GRB7在乳腺癌中表達(dá)及其臨床意義

戴玉鑫

（內(nèi)蒙古民族大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院（內(nèi)蒙古林業(yè)總醫(yī)院），內(nèi)蒙古 呼倫貝爾 022150）

在臨床上，HER2（人類表皮生長因子受體蛋白2）的浸潤性導(dǎo)管癌陽性表達(dá)模式是曲妥珠單抗治療靶點(diǎn)，并且也已經(jīng)廣泛地應(yīng)用到臨床治療工作中，但是，這種治療方法費(fèi)用高昂且對(duì)心臟會(huì)產(chǎn)生一定的毒副作用，所以仍存在操作爭議。生長因子受體結(jié)合蛋白-7基因（GRB7）作與HER2有相似性，并且被認(rèn)為與乳腺癌發(fā)生和發(fā)展有一定聯(lián)系[1]?；诖?，探究生長因子受體結(jié)合蛋白-7基因在乳腺癌中的表達(dá)以及意義成為了一項(xiàng)重要課題，本文就此展開研究，具體報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇我院病理科在2017年1月～2019年1月未經(jīng)放化療治療的乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織標(biāo)本檔案作為研究組，女80例，年齡25～51歲，平均（44.12±0.33）歲。同時(shí)，選擇其中30例癌旁正常乳腺組織作為對(duì)照組。兩組患者基本指標(biāo)均無明顯差異性，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法

選擇上海艾博康貿(mào)易有限公司生產(chǎn)的GRB7鼠抗人單克隆抗體，選擇北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司的人類表皮生長因子受體蛋白2。為研究組和對(duì)照組提供相同的方法處理。

選擇北京金菩嘉生產(chǎn)的HER2基因檢測試劑盒，按照試劑盒的說明步驟進(jìn)行所有操作。（1）先采用脫蠟處理方式，將樣本組織脫蠟和脫二甲苯。（2）使用進(jìn)行15 min孵育，使用胃蛋白酶。（3）進(jìn)行洗滌和干燥處理。在干燥之后的樣本中中加入10 μL的DAPI顯色液，在使用熒光顯微鏡完成樣本組織檢查。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）判定兩組成分的免疫組化，參考ASCO分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，GRB7陽性呈棕黃色定位于細(xì)胞膜或者細(xì)胞質(zhì)位置。腫瘤細(xì)胞染色陽性分別計(jì)數(shù)為0～3+。HER2陽性呈現(xiàn)棕黃色定位于細(xì)胞膜：①腫瘤細(xì)胞膜染色≤10%；②弱完整膜染色≥10%；③微弱不完整膜染色≥10%；④強(qiáng)完整膜陽性≥10%，計(jì)數(shù)分別為0～3+。

（2）參考美國臨床腫瘤學(xué)會(huì)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，17號(hào)染色體絲粒為綠色信號(hào)。紅色信號(hào)為HER2基因，隨機(jī)計(jì)數(shù)為30個(gè)腫瘤細(xì)胞。

2 結(jié) 果

2.1 GRB7與臨床病理特征關(guān)系

研究得出，在進(jìn)行乳腺癌臨床診斷中，患者GRB7表達(dá)率為48%。對(duì)照組30例樣本中，僅有1例為高表達(dá)3.33%。GRB7高表達(dá)和淋巴腫瘤結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤體積增大、組織學(xué)分級(jí)高等密切相關(guān)，但是與患者的年齡、ER和PR無明顯關(guān)聯(lián)。

2.2 乳腺癌組織中GRB7表達(dá)生存分析

根據(jù)GRB7不同的表達(dá)可以分為（-）、（+～++）和（+++）三組，按照kaplan meier計(jì)算方法，將其累計(jì)的無腫瘤生存率進(jìn)行計(jì)算，可以得出（-）組的患者無腫瘤生存時(shí)間在10.2年左右，（+～++）的無腫瘤生存率為9.9年，其余患者的生存率為10.7年，可以看出，GRB7表達(dá)時(shí)間累計(jì)無腫瘤生存的時(shí)間最長，具體見下圖：

圖1 GRB7不同表達(dá)對(duì)預(yù)后影響生存曲線示意圖

3 討 論

乳腺癌的治療方法主要包括了傳統(tǒng)手術(shù)模式、放化療以及內(nèi)分泌模式為主，近幾年，明確將曲妥珠單抗作為乳腺癌病癥治療的新靶點(diǎn)。而且，在治療期間，輔助放化療治療方法，能取得較好的治療效果。但是，相關(guān)領(lǐng)域研究中得出，未經(jīng)擴(kuò)張染色體HER2呈陰性，血清轉(zhuǎn)移后的陽性細(xì)胞乳腺癌患者預(yù)后并不能達(dá)到理想狀態(tài)。針對(duì)乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)、疾病治療手段和患者預(yù)后等多項(xiàng)內(nèi)容的研究工作，已經(jīng)成為疾病治療與抗癌研究的新熱點(diǎn)。

治療效果好、毒副作用小且能極大提升患者生存質(zhì)量并降低死亡率，是乳腺癌抗癌治療的主要研究方向，通過對(duì)GRB7蛋白在乳腺癌中表達(dá)作用進(jìn)行研究，為疾病治療提供了較好的方向。乳腺癌疾病發(fā)生證明與人類17號(hào)染色體有密切關(guān)系，這一染色體由超過8000萬堿基構(gòu)成，其中含有1500個(gè)基因片段，并且與遺傳細(xì)胞編碼片段有較高重復(fù)性，能直接參與到多種蛋白表達(dá)和基因編碼合成，與多個(gè)乳腺癌表達(dá)基因位點(diǎn)有相關(guān)性。

人體細(xì)胞內(nèi)存在許多SH2結(jié)構(gòu)蛋白，且這些結(jié)構(gòu)蛋白會(huì)直接參與到信號(hào)竄到級(jí)聯(lián)酶促反應(yīng)中。GRB7蛋白是最近發(fā)現(xiàn)乙類具有多域編碼特征的接頭蛋白，且有較多SH2蛋白結(jié)構(gòu)性特征。GRB7蛋白中包含了三種功能分區(qū)，分別位于脯氨酸功能前端N區(qū)域、C端SH2結(jié)構(gòu)區(qū)域與中間GM區(qū)域。這一蛋白主要是通過信號(hào)從多種細(xì)胞表面受體介導(dǎo)，傳達(dá)到下游信號(hào)通路的方式，發(fā)揮出聯(lián)動(dòng)作用。在研究中發(fā)現(xiàn)，人體內(nèi)的GRB7蛋白細(xì)胞在胰腺中屬于高表達(dá)狀態(tài)，因此認(rèn)為該細(xì)胞主要是通過SH2結(jié)構(gòu)域完成與胰島受體的結(jié)合。為能更廣泛地參與到細(xì)胞受體信號(hào)、轉(zhuǎn)導(dǎo)與各種信號(hào)通路中，在腫瘤組織研究環(huán)節(jié)，重點(diǎn)對(duì)其侵入乳腺癌細(xì)胞進(jìn)行研究，結(jié)果證明，在是乳腺癌細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移中，HER2陽性粒子始終受到GRB7蛋白高表達(dá)狀態(tài)的影響，進(jìn)而產(chǎn)生促進(jìn)作用。HER2是當(dāng)前研究領(lǐng)域中，較為透徹且具有酪氨酸酶活性特征的同源蛋白質(zhì)，主要在胞內(nèi)區(qū)與結(jié)合區(qū)等位置形成，分子內(nèi)部包含23個(gè)氨基酸，質(zhì)量約為185kDa。

GRB7在乳腺癌中表達(dá)腫瘤體積大、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)等有密切關(guān)系，但是與患者的年齡等其他因素?zé)o關(guān)。研究證明了在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中，GRB7高表達(dá)與臨床病理特征有直接關(guān)聯(lián)，所以這一指標(biāo)可以作為評(píng)估患者乳腺癌預(yù)后的重要參考依據(jù)，能抑制患者乳腺腫瘤轉(zhuǎn)移，延長生存期。乳腺癌的治療只要以傳統(tǒng)手術(shù)、內(nèi)分泌治療與放化療為主，近幾年，HER2成為治療靶點(diǎn)，輔助化療治療效果明顯提升，但是未擴(kuò)增17號(hào)染色體HER2成陰性，血清轉(zhuǎn)移預(yù)后不佳[2]。受到乳腺癌細(xì)胞表皮生長因子刺激，表皮生長因子受體與GRB7結(jié)合會(huì)被磷酸化，此達(dá)到刺激腫瘤生長的作用。研究結(jié)果顯示，RB7和HER2有較強(qiáng)相關(guān)性，主要體現(xiàn)在在乳腺癌細(xì)胞中表達(dá)方面，這以結(jié)果證明GRB7對(duì)乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移有重要影響，抑制其高表達(dá)，有可能提高HER2抑制效果，改善治療結(jié)局[3]。