黑木耳中有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的測定

曾永明，彭紅蘭，周麗珠，蒙芳慧，涂志勤

（1.廣西壯族自治區(qū)林業(yè)科學(xué)研究院，廣西 南寧 530002；2.廣西化工產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)和環(huán)保監(jiān)測站，廣西 南寧 530001；3.桂林國家森林公園，廣西 桂林 541004）

黑木耳屬擔(dān)子菌綱，色澤黑褐，質(zhì)地呈膠質(zhì)狀透明，含蛋白質(zhì)、脂肪、多糖和鈣、磷、鐵等元素，以及胡蘿卜素、維生素B1、維生素B2、煙酸、磷脂、固醇等營養(yǎng)素。作為一種食藥兩用的資源，黑木耳的價(jià)值不斷被開發(fā)利用，市場需求量越來越大。

本實(shí)驗(yàn)建立了一種測定黑木耳中的有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的方法。黑木耳樣品經(jīng)固相萃取( SPE )法處理后，結(jié)合氣相色譜-電子捕獲檢測器( GC-ECD )，對黑木耳中的有機(jī)氯和擬除蟲菊酯農(nóng)藥殘留進(jìn)行測定，6種農(nóng)藥在30min內(nèi)均得到很好的分離，在10.0～500μg·kg-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R2＞0.999 )。本方法的最低檢出濃度為0.2～4.5μg·kg-1，在 100～200μg·kg-1濃度范圍內(nèi)，平均加標(biāo)回收率為81.2%～98.9%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.5%～4.5%(＜10%)(n=5)。固相萃取( SPE )氣相色譜法的加標(biāo)回收率高，相對偏差小，是測定黑木耳中的有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的有效方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備

MS 3 basis旋渦混合器，VM24固相萃取裝置，GC-2010Plus氣相色譜儀，配備電子捕獲ECD檢測器，色譜柱：SH-Rtx-1(30m×0.25mm×0.25μm毛細(xì)色譜柱)，離心機(jī)TD5A-WS，WNV-10G氮吹儀。

1.2 試劑與材料

正己烷(色譜純)，丙酮(重蒸)，無水硫酸鈉(分析純，650℃灼燒 4h），氯化鈉 (優(yōu)級純，140℃烘烤4h)，水(二級以上蒸餾水)。

提取混合溶劑為正己烷+丙酮(3+1)。CNWBOND Florisil SPE 小柱：規(guī)格 1g，6mL·(30 pcs)-1。

6種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：五氯硝基苯(Quintozene)、三氯殺螨醇( Dicofol)、甲氰菊酯(Fenpropathrin)、氯氟氰菊酯(Cyhalothrin )、氯氰菊酯 (Cypermethrin)、氰戊菊酯 (Fenvalerate)，濃度均為 100μg·mL-1。

1.3 混合工作液的配制

分別吸取上述農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液200μL于10mL容量瓶中，用正己烷稀釋定容，配制成各農(nóng)藥組分質(zhì)量濃度均為2μg·mL-1的混合工作溶液，貯存在4℃冰箱中備用。檢測時(shí)，稀釋混合工作溶液，得到0.005、0.010、0.020、0.040、0.080 、0.10μg·mL-1共 6個(gè)濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，隨樣品進(jìn)行氣相色譜分析。

1.4 樣品的提取

準(zhǔn)確稱取2.0g(精確至0.01g)經(jīng)60℃烘干的黑木耳試樣，置于50mL離心管中，補(bǔ)充適量水分(做加標(biāo)回收時(shí)，在此步驟完成后添加目標(biāo)物)，加入20mL提取溶劑，加入3 g氯化鈉，用旋渦混合器提取3 min。將離心管放入離心機(jī)，4000 r·min-1下離心5 min。吸取上層清液到另一離心管中，加入10 mL提取溶劑，用旋渦混合器重復(fù)提取3min，再在4000 r·min-1下離心5min。合并2次提取液，在40℃水浴下氮吹濃縮至體積少于2 mL，等待凈化。

1.5 提取液的凈化和定容

用流速1.0mL·min-1的正己烷5.0 mL對樣品進(jìn)行活化平衡。上樣時(shí)，正己烷的流速為1.5mL·min-1，用量為2.0mL。淋洗時(shí)，正己烷+丙酮混合液（體積比為90∶10）的流速為1.5mL·min-1，用量為3.0mL。之后，用7.5mL的正己烷+丙酮混合液（體積比為90∶10）洗脫，分3次，每次2.5mL。然后，洗脫液用氮吹儀吹干后，用正己烷溶解定容至2.0 mL，過0.2μm濾膜，裝瓶待測。

向SPE小柱(1g，6mL)中填充高約2 cm的無水硫酸鈉，放入固相萃取裝置中進(jìn)行固相萃取。在固相萃取柱中，以1.0 mL·min-1的流速加入6.0mL的正己烷+丙酮(9+1)，潤洗SPE小柱進(jìn)行活化。以1.5mL·min-1的流速加入待凈化的樣品提取溶液，于SEP小柱中進(jìn)行凈化。以1.5mL·min-1的流速洗脫，依次用2.5mL正己烷+丙酮(9+1)進(jìn)行洗脫，收集洗脫液。將收集的洗脫液在水浴40℃下氮吹濃縮至近干，用正己烷溶解，定容至2.0mL，過0.2μm濾膜，裝瓶待測。

1.6 色譜條件

毛細(xì)色譜柱：SH-Rtx-1 ( 30m×0.25mm×0.25μm)，載氣：高純氮?dú)猓?9.999%)，流量1.0mL·min-1，吹掃3.0mL·min-1。ECD Ni-63檢測器，溫度280℃，進(jìn)樣口溫度250℃，進(jìn)樣方式：分流自動(dòng)進(jìn)樣（分流比10∶1），進(jìn)樣量 1.0μL。

升溫程序：180℃保持4.00min，以15℃·min-1升溫到200℃保持1.00min，以30℃·min-1升溫到250℃，保持 25.00min、以 40℃·min-1升溫到280℃，保持 10.00min。

定量方法：峰面積外標(biāo)法定量。

2 結(jié)果分析及討論

2.1 6種有機(jī)氯類、菊酯類農(nóng)藥的分離效果

取0.02mg·L-1標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，按照上述的色譜條件進(jìn)行測定，6種有機(jī)氯類、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥均得到了良好的分離，出峰順序依次為：五氯硝基苯 (7.288min)、三氯殺螨醇 (9.221min)、甲氰菊酯(14.906min)、氯氟氰菊酯(17.056min)、氯氰菊酯 -1(23.027min)、氯氰菊酯 -2(23.486min)、氯氰菊酯-3(23.924min )、氰戊菊酯(28.0799min )。色譜圖見圖1。

圖1 6種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的色譜圖Fig.1 chromatogram of 6 standard substances

2.2 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線和方法的檢出限

標(biāo)準(zhǔn)工作液的測定條件同2.1，6種有機(jī)氯和擬除蟲菊酯的色譜分離圖見圖2。根據(jù)每一種化合物的濃度和色譜峰響應(yīng)面積，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，線性方程和相關(guān)系數(shù)見表1。

取樣2.0g，定容至2.0mL，以3倍信噪比為定性檢出限，10倍信噪比為定量檢出限，6種有機(jī)氯和擬除蟲菊酯的定量檢出限見表1。

表1 6種有機(jī)氯和擬除蟲菊酯的線性關(guān)系和檢出限

2.3 回收率和精密度試驗(yàn)

取適量的6種有機(jī)氯和擬除蟲菊酯農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，加入到2.0 g黑木耳樣品中，充分混勻，配制成濃度分別為100.0μg·kg-1和200.0μg·kg-1的加標(biāo)樣品各5份，采用固相萃取SPE-氣相色譜法進(jìn)行回收率和精密度實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

3 結(jié)論

從上面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，采用固相萃取SPE-氣相色譜法測定6種農(nóng)藥的殘留，回收率比較穩(wěn)定，在81.2%～98.9%之間，RSD為1.5%～4.5%(＜10%)?？梢姡滔噍腿PE-氣相色譜法的準(zhǔn)確度及重現(xiàn)性均令人滿意，是測定黑木耳中有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的有效方法。