面部敏感性皮膚防曬化妝品的篩選與評價

呂靜 刁慶春 唐海燕 江陽 朱瑾瑜 鄧抒琴 王莎

重慶市中醫(yī)院皮膚科400011

敏感性皮膚（sensitive skin，SS）是一種由多種因素誘發(fā)的包括緊繃感、刺激感、燒灼感、疼痛感及瘙癢感等在內(nèi)的自覺癥狀伴或不伴紅斑、水腫、毛細(xì)血管擴(kuò)張、干燥、脫屑等臨床體征的皮膚狀態(tài)，而非一種獨(dú)立的疾病，可由多種因素引起［1］。臨床上可通過對上述癥狀或體征的評價來判斷針對SS的化妝品功能。SS 人群皮膚屏障功能受損，皮膚處于高反應(yīng)狀態(tài)，紫外線尤其易激發(fā)皮膚的主客觀癥狀，故防曬對于SS尤為重要，但部分防曬產(chǎn)品本身也易激發(fā)皮膚過敏。因此，建立全面評價SS 防曬化妝品安全性和功效性的方法，對于改善SS 人群的皮膚狀況至關(guān)重要。我們結(jié)合客觀的人體皮膚封閉型斑貼試驗和防曬指數(shù)測定、主觀的長期試用試驗和主觀感受評價，對SS防曬化妝品進(jìn)行篩選，并評價其在SS 人群中的安全性和防曬功效，為進(jìn)一步建立較為全面的SS防曬化妝品適用性評價方法打下基礎(chǔ)。

對象與方法

一、對象

40例健康女性，年齡23 ～58（40.89±12.10）歲，均為我院職工，且為室內(nèi)工作者。所有入選受試者首次篩選時乳酸刺痛試驗均陽性，無其他皮膚疾病或系統(tǒng)性疾??；試驗期間繼續(xù)使用既往的面部護(hù)膚產(chǎn)品且試驗前3個月未更換護(hù)膚品（保證面部皮膚狀態(tài)在試驗期間基本穩(wěn)定），不使用其他防曬及美白祛斑產(chǎn)品，不服用任何抗光敏藥物。本研究通過重慶市中醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)（批號：2019?ky?30），所有受試者均簽署知情同意書。

二、人體皮膚封閉型斑貼試驗評價安全性

安全性評價參考文獻(xiàn)［2?3］。4種SS用防曬產(chǎn)品（防曬指數(shù)SPF50，PA+++）均由國內(nèi)某化妝品企業(yè)提供，標(biāo)記為產(chǎn)品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，送檢前均已完善理化檢驗、微生物檢驗和毒理檢驗，結(jié)果合格。分別取4 種防曬產(chǎn)品0.020 ～0.025 g，置于封閉型斑試器（北京百億怡達(dá)科技開發(fā)有限公司），用低致敏膠帶敷貼于40例受試者皮膚24 h。測試部位首選上背部脊柱兩側(cè)（35例），也可選擇上臂外側(cè)（5例）。判讀時間：敷貼24 h 后除去測試物，分別于去除受試物斑試器后30 min（壓痕消失后）、24 h 和48 h，按文獻(xiàn)［4］標(biāo)準(zhǔn)觀察皮膚反應(yīng)，記錄觀察結(jié)果。設(shè)置空白對照（不置任何物質(zhì)）。選擇安全性較高的產(chǎn)品進(jìn)行后續(xù)測試。

三、長期試用試驗安全性和功效性測試

根據(jù)人體封閉型斑貼試驗選擇安全性較高的產(chǎn)品Ⅲ和Ⅳ，根據(jù)乳酸刺痛試驗篩選結(jié)果，采用隨機(jī)數(shù)字表法將受試者平均分為兩組，于斑貼試驗結(jié)束后1 d 開始長期試用試驗，分別使用產(chǎn)品Ⅲ和產(chǎn)品Ⅳ。兩組受試者基本情況（包括基線乳酸刺痛試驗結(jié)果、表皮失水率、角質(zhì)層含水量、黑素含量、油脂含量）具有可比性（均P>0.05），見表1、2。在出門前15 ～30 min使用測試產(chǎn)品，使用部位為整個顏面部，每天早上8 ～9點和下午2 ～3點各使用1次，每次用量約0.1 g。分別于使用前、使用2 周和4 周時進(jìn)行回訪評價。

1.臨床評估：由皮膚科醫(yī)師評估受試者面部紅斑、水腫、脫屑的程度，無表現(xiàn)為0 分，輕、中、重度表現(xiàn)分別為1、2、3分。

2.多功能皮膚測試儀測試皮膚生理指標(biāo)：用多功能皮膚測試儀MPA10（德國Courage+Khazaka公司）測試經(jīng)皮水分丟失、皮膚角質(zhì)層含水量、皮膚黑素含量、皮膚油脂含量。所有檢測均在23 ～25 ℃、濕度為50% ～60%的室內(nèi)進(jìn)行，每次在同一部位測量3次，取平均值［5］。

3. 乳酸刺痛試驗：選擇雙側(cè)鼻唇溝皮膚完好處。用移液器吸取10%的乳酸溶液［用100%乳酸（美國Sigma?Aldrich 公司）配制］和蒸餾水各50 μl，分別滴加在兩層濾紙片上1 min，用鑷子夾起浸濕后的兩層濾紙片，在患者鼻唇溝右側(cè)放置10%的乳酸溶液，左側(cè)放置蒸餾水，使其完全貼合皮膚。分別于30 s、2.5 min 和8 min 時由受試者評估測試部位瘙癢、刺痛、灼痛的不適程度。按4 分法進(jìn)行評分（0 分無感覺，1 分為輕度，2 分為中度，3 分為重度）。2.5 min 和8 min 刺痛評分之和≥3 分為乳酸刺痛陽性［6］。試驗中若出現(xiàn)無法忍受的嚴(yán)重刺痛感，應(yīng)及時中止試驗，并用清水反復(fù)沖洗測試部位。

刺痛評分和總感覺評分計算［7］：刺痛評分=2.5 min 與8 min 乳酸側(cè)刺痛評分之和- 2.5 min 與8 min 蒸餾水側(cè)刺痛評分之和；總感覺評分=30 s、2.5 min 與8 min 乳酸側(cè)所有感覺評分之和-30 s、2.5 min與8 min蒸餾水側(cè)所有感覺評分之和。

四、防曬功效測定

在長期（4 周）試用試驗結(jié)束后測定產(chǎn)品Ⅲ和Ⅳ的防曬指數(shù)。所用設(shè)備為紫外日光模擬儀（601-300 v2.5 SPF，美國Solar Light公司），其光源輸出的相對累積性紅斑效應(yīng)滿足試驗要求。SPF（波段為320 ～400 nm）測定：標(biāo)準(zhǔn)品為7%二甲基PABA 乙基己酯和3%二苯酮-3制品（SPF值16.1±2.4）。長波紫外線防護(hù)指數(shù)（PFA，波段為280 ～400 nm）測定：標(biāo)準(zhǔn)品為3%甲氧基肉桂酸乙基乙酯和5%丁基甲氧基二苯甲?；淄椋≒FA值4.4±0.6）。標(biāo)準(zhǔn)對照品由上海市皮膚病醫(yī)院健康相關(guān)產(chǎn)品檢測實驗室提供。

1. 防曬化妝品SPF 值測定：在SS 受試者中選取12例進(jìn)行SPF 測定。受試者皮膚類型Ⅱ型5例、Ⅲ型7例。按文獻(xiàn)［8］要求進(jìn)行檢測。受試者俯臥位，對其背部進(jìn)行照射。檢驗前24 h預(yù)測受試者皮膚對紫外線照射的最小紅斑量（MED），根據(jù)預(yù)測結(jié)果調(diào)整紫外線照射劑量，用于檢驗樣品。檢測當(dāng)天首先在受試者背部選擇4 處7 cm×7 cm 的正常皮膚區(qū)域，按2 mg/cm2的樣品用量將待檢樣品和標(biāo)準(zhǔn)對照品均勻涂抹在上述區(qū)域內(nèi)，以不涂樣品的區(qū)域作為對照，然后選擇適當(dāng)?shù)淖贤饩€照射劑量照射。24 h后觀察實驗結(jié)果，記錄MED值。SPF=防護(hù)皮膚的MED值/未防護(hù)皮膚的MED值。

級配碎石混合料的碾壓原則不同于常規(guī)半剛性基層，由于其缺乏黏結(jié)劑的黏結(jié)作用，因此其碾壓關(guān)鍵是一方面盡量使碎石能夠相互嵌擠狀態(tài)，另一方面是集料破碎程度較小，且其壓實度能夠滿足相應(yīng)要求，因此對于級配碎石的碾壓，應(yīng)將振動碾壓、鋼輪靜壓相結(jié)合，發(fā)揮不同碾壓組合的優(yōu)勢[3]。另外需要注意，如果碾壓施工時的溫度較高，則應(yīng)根據(jù)實際情況在級配碎石上噴灑適當(dāng)水，以防止其水分散失嚴(yán)重，影響路基碾壓質(zhì)量。

2.防曬化妝品PFA 值測定：在SS 受試者中選取11 例進(jìn)行PFA 測定，7 例受試者皮膚類型為Ⅲ型，4 例為Ⅳ型。按文獻(xiàn)［8］要求進(jìn)行檢測。受試者取前傾位或俯臥位，對其背部進(jìn)行照射。檢驗前24 h 預(yù)測受試者皮膚對紫外線照射的最小持續(xù)性黑化量（MPPD），根據(jù)預(yù)測結(jié)果調(diào)整紫外線照射量，用于檢驗樣品。首先在受試者背部選擇4處7 cm×7 cm正常皮膚區(qū)域，按（2.00±0.05）mg/cm2樣品的用量將待測樣品或標(biāo)準(zhǔn)對照品均勻涂抹在上述區(qū)域內(nèi)，以不涂樣品區(qū)域作為空白對照，然后選擇適當(dāng)?shù)腢VA 照射量照射。2 ～4 h 后觀察實驗結(jié)果，分別記錄MPPD 值。PFA = 防護(hù)皮膚的MPPD 值/未防護(hù)皮膚的MPPD值。

五、統(tǒng)計學(xué)方法

結(jié) 果

一、封閉型斑貼試驗

1 例受試者在使用產(chǎn)品Ⅰ后30 min、24 h、48 h出現(xiàn)1 級反應(yīng)；2 例使用產(chǎn)品Ⅱ后30 min 出現(xiàn)1 級反應(yīng)，其中1例24 h、48 h仍是1級反應(yīng)；1例使用產(chǎn)品Ⅲ后24 h發(fā)生1級反應(yīng)；所有受試者使用產(chǎn)品Ⅳ后均未發(fā)生陽性反應(yīng)。提示產(chǎn)品Ⅲ和Ⅳ在SS人群中安全性高于產(chǎn)品Ⅰ和Ⅱ，因此選擇產(chǎn)品Ⅲ、產(chǎn)品Ⅳ繼續(xù)進(jìn)行長期試用試驗和防曬試驗。

二、防曬產(chǎn)品長期使用安全性評價測試

使用防曬產(chǎn)品前后紅斑、水腫、脫屑情況見表3。在使用產(chǎn)品Ⅲ后4周時的紅斑程度低于使用前（Wilcoxon 符號秩檢驗，Z=4.73，P<0.05），在使用產(chǎn)品Ⅳ后4 周時的紅斑程度亦低于使用前（Wilcoxon符號秩檢驗，Z=4.82，P<0.05）。

三、對SS功效評價

1.皮膚屏障指標(biāo)檢測：見表1。使用防曬產(chǎn)品Ⅲ或Ⅳ前后受試者表皮失水率、角質(zhì)層含水量、黑素含量差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.05），皮膚油脂含量差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P>0.05）。使用產(chǎn)品Ⅲ或產(chǎn)品Ⅳ后4周時表皮失水率低于基線值（均P<0.05），角質(zhì)層含水量高于基線值（均P<0.05），而在使用2 周時差異無統(tǒng)計學(xué)意義（均P>0.05）；使用2 周、4 周時黑素含量均低于基線值（均P <0.05）。

使用4 周時，產(chǎn)品Ⅳ組黑素含量（103.47 ±5.48）低于產(chǎn)品Ⅲ組（112.58±7.34），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=8.45，P<0.05）。

2.乳酸刺痛試驗：受試者在使用產(chǎn)品Ⅲ和產(chǎn)品Ⅳ前后不同時間點乳酸刺痛試驗評分和總感覺評分差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.05），使用兩種產(chǎn)品2周后，乳酸刺痛評分和總感覺評分與基線值比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.05）；使用4 周后乳酸刺痛評分和總感覺評分均低于基線值（均P<0.05）。見表2。

四、防曬功效測試

1. SPF 值測定結(jié)果：12 例受試者完成SPF 測定，其中1例在照射第1孔出現(xiàn)紅斑，1例紅斑隨機(jī)出現(xiàn)，判定為無效數(shù)據(jù)。納入統(tǒng)計10例，防曬產(chǎn)品Ⅲ、產(chǎn)品Ⅳ、標(biāo)準(zhǔn)品SPF 值分別為31.5±2.6、51.8±2.9、15.0 ± 0.8，產(chǎn)品ⅣSPF 值高于產(chǎn)品Ⅲ（t =15.34，P<0.05）。

2. PFA 值測定結(jié)果：11 例受試者完成PFA 測定，其中1 例皮膚黑化隨機(jī)出現(xiàn)，判定為無效數(shù)據(jù)。納入統(tǒng)計10 例，產(chǎn)品Ⅲ、產(chǎn)品Ⅳ、標(biāo)準(zhǔn)品PFA值分別為7.4±0.7、10.1±1.2、3.9±0.2，產(chǎn)品ⅣPFA值高于產(chǎn)品Ⅲ（t=24.66，P<0.05）。

討 論

SS 人群角質(zhì)層屏障功能受損，皮膚自我修復(fù)功能差，對一般護(hù)膚品的耐受能力較差，導(dǎo)致化妝品的選擇受限。此類人群使用的防曬化妝品，既要減少可能引起皮膚刺激或過敏的成分，又要添加促進(jìn)皮膚屏障修復(fù)、抑制炎癥反應(yīng)和神經(jīng)敏感性等的有效成分［9］，還要具備防曬功效，抵擋長波紫外線（UVA）和中波紫外線（UVB）對皮膚的損害。這是目前研究開發(fā)SS相關(guān)防曬化妝品的方向之一。既往防曬化妝品主要針對普通人群，其安全性檢測和防曬功效檢測方法同本文中提及的試驗方法，但專門適用于SS人群的防曬化妝品安全性和功效檢測方法尚未系統(tǒng)建立，受試者的篩選標(biāo)準(zhǔn)有別于普通人群受試者。目前行業(yè)內(nèi)缺乏標(biāo)準(zhǔn)的試驗方法，我國除防曬功效外，尚未建立其他化妝品功效評價方法，各化妝品人體檢測機(jī)構(gòu)可結(jié)合自身條件及企業(yè)要求建立合理的評價體系，作為化妝品功效宣稱的佐證資料，對于SS人群使用的化妝品尤其重要。

乳酸刺痛試驗被認(rèn)為是篩選SS最常用和最有效的方法，并可以用于SS 嚴(yán)重程度的評估［10］。本研究中，SS診斷標(biāo)準(zhǔn)為乳酸刺痛試驗評分值≥3分者。納入的40 例SS 受試者中，3 分者28 例，4 分者8 例，5 分者3 例，6 分者1 例，和患者的自覺癥狀相匹配。本研究中我們結(jié)合以往化妝品的檢測方法，綜合運(yùn)用主客觀評價的方式，首先采用國際通用的人體皮膚封閉型斑貼試驗對4 種SS 用防曬化妝品的安全性進(jìn)行檢測，這也是國家藥品監(jiān)督管理局規(guī)定的化妝品上市前需進(jìn)行的人體安全檢測方法之一。根據(jù)試驗結(jié)果，選擇2種安全性符合規(guī)范的防曬產(chǎn)品，繼續(xù)完成試用試驗及防曬功效檢測，結(jié)果顯示，在4 周長期試用試驗中，通過臨床評估觀察到2組受試者在使用前面部均有紅斑和脫屑，使用防曬產(chǎn)品Ⅲ和Ⅳ4周后面部紅斑情況明顯改善，可能與防曬產(chǎn)品減少了紫外線對皮膚的損害有關(guān)，提示2 種防曬產(chǎn)品長時間使用均具有較高的安全性。而水腫改善不明顯的原因可能和受試者的選擇有關(guān)，因為面部水腫明顯者均不納入試驗，脫屑改善不明顯則可能和試驗時間較短、皮膚屏障功能尚未完全修復(fù)有關(guān)。

表1 受試者使用2種防曬產(chǎn)品前后不同時間點的表皮失水率、角質(zhì)層含水量、黑素含量及油脂含量（±s）

表1 受試者使用2種防曬產(chǎn)品前后不同時間點的表皮失水率、角質(zhì)層含水量、黑素含量及油脂含量（±s）

注：a 與基線值比較，P<0.05

產(chǎn)品Ⅲ組（20例）產(chǎn)品Ⅳ組（20例）時間點基線2周4周F值P值表皮失水率（g·h-1·m-2）43.49±2.19 39.48±1.66 30.05±1.47a 12.57 0.038角質(zhì)層含水量（a.u.）41.23±3.28 43.39±2.58 62.35±2.67a 23.58 0.027黑素含量（/單位）182.57±5.67 149.78±4.78a 112.58±7.34a 45.34 0.015油脂含量（μg/cm2）79.04±2.35 80.98±3.24 80.12±2.68 2.78 0.354表皮失水率（g·h-1·m-2）43.27±3.54 39.15±1.78 30.37±1.28a 13.63 0.034角質(zhì)層含水量（a.u.）40.78±2.75 42.39±2.58 63.72±2.54a 27.53 0.023黑素含量（/單位）181.23±4.67 146.23±6.23a 103.47±5.48a 37.35 0.017油脂含量（μg/cm2）80.34±2.65 79.23±2.98 82.13±3.34 3.12 0.274

表2 受試者使用2種防曬產(chǎn)品前后各時點皮膚的乳酸刺痛試驗評分和總感覺評分比較（±s）

表2 受試者使用2種防曬產(chǎn)品前后各時點皮膚的乳酸刺痛試驗評分和總感覺評分比較（±s）

注：產(chǎn)品Ⅲ和產(chǎn)品Ⅳ組各包括20 例受試者。a 與基線值比較，P<0.05

時間點基線2周4周F值P值刺痛評分產(chǎn)品Ⅲ組3.01±1.80 2.98±1.20 1.55±1.89a 23.45<0.05產(chǎn)品Ⅳ組2.99±1.62 2.80±1.76 1.54±2.03a 18.73<0.05總感覺評分產(chǎn)品Ⅲ組6.84±3.53 6.43±4.02 4.44±4.05a 28.34<0.05產(chǎn)品Ⅳ組6.95±4.32 6.60±4.03 3.21±3.97a 43.12<0.05

表3 使用兩種防曬產(chǎn)品前后的臨床評估［總和，中位數(shù)（最小值，最大值）］

目前市面上較多防曬產(chǎn)品除具有防曬的功效外，同時添加了保濕舒緩及抗氧化等成分，故還具有滋潤保濕、滋養(yǎng)修護(hù)、修復(fù)皮膚屏障等功效。故在本次試驗中，還采用無創(chuàng)皮膚檢測技術(shù)進(jìn)行表皮失水率、皮膚角質(zhì)層含水量及油脂含量等的測定和對比，評價皮膚屏障功能［11?13］。結(jié)果顯示，2種防曬產(chǎn)品均可以降低表皮失水率，增加皮膚角質(zhì)層含水量，提示其能有效改善皮膚屏障功能，這也和防曬功效測試結(jié)果一致。且兩種產(chǎn)品對黑素含量降低程度差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），產(chǎn)品Ⅳ優(yōu)于產(chǎn)品Ⅲ，提示產(chǎn)品Ⅳ的防曬效果優(yōu)于產(chǎn)品Ⅲ。此外，乳酸刺痛試驗結(jié)果顯示，2種防曬產(chǎn)品使用后刺痛評分均顯著降低，提示其可以提高皮膚對刺激的耐受性，主要是對紫外線等物理刺激的耐受性。因此，通過上述測試可以觀察防曬產(chǎn)品使用前后SS生理狀況和耐受性的改善情況。

SS 人群對紫外線損害具有高反應(yīng)性，常通過一些炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子（NO 等）引起血管擴(kuò)張，往往成為加重病情的重要因素。紫外線中的UVB可引起皮膚曬傷或紅斑，UVA 主要引起皮膚色素沉著，導(dǎo)致皮膚光老化。而日常防曬化妝品的實際使用量遠(yuǎn)低于試驗中的劑量（2 mg/cm2），這會明顯降低防曬化妝品的防護(hù)效果［14］。目前對于防曬劑的功效評價體系正在不斷完善，我國在防曬劑的研發(fā)、評價等方面與發(fā)達(dá)國家相比還有一定差距。本研究嚴(yán)格按照國際標(biāo)準(zhǔn)化組織（ISO）關(guān)于UVB 防護(hù)人體評價方法和UVA防護(hù)人體評價方法的國際標(biāo)準(zhǔn)（即ISO24444 和ISO24442），采用紫外日光模擬儀對兩種防曬產(chǎn)品進(jìn)行SPF 及PFA 測試。結(jié)果顯示，防曬產(chǎn)品Ⅲ和Ⅳ均有明顯的防曬效果，產(chǎn)品Ⅲ的SPF 值平均為31.5，PFA 值平均為7.4，產(chǎn)品Ⅳ的SPF值平均為51.8，PFA值平均為10.1，提示產(chǎn)品Ⅳ的防曬效果優(yōu)于產(chǎn)品Ⅲ，結(jié)果和預(yù)測值相符。結(jié)合人體皮膚封閉型斑貼試驗、長期試用試驗的結(jié)果，最后推薦防曬產(chǎn)品Ⅳ的配方更適合SS 人群使用。但也有研究顯示，高SPF值的防曬產(chǎn)品易引起皮膚刺激反應(yīng)，且皮膚刺激反應(yīng)的程度隨SPF值增加呈加重趨勢［15］，對于SS人群來說，實際生活中無需一味追求高SPF值和PFA值的防曬產(chǎn)品，還需考慮產(chǎn)品安全性。

目前關(guān)于防曬化妝品防曬效果的評價方法國內(nèi)外尚未統(tǒng)一。我們借鑒美國食品藥品管理局推薦的測試方法，按照國際標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行人體檢測，將人作為測試對象，用人工光源進(jìn)行測定，所得的防曬化妝品SPF值和PFA值是可靠的；采用主客觀評價相結(jié)合的方法，從產(chǎn)品的安全性和功效性入手，篩選出更適合SS 皮膚人群使用的防曬化妝品，并對其安全性和防曬功效進(jìn)行了評價。但由于受試者個體差異大，所測結(jié)果和皮膚類型、皮膚表面情況、出汗情況、汗液中尿苷酸含量等有關(guān)，因此試驗中需考慮上述因素的影響。該研究為SS皮膚人群選擇防曬化妝品提供了一定的理論依據(jù)和參考，但由于試驗中未設(shè)立方法對照組，故尚不能作為適用性評價方法標(biāo)準(zhǔn)，僅供參考。在后續(xù)試驗中將綜合國內(nèi)多家化妝品人體檢驗機(jī)構(gòu)的試驗方法進(jìn)行對比，建立一套完整且科學(xué)的SS防曬化妝品適用性評價方法體系。

志謝重慶市中醫(yī)院皮膚科王禹毅老師對統(tǒng)計學(xué)分析的指導(dǎo)

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突