué)者對(duì)這些檢測方法的檢出率進(jìn)行了比較，以選出最適于在臨床上試驗(yàn)的方法。余一海等2比較發(fā)現(xiàn)改良加藤厚涂片法檢出率明顯高于生理鹽水涂片法;李國華3、鄒春霞4、陳森等5對(duì)改良加藤厚涂片法研究發(fā)現(xiàn)，此法操作相對(duì)簡單，檢出率高并且可以對(duì)蟲卵進(jìn)行定量，但所需糞便量較大。而且觀察厚片費(fèi)時(shí)費(fèi)力，并不利于臨床應(yīng)用。胡纓6研究發(fā)現(xiàn)改良酸醚離心沉淀法檢出率高，建議應(yīng)用。筆者認(rèn)為，雖然此法在看片時(shí)相比于厚片視野清晰，更利于查找蟲卵，但操作費(fèi)時(shí)費(fèi)力，所用的鹽酸和乙醚對(duì)人體傷害頗大，因此也并不適用于臨床。這就迫切的需要去發(fā)現(xiàn)其他的檢測方法，在如何提高鏡檢率方面顯得極為迫切。

2 影像學(xué)方法

肝吸蟲病影像學(xué)檢測方法包括超聲7、CT（電子計(jì)算機(jī)斷層掃描）8、MRI（磁共振成像）、ERCP（內(nèi)鏡逆行胰膽管造影）等。李曉林等9對(duì)肝吸蟲導(dǎo)致的梗阻性黃疸在ERCP、CT、B超檢測方法下發(fā)現(xiàn)ERCP方法最好，而吳長亮、關(guān)航也做過這方面的研究，也認(rèn)為ERCP對(duì)肝吸蟲導(dǎo)致的梗阻性黃疸可作為較好的診斷及治療方法。10-11但ERCP屬于侵入性檢測，患者痛苦較大，一般人難以接受，因此在臨床上的應(yīng)用并不廣泛。而CT屬于體外檢測，患者容易接受，劉紅山12、陸力堅(jiān)8，13、郝金華14對(duì)肝吸蟲病的CT表現(xiàn)進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)CT檢測在臨床有重要的應(yīng)用價(jià)值。特別是對(duì)肝吸蟲所致膽道梗阻，其顯像有自己的特征：膽管壁均勻增厚、較長的狹窄段、肝內(nèi)外膽管輕、中度擴(kuò)張并末梢小膽管"囊狀、杵狀"擴(kuò)張，這都有助于肝吸蟲所致膽道梗阻的診斷。同樣屬于體外檢測的還有MRI，宋高業(yè)對(duì)感染者行MRI發(fā)現(xiàn)：感染者都有不同程度的肝膽管擴(kuò)張，又對(duì)其中的幾例行MRCP（磁共振胰膽管造影）發(fā)現(xiàn)肝吸蟲性膽管炎MRI表現(xiàn)有一定的特征性，認(rèn)識(shí)并撐握這些特征，再結(jié)合寄生蟲實(shí)驗(yàn)室檢查，對(duì)提高診斷的準(zhǔn)確性有很大的幫助。15?但鄭笑娟等16發(fā)現(xiàn)CT顯像肝吸蟲體遠(yuǎn)不及超聲明顯。周茂榮等17研究發(fā)現(xiàn)超聲可以早期發(fā)現(xiàn)肝吸蟲病，MRI 可以更明確的診斷肝吸蟲病，運(yùn)用 MRI 圖像結(jié)合多普勒超聲圖像診斷肝吸蟲病的準(zhǔn)確率達(dá)到 100%。目前看來超聲結(jié)合MRI成為影像學(xué)檢出率高且方便的方法，但此法僅為輔助診斷方式且MRI價(jià)位相對(duì)較貴，因此具體還要依據(jù)患者的臨床表現(xiàn)和魚生史，以及鏡檢發(fā)現(xiàn)肝吸蟲卵，才能診斷和鑒別診斷。

3 免疫學(xué)方法

免疫學(xué)診斷方法最常用的為ELISA（酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)），目前在臨床應(yīng)用廣泛。18此法操作簡便，特異性高。19而ELISA所使用的抗原極為重要，譚奕洲等20使用蟲體粗抗原，故而假陽性率高;許學(xué)年[19]、江文才[21]、蔣守富[22]等對(duì)重組抗原進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)其特異性更高，而且假陽性也隨之下降，此時(shí)所使用的抗原是蟲體特異性重組抗原，因此在診斷上比粗抗原的特異性更好，敏感性也更高。[23-25]但是這種結(jié)果也只是對(duì)于粗抗原，對(duì)于天然抗原，其敏感性依舊低，且與其他生物存在交叉抗原，這就迫切的需要再在重組抗原上進(jìn)行進(jìn)一步的研究，或是在選擇多種抗原表位進(jìn)行進(jìn)一步的研究來提高敏感性和降低假陽性率。[26]

4 基因診斷方法

基因診斷是以病原體的核酸檢測為對(duì)象。[18]近年來，分子生物學(xué)技術(shù)飛速發(fā)展，對(duì)于鑒定物種極為精確，便衍生出基因診斷技術(shù)。此種技術(shù)在醫(yī)學(xué)的各種領(lǐng)域皆有廣泛的研究，特別是在病原生物的鑒別上，顯得極為重要。那么從基因的角度了解肝吸蟲，并以此為方法去診斷肝吸蟲感染又成為了一種新興的技術(shù)。[27]目前基因診斷方法有PCR、實(shí)時(shí)熒光PCR等，此法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、周期短、高通量等優(yōu)點(diǎn)，有一定的應(yīng)用前景。[28-30]但現(xiàn)在有學(xué)者從肝吸蟲的感染階段去對(duì)第二中間宿主淡水魚里的囊蚴進(jìn)行診斷[31]，以期在此階段阻斷傳播途徑，從而降低肝吸蟲的感染率。此法可能成為未來研究的重點(diǎn)。

5 展望

雖然肝吸蟲的檢測方式多，但在臨床上運(yùn)用最為廣泛的依舊是生理鹽水涂片法，其次為ELISA。這兩者方法操作簡單，經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，雖然前者檢出率低，但后者的特異性高，兩者結(jié)合可以更進(jìn)一步提高檢出率。但ELISA法的靈敏度高、特異度低，這是一個(gè)亟待解決的難題。而影像學(xué)方法只能作為輔助檢查，在診斷時(shí)需要參考的資料太多，這一方面也需要再研究。PCR則檢出率高，在肝吸蟲的各個(gè)階段都可以檢測，如囊蚴[31]。因此，目前免疫學(xué)方法和PCR在肝吸蟲病的診斷上將會(huì)有很好的研究前景。

參考文獻(xiàn)

[1] 李雍龍，管曉虹.人體寄生蟲學(xué)[M].第七版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2009，93-94.

[2] 余一海，吳焜，李艷鑾.兩種方法檢測肝吸蟲蟲卵的效果比較[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2016，13 （02）：262-264.

[3] 李國華.改良加藤厚涂片法中蟲卵顯微鏡計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性探討[J].山西醫(yī)藥雜志，2006（12）： 1143.

[4] 鄒春霞.改良加藤氏厚涂片法在肝吸蟲檢測中的研究[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2012，9（22）：2832 -2833.

[5] 陳森，蔡燕瑜.改良加藤厚涂片法蟲卵計(jì)數(shù)質(zhì)量控制[J].海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2014，20（02）：42- 43.

[6] 胡纓，李艷文，盧作超.診斷華支睪吸蟲病4種糞檢方法的比較[J].中國熱帶醫(yī)學(xué)，2012，12（08）： 976-978.

[7] 孫建平，張宏宇.肝吸蟲病的彩色多普勒超聲診斷價(jià)值[J].中國傷殘醫(yī)學(xué)，2014，22（10）：198- 199.

[8] 陸力堅(jiān)，黃璐.華支睪吸蟲病CT表現(xiàn)的研究現(xiàn)狀[J].廣西醫(yī)學(xué)，2018，40（06）：685-686+691.

[9] 李曉林，智發(fā)朝，黃寶裕，等.三種影像學(xué)檢查對(duì)華支睪吸蟲所致膽胰疾病診斷的對(duì)比研究[J].中華消化雜志，2005（10）：583-585.

[10] 吳長亮，唐星火.肝吸蟲感染的膽道梗阻患者行內(nèi)鏡逆行胰膽管造影（ERCP）術(shù)治療的有效性及安全性觀察[J].中國地方病防治雜志，2018，33（01）：119-120.

[11] 關(guān)航，楊軍雄，甘兆義.治療性ERCP在肝吸蟲病梗阻性黃疸中的臨床應(yīng)用[J].微創(chuàng)醫(yī)學(xué)，2017，12（05）：689-690.

[12] 劉紅山，方競，廖錦元.華支睪吸蟲病及其合并癥的CT表現(xiàn)[J].新發(fā)傳染病電子雜志，2018，3（02）：106-110.

[13] 陸力堅(jiān)，黃璐.肝吸蟲所致膽道梗阻的CT表現(xiàn)[J].臨床放射學(xué)雜志，2019，38（01）：101-104.

[14] 郝金華，孫小影，王濤，等.肝吸蟲病繼發(fā)肝實(shí)質(zhì)炎癥的CT表現(xiàn)[J].中國中西醫(yī)結(jié)合影像學(xué)雜志，2018，16（02）：163-165.

[15] 宋高業(yè)，陳小龍.華支睪吸蟲性膽管炎的MRI表現(xiàn)[J].海南醫(yī)學(xué)，2018，29（13）：1842-1845.

[16] 鄭笑娟，陳永興，黃雪蘭，等.超聲波成像與CT比較華支睪吸蟲所致肝膽損害[J].中國人獸共患病學(xué)報(bào)，2008（08）：792+791.

[17] 周茂榮，蘇寧，馬利軍，等.超聲與MRI在診斷肝吸蟲中的價(jià)值研究[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘，2016，16（76）：141+146.

[18] 梁萍.華支睪吸蟲病診斷概述[J].菏澤醫(yī)學(xué)?？茖W(xué)校學(xué)報(bào)，2013，25（04）：82-84.

[19] 許學(xué)年，周巖，張鴻滿，等.華支睪吸蟲特異性富甘氨酸2a類抗原基因的克隆、表達(dá)和免疫學(xué)診斷價(jià)值評(píng)價(jià)[J].中國人獸共患病學(xué)報(bào)，2011，27（2）：91-96.

[20] 譚奕洲，陳偉烈，李穗芬.肝吸蟲抗體的檢測[J].現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)生物工程學(xué)雜志，2005（03）： 230-232.

[21] 江文才，徐祥珍，沈明學(xué)，等.華支睪吸蟲半胱氨酸蛋白酶ELISA檢測方法的建立及其應(yīng)用效果評(píng)價(jià)[J].中國病原生物學(xué)雜志，2013，8（11）：1011-1013.

[22] 蔣守富.重組華支睪吸蟲診斷抗原研究進(jìn)展[J].中國病原生物學(xué)雜志，2007（02）：155-158.

[23] Choi BI，Han JK，Hong ST，et al.Clonorchiasis and cholangiocarci-noma： etiologic and imaging diagnosis[J].Clin Microbiol Rev，2004，17（3）：540- 552.

[24] Zhao QP，Moon SU，Lee HW，et al.Evaluation of Clonorchis sinensis recombinant 7-kilodalton antigen for serodiagnosis of clonorchiasis[ J].Clin Diagn Lab Immunol，2004，11（4）：814-817.

[25] Lee M， Chung YB， Lee SK， et al. The identification of a Clonorchis sinensis gene encoding an antigenic egg protein[J].Parasitol Res，2005，95（3）：224- 226.

[26] 朱慕春，劉勁峰，陸忠奎，等.華支睪吸蟲排泄分泌抗原McAb的制備及雙抗夾心ELISA的初步建立[J].中國人獸共患病學(xué)報(bào)，2018，34（10）：873-877.

[27] 劉越，郭永晨，潘峰，等.華支睪吸蟲分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J]. 中國人獸共患病學(xué)報(bào)，2009，25（10）：1014-1016.

[28] PangX，LeeB，Cl，etal.Evaluationandvalidationofreal-timereversetranscription-PCR assayusingth eLightCyclersystem fordetectionandquantitationofnoroviru[J].JClinMimnbiol，2004，42（10）：4679 -4685.

[29] Bustin SA.Quantification ofmRNA using real-time reversetranscriptionPCR（RT-PCR）：trend sandproblems[J].JMol Endoerinal，2002，29（1）：23-39.

[30] 張媛，童睿，鄭秋月，等.PCR和實(shí)時(shí)熒光PCR方法檢測華支睪吸蟲[J].寄生蟲病與感染性疾病，2008（01）：9-11.

[31] 王真瑜，江莉，張耀光，等.淡水魚中華支睪吸蟲囊蚴PCR檢測技術(shù)的建立及應(yīng)用分析[J].熱帶醫(yī)學(xué)雜志，2018，18（11）：1435-1439+1546.

作者簡介：

王貝貝（1989-），女，湖北仙桃，初級(jí)技師，研究方向：寄生蟲病。

吳婉君（1986-），女，廣西河池，初級(jí)技師，研究方向：流行病與統(tǒng)計(jì)學(xué)。