啶蟲(chóng)脒在茉莉花上的殘留動(dòng)態(tài)及膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

朱富偉，葉 倩，黃玉芬，黃聰靈，王富華，萬(wàn) 凱*

（1.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品公共監(jiān)測(cè)中心，廣州 510640；2.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室（廣州），廣州 510640；3.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)與評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州 510640）

啶蟲(chóng)脒（Acetamiprid）又名莫比朗、吡蟲(chóng)清、NI-25，屬于氯化煙酰亞胺類新型高效殺蟲(chóng)劑，是繼吡蟲(chóng)啉、烯啶蟲(chóng)胺之后，在母體化合物（Nithiazin）的化學(xué)結(jié)構(gòu)上引入雜環(huán)2-氯-5-吡啶甲基活性基團(tuán)而形成的[1-2]。其主要作用于昆蟲(chóng)神經(jīng)系統(tǒng)突觸后膜的煙堿乙酰膽堿受體（nAChR），具有觸殺、胃毒和內(nèi)吸等殺蟲(chóng)活性，屬于非質(zhì)子化選擇性殺蟲(chóng)劑，具有對(duì)環(huán)境友好、高效、低毒等優(yōu)點(diǎn)[3-5]。啶蟲(chóng)脒獨(dú)特的作用機(jī)理及廣譜高效的殺蟲(chóng)特點(diǎn)，使其逐漸作為氨基甲酸酯、有機(jī)磷類農(nóng)藥的重要替代品而得到廣泛應(yīng)用。為了保障農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全、消費(fèi)安全，推進(jìn)農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化，增強(qiáng)國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力，關(guān)于啶蟲(chóng)脒，我國(guó)已經(jīng)制定了多項(xiàng)限農(nóng)藥殘留量標(biāo)準(zhǔn)[6]。

茉莉花［Jasminum sambac（L.）Ait］屬木犀科素馨屬灌木，喜溫暖濕潤(rùn)，廣泛植栽于亞熱帶地區(qū)，主要化學(xué)成分為生物堿、糖苷類化合物、黃酮類化合物、揮發(fā)油、芳樟醇、β-羅勒烯、苯甲酸甲酯、萜類、木脂素、脂肪類化合物等，因此常作為花茶和香精的重要原料，其根、葉和花均可入藥，具有很高的經(jīng)濟(jì)及藥用價(jià)值[7-9]。據(jù)報(bào)道，截至2018年，全國(guó)茉莉花種植面積近18.5萬(wàn)畝，同時(shí)也形成了以廣西橫縣、四川犍為縣、福建福州市和云南元江縣為中國(guó)茉莉花及茉莉花茶4大主產(chǎn)區(qū)的地理優(yōu)勢(shì)[10]。隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人們對(duì)茉莉花（茶）消費(fèi)量不斷增加，而茉莉花常年因病蟲(chóng)害導(dǎo)致15%～30%的減產(chǎn)，嚴(yán)重時(shí)局部可達(dá)40%～60%，甚至出現(xiàn)無(wú)花可收獲的現(xiàn)象[11]。茉莉花病蟲(chóng)害的防治在實(shí)際生產(chǎn)中多采用化學(xué)防治，因此，農(nóng)藥殘留所造成的環(huán)境污染及產(chǎn)品的安全性等問(wèn)題不容忽視。茉莉花（茶）的質(zhì)量安全不僅關(guān)系到出口貿(mào)易，也關(guān)系到消費(fèi)者身體健康[12]。

目前，我國(guó)[6]及國(guó)際食品法典委員會(huì)（CAC）、美國(guó)、澳大利亞、歐盟、韓國(guó)、日本[13]均無(wú)關(guān)于茉莉花上啶蟲(chóng)脒的殘留限量的報(bào)道。本文建立了優(yōu)化的樣品前處理方法，通過(guò)超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（LC-MS/MS）對(duì)啶蟲(chóng)脒在茉莉花中消解動(dòng)態(tài)及殘留進(jìn)行分析，并對(duì)茉莉花中可能攝入的啶蟲(chóng)脒的膳食風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行了初步評(píng)估，為在茉莉花上安全使用啶蟲(chóng)脒提供科學(xué)指導(dǎo)，同時(shí)為制定啶蟲(chóng)脒在茉莉花上最大殘留限量值（MRL）提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料

1 000 mg/L啶蟲(chóng)脒標(biāo)準(zhǔn)品（純度不小于99%），農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境質(zhì)檢中心（天津）；5.0%啶蟲(chóng)脒乳油，內(nèi)蒙古帥旗生物科技股份有限公司；乙腈、甲醇、甲酸（色譜純）；無(wú)水MgSO4、NaCl（分析純）；液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀（LCMS-8050三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀），日本島津公司；Milli-Q超純水器，美國(guó)Merk Millipore公司；Multi Reax自動(dòng)渦旋儀，德國(guó)Heidolph公司；高速離心機(jī)，湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司。

1.2 田間試驗(yàn)

NY/T 788—2004根據(jù)《農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》[14]和《農(nóng)藥登記殘留田間試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》[15]進(jìn)行田間試驗(yàn)。試驗(yàn)時(shí)間：2018年6—12月。試驗(yàn)地點(diǎn)：福建省福州市（寶珠茉莉）；浙江省蘭溪市（雙瓣茉莉）；廣西壯族自治區(qū)南寧市（雙瓣茉莉）；云南省玉溪市（當(dāng)?shù)仄贩N）。供試藥劑信息：5%啶蟲(chóng)脒乳油在茉莉花上防治蚜蟲(chóng)、潛葉蛾、茶小綠葉蟬。推薦有效成分使用劑量：16.7～33 mg/kg；施藥方法：噴霧；按750 L/hm2加水，施藥1～2次，施藥間隔7 d。安全間隔期7 d。

1.2.1 消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)

消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)在浙江和廣西兩地進(jìn)行，試驗(yàn)面積為100 m2，根據(jù)田間試驗(yàn)操作規(guī)程不設(shè)重復(fù)[16]，于茉莉花植株生長(zhǎng)中期施藥，施藥濃度定為最高推薦劑量的1.5倍，兌水一次性噴霧處理[11]。藥后分別間隔2 h，1、3、5、7、10、14和21 d，視植株大小，在小區(qū)內(nèi)用隨機(jī)多點(diǎn)（至少十二點(diǎn)）的方式剪取地上部分嫩枝（帶葉和花），重復(fù)3次，每次采樣量不少于1 kg，樣品均貯存于-18℃。不同處理小區(qū)間設(shè)保護(hù)隔離區(qū)。

1.2.2 最終殘留試驗(yàn)

設(shè)高、低2個(gè)施藥劑量處理。高、低劑量分別進(jìn)行2、3次施藥處理，每個(gè)處理設(shè)3次重復(fù)，其中高劑量為49.5 mg/kg（1.5倍最高推薦劑量），低劑量為33 mg/kg（最高推薦劑量）。于茉莉花初期開(kāi)始施藥，施藥7 d。末次施藥后間隔7、14和21 d，在小區(qū)內(nèi)用隨機(jī)多點(diǎn)（至少十二點(diǎn)）的方式剪取茉莉花花蕾，采樣量不少于2 kg。每個(gè)樣品平均分成兩份，一份作為鮮樣，另一份按當(dāng)?shù)氐能岳蚧ú柚谱鞴に囍瞥筛蓸覽15]。樣品均貯存于-18℃。不同處理小區(qū)間設(shè)保護(hù)隔離區(qū)。

1.3.1 樣品前處理

茉莉花鮮樣：準(zhǔn)確稱取5 g勻漿的樣品于50 mL具塞離心管中，加入10 mL乙腈，渦旋5 min。隨后加入2 g NaCl渦旋1 min。4500 r/min離心5 min，取上清液，過(guò)0.22 μm有機(jī)系濾膜，待測(cè)。茉莉花干樣：準(zhǔn)確稱取5 g，加入5 mL超純水浸潤(rùn)5 min，用20 mL的乙腈溶液提取（體積比1∶4），其余按照茉莉花鮮樣前處理步驟。茉莉花植株：準(zhǔn)確稱取5 g，用10 mL的乙腈溶液提取，其余按照茉莉花鮮樣前處理步驟。

1.3.2 HPLC-MS/MS條件

色譜柱：島津Shim-pack XR-ODSIII（2 mm×150 mm，1.6 μm）；柱溫：40℃；流速：0.4 mL/min；進(jìn)樣量：1 μL；流動(dòng)相：A為0.1%甲酸水，B為乙腈；梯度洗脫程序：0～0.5 min（10%B），0.5～5.0 min（10%～95%B），5.0～7.0 min（95%B），7.0～7.1 min（10%～95%B）；離子源：電噴霧離子源ESI；掃描方式：正離子源；加熱模塊：400℃；脫溶劑溫度：250℃；霧化器氣流量：3 L/min；干燥氣流量：10 L/min；檢測(cè)方式：啶蟲(chóng)脒質(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)如表1。

表1 啶蟲(chóng)脒質(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)

1.4 膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

膳食暴露和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估采用式（1）、（2）計(jì)算：

式中：NEDI為國(guó)家估算每日攝入量，mg/(kg bw)；Fi為食物攝入量，kg；STMRi為第i類初級(jí)食用農(nóng)產(chǎn)品的；bw為中國(guó)居民的平均體重，kg；RQ為風(fēng)險(xiǎn)商，%；ADI為每日允許攝入量，mg/(kg bw)。RQ值越高表示接觸農(nóng)藥的風(fēng)險(xiǎn)越高；RQ＞1表示對(duì)人類健康的風(fēng)險(xiǎn)不能接受。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析采用Excel 7.0軟件處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測(cè)方法的線性范圍及檢出限

將1 000 mg/L的啶蟲(chóng)脒標(biāo)準(zhǔn)溶液用茉莉花基質(zhì)空白配 得0.001、0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1.0 mg/L系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。在上述液相色譜/質(zhì)譜條件下進(jìn)行測(cè)定，以啶蟲(chóng)脒標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（x）與監(jiān)測(cè)離子峰面積（y）作標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，在0.001～1.0 mg/L濃度范圍內(nèi)啶蟲(chóng)脒在茉莉花鮮重、干樣和植株中的線性回歸方程分別為y=7 405 903.56 x-13 184.05；y=12 490 799.05 x＋76 550.40；y=9 972 034.81 x＋32 393.57，相關(guān)系數(shù)r均為1.000，表明線性關(guān)系良好。在上述檢測(cè)條件下，啶蟲(chóng)脒在茉莉花鮮樣、干樣和植株中最低檢出限（LOD值，即3倍信噪比時(shí)所測(cè)得的質(zhì)量）均為0.001 ng。

2.2 檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性和精密度

稱取勻漿后的茉莉花空白鮮樣、干樣以及植株各5 g，分別添加3個(gè)0.01、0.1、0.5 mg/L最終濃度水平，茉莉花植株空白樣增加2個(gè)5、10 mg/L最終濃度水平，每個(gè)重復(fù)5次，渦旋混合均勻后放置過(guò)夜12 h，用上述分析方法測(cè)定回收率，并計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。由表2可知，在0.01～0.5 mg/kg添加水平下，茉莉花鮮樣、干樣及植株中啶蟲(chóng)脒的平均回收率分別為84.0%～93.4%，82.0%～92.4%，85.2～91.0%；相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.6%～6.5%，2.1%～5.5%，4.6%～8.2%；定量限（LOQ）均為0.01 mg/kg。在5 mg/kg添加水平時(shí)，茉莉花植株中啶蟲(chóng)脒的回收率為89.2%；相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.8%，由于在添加水平為5 mg/kg時(shí)，按照茉莉花植株的前處理方法，實(shí)際上機(jī)濃度為2.5 mg/kg，儀器檢測(cè)基本接近飽和。

表2 啶蟲(chóng)脒在茉莉花中的添加回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

2.3 啶蟲(chóng)脒在茉莉花中的消解動(dòng)態(tài)

由表3可知，浙江和廣西地區(qū)的消解試驗(yàn)中，啶蟲(chóng)脒在茉莉花植株上的原始沉積量分別為6.14、1.71 mg/kg，其消解動(dòng)態(tài)均符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程，對(duì)啶蟲(chóng)脒消解時(shí)間t（d）后的殘留量Ct進(jìn)行回歸分析得，消解曲線分別為Ct= 5.42 e-0.38t（r=0.990），Ct=1.22 e-0.49t（r=0.987）；消解半衰期（t1/2）分別為1.8、1.4 d。啶蟲(chóng)脒在浙江茉莉花植株樣品中殘留量大于其最大添加濃度，為避免檢測(cè)時(shí)出現(xiàn)飽和現(xiàn)象而影響實(shí)際檢測(cè)結(jié)果，實(shí)際檢測(cè)中定溶時(shí)用乙腈稀釋2倍上機(jī)檢測(cè)。

表3 啶蟲(chóng)脒在茉莉花中的消解動(dòng)態(tài)

2.4 啶蟲(chóng)脒在茉莉花中的最終殘留

在福建、浙江、廣西、云南4地的最終殘留試驗(yàn)中，5%啶蟲(chóng)脒乳油按33、49.5 mg/kg兩個(gè)劑量，施藥2～3次，施藥間隔期為7 d，施藥7、14、21 d后采樣檢測(cè)分析，結(jié)果如表4所示。施藥后7 d時(shí)，啶蟲(chóng)脒在茉莉花鮮樣和干樣中的最終殘留量分別不大于0.15 mg/kg、不大于0.11 mg/kg，施藥后14 d時(shí)分別為小于0.01 mg/kg、不大于0.11 mg/kg，施藥后21 d時(shí)均小于0.01 mg/kg。

2.5 膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)最大化原則及啶蟲(chóng)脒在我國(guó)登記作物的具體情況，本文取已登記作物在食物種類中殘留限量值（MRL）的最大值作為STMRi，ADI值為0.07 mg/kg。選取施藥后安全間隔期（7 d）時(shí)茉莉花干樣的殘留中值（表4，0.02 mg/kg）進(jìn)行膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，結(jié)果如表5所示。普通人群啶蟲(chóng)脒的國(guó)家估算每日攝入量（NEDI）為0.925 mg/kg，風(fēng)險(xiǎn)概率為21.0%（即占日允許攝入量）。

表4 啶蟲(chóng)脒在茉莉花中的最終殘留量

表5 啶蟲(chóng)脒風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估計(jì)算表

3 結(jié)論與討論

本研究采用優(yōu)化的樣品前處理方法并結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）技術(shù)，建立了茉莉花中啶蟲(chóng)脒的檢測(cè)方法。鮮樣和干樣的最小檢出量均為0.001 ng，空白添加平均回收率為84.0%～93.4%，82.0%～92.4%；相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.6%～6.5%，2.1%～5.5%，定量限均為0.01 mg/kg，該方法檢出限、準(zhǔn)確度、精密度及定量限均符合《農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》[17]中的規(guī)定，且操作簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性好，可以滿足茉莉花中啶蟲(chóng)脒殘留檢測(cè)分析要求。

消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)測(cè)得啶蟲(chóng)脒在茉莉花上的消解半衰期為1.4～1.8 d，均低于其在辣椒上半衰期2.24～4.84 d[18]，及在茄子中的半衰期1.96～2.31 d[19]和溫室條件下西葫蘆中的半衰期1.9～2.5 d[20]，與芥菜中的半衰期1.02～1.59 d[21]基本一致，屬于易降解農(nóng)藥。啶蟲(chóng)脒在兩地茉莉花上的消解速率隨著采樣時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)逐漸降低的趨勢(shì)，消解快、規(guī)律性較好。啶蟲(chóng)脒在兩地茉莉花上的原始沉積量不同，這可能由于受當(dāng)?shù)赝寥李愋?、栽培方式和氣候影響[22]而導(dǎo)致的作物具體生長(zhǎng)狀況不同，如疏密程度，植株大小等。此外，這種差異也和施藥器械，施藥人員有關(guān)。

目前，關(guān)于茉莉花采摘后在制干過(guò)程中農(nóng)藥殘留的變化研究報(bào)道較少。本研究按規(guī)范試驗(yàn)要求[15]進(jìn)行最終殘留試驗(yàn)。結(jié)果表明，施藥后7、14、21 d時(shí)鮮樣和干樣中啶蟲(chóng)脒的殘留量中值都相同，分別為0.02、0.01、0.01 mg/kg；而殘留最大值14 d時(shí)干樣明顯大于鮮樣，這可能由于茉莉花在干燥過(guò)程中失水導(dǎo)致。據(jù)Monika等[23]報(bào)道啶蟲(chóng)脒在紅茶加工干燥過(guò)程中的降解率為69%～74%，而加工過(guò)程涉及萎凋、干燥及發(fā)酵等復(fù)雜工藝，均可對(duì)其降解產(chǎn)生影響，因此對(duì)本研究中的該現(xiàn)象有待進(jìn)一步的研究。

本研究取最終殘留試驗(yàn)安全間隔期時(shí)茉莉花干樣中啶蟲(chóng)脒的殘留中值，根據(jù)《食品中農(nóng)藥殘留風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估指南》[24]進(jìn)行初步膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。結(jié)果表明，該農(nóng)藥在普通人群的國(guó)家估算每日攝入量（NEDI）為0.925 mg/kg，風(fēng)險(xiǎn)概率為21.0%，低于100%，說(shuō)明規(guī)范試驗(yàn)條件下茉莉花中啶蟲(chóng)脒的殘留量不會(huì)對(duì)一般人群健康產(chǎn)生風(fēng)險(xiǎn)。在此基礎(chǔ)上參考《食品中農(nóng)藥最大殘留限量制定指南》中農(nóng)藥最大殘留限量制修訂原則，施藥后安全間隔期（7 d）時(shí)茉莉花鮮樣和干樣的最大殘留值（MRL）為0.15和0.11 mg/kg，推薦啶蟲(chóng)脒在茉莉花鮮樣和干樣上的MRL值分別為0.5和0.3 mg/kg。