喉癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)與COX-2 表達(dá)的關(guān)系研究

代文意，魏鑫鑫

（南陽市中心醫(yī)院，河南 南陽473009）

喉癌時咽喉部常見的惡性腫瘤,雖然目前喉癌的根治性手術(shù)切除率及綜合治療措施有明顯的進(jìn)步,但是術(shù)后腫瘤的復(fù)發(fā)仍然是影響患者生存期的最主要的原因[1]。與喉癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的相關(guān)因素較多,在具有相關(guān)臨床高危因素的患者中,喉癌術(shù)后復(fù)發(fā)導(dǎo)致的患者病情進(jìn)展的風(fēng)險更高,而且復(fù)發(fā)后腫瘤進(jìn)展的更快[2]。 通過對相關(guān)的高位因素的分析，進(jìn)而對喉癌術(shù)后復(fù)發(fā)進(jìn)行預(yù)測,能夠為喉癌的臨床治療提供參考。 喉癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移與腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移相關(guān)的細(xì)胞因子關(guān)系極為密切,環(huán)氧化酶-2（COX-2）是前列腺素合成過程中的限速酶，在正常狀態(tài)處于低表達(dá)狀態(tài)，而生長因子、炎癥介質(zhì)及促癌基因等能夠誘導(dǎo)COX-2 的表達(dá)，COX-2 能夠誘導(dǎo)氧化應(yīng)激反應(yīng),加劇游離自由基對于癌細(xì)胞核基因的整合,提高上皮細(xì)胞核DNA 的分裂速度[3,4]。 COX-2能夠提高癌細(xì)胞粘附能力,促進(jìn)癌細(xì)胞對于基底膜組織的浸潤,最終影響到喉癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移[5]。為了揭示COX-2 蛋白的表達(dá)與喉癌患者的病情關(guān)系，從而為臨床上喉癌的診療提供參考,本次研究選取2 013 年1 月-2015 年8 月我院實施手術(shù)治療的喉癌患者81 例,探討了COX-2 蛋白的表達(dá)及其與喉癌患者的病情關(guān)系,分析了喉癌術(shù)后復(fù)發(fā)的高危因素，報告如下。

1 對象與方法

1.1 對象選取 2013 年1 月-2015 年8 月我院實施手術(shù)治療的喉癌患者81 例，對患者進(jìn)行3 年隨訪，根據(jù)是否發(fā)生局部復(fù)發(fā)分為復(fù)發(fā)組27 例和未復(fù)發(fā)組54 例。 復(fù)發(fā)組，患者年齡42~71 歲，平均56.1±10.4 歲；性別構(gòu)成：男17 例、女10 例。未復(fù)發(fā)組，患者年齡38~75 歲，平均58.0±11.5 歲；性別構(gòu)成：男38 例、女16 例。 兩組患者的年齡、性別情況比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 相關(guān)標(biāo)準(zhǔn) 診斷標(biāo)準(zhǔn)：喉癌患者的診斷參考中華醫(yī)學(xué)會制定的標(biāo)準(zhǔn)[6]；納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴經(jīng)病理學(xué)檢查證實；⑵在我院接受手術(shù)治療；⑶術(shù)前無放化療史；⑷均為原發(fā)性喉癌；⑸本研究符合《赫爾辛基宣言》相關(guān)醫(yī)學(xué)倫理規(guī)定。 排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴合并其他部位的惡性腫瘤；⑵病理診斷不明確；⑶伴有免疫系統(tǒng)疾??；⑷未能參與術(shù)后隨訪；⑸因其他疾病導(dǎo)致死亡。

1.3 方法

1.3.1 免疫組化染色技術(shù) 采用石蠟切片, 脫水操作后采用3%H2O2室溫條件下孵育20min， 磷酸鹽緩沖液清洗3 次，每次5min，磷酸鹽緩沖液稀釋后的山羊血清封閉抗體5min，倒去血清后不清洗，加入一抗(購自賽默飛世爾中國1:1000)5ml,37℃孵育2h，或者放置4℃冰箱過夜孵育，磷酸鹽緩沖液清洗3 次,每次5min,加入生物素?zé)晒鈽?biāo)記的二抗（購自賽默飛世爾中國1:2000）3ml,37℃孵育20~30 min,磷酸鹽緩沖液清洗3 次,每次5min,加入Streptavidin/HRP 辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素，37℃孵育20~30min，磷酸鹽緩沖液清洗3 次，每次5min，增強型HRP-DAB 底物顯色試劑盒(PA110)顯色，自來水沖洗，復(fù)染，封片。

1.3.2 免疫組化讀片 免疫組化結(jié)果判定：COX-2蛋白的陽性著色表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，呈黃色、棕黃色、褐色表達(dá)，⑴根據(jù)著色強度：0 分為無色、1 分為淡黃色、2 分為棕黃色、3 分為褐色、黑色；⑵根據(jù)陽性細(xì)胞比例： 陽性細(xì)胞數(shù)目所占比例≤10%為1分、陽性細(xì)胞所占比例11%～50%為2 分、陽性細(xì)胞數(shù)51%～75%為3 分、陽性細(xì)胞數(shù)所占比例>75%為4 分，兩種積分相乘總分<3 分為陰性、≧3 分為陽性；總分<3 分, “-”表達(dá)；為3～5 分，“+”表達(dá)；為6～9 分，“++”表達(dá)；>9 分，“+++”表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計分析 本研究中所有數(shù)據(jù)的分析均采用SPSS21.0 版本，年齡采用x±s 表示，組間比較采用t檢驗；COX-2 蛋白陽性表達(dá)率組間比較采用秩和檢驗或χ2檢驗；多因素分析采用Logistic 回歸分析法；P<0.05 為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組患者的COX-2 蛋白表達(dá)對比 經(jīng)秩和檢驗分析，復(fù)發(fā)組患者手術(shù)后喉癌組織中的COX-2 蛋白表達(dá)強度顯著高于未復(fù)發(fā)組患者，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；見表1。

表1 復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組患者的COX-2 蛋白表達(dá)對比[n（%）]

2.2 復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組患者的病理學(xué)特征對比復(fù)發(fā)組患者的低分化占比、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率均高于未復(fù)發(fā)組的患者,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組患者的TNM 分期、腫瘤位置分布比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；見表2。

表2 復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組患者的病理學(xué)特征對比

2.3 影響喉癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的多因素分析 采用Logistic 回歸分析，以術(shù)后是否復(fù)發(fā)作為因變量，結(jié)果2.1 及2.2 中具有統(tǒng)計學(xué)意義的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、COX-2 表達(dá)情況作為自變量，結(jié)果顯示分化程度越低、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、COX-2 陽性表達(dá)是喉癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的獨立危險因素(P<0.05);見表3。

表3 影響喉癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的多因素分析

3 討論

喉癌術(shù)后復(fù)發(fā)與多種因素有關(guān),其中腫瘤的惡性生物學(xué)行為與術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的發(fā)生關(guān)系最為密切[7]。 有研究顯示[8]，在具有組織分級惡化或者增殖指數(shù)KI-67 明顯上升的喉癌患者中，其3 內(nèi)或者5內(nèi)的復(fù)發(fā)風(fēng)險可超過15%以上。 臨床上復(fù)發(fā)的喉癌患者,其無瘤生存時間及無進(jìn)展生存期均明顯的縮短,腫瘤惡病質(zhì)或者多發(fā)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的風(fēng)險也明顯上升[9]。 因此較早的對喉癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險進(jìn)行評估并加以干預(yù), 對于改善患者的預(yù)后具有積極的作用。 鱗狀上皮細(xì)胞抗原對喉癌的復(fù)發(fā)具有一定的預(yù)測價值, 但其預(yù)測的漏診或者假陽性率仍然較高,預(yù)測的可參考性并不高。 COX-2 蛋白是與腫瘤惡性生物學(xué)行為密切相關(guān)的細(xì)胞因子,其與腫瘤的增殖及侵襲能力密切相關(guān)。 COX-2 蛋白對于腫瘤細(xì)胞膜穩(wěn)定性的破壞作用,能夠提高腫瘤細(xì)胞結(jié)構(gòu)蛋白的翻譯合成速度, 影響到癌細(xì)胞的擴增風(fēng)險[10,11]。有研究者探討了COX-2 蛋白在喉癌患者中的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)在喉癌患者病灶組織中，COX-2 蛋白的表達(dá)陽性率可超過30%以上[12],但缺乏對于C OX-2 的表達(dá)與喉癌術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系研究。 本次研究通過對喉癌術(shù)后復(fù)發(fā)患者病灶組織中COX-2蛋白的表達(dá)分析,能夠在部分揭露喉癌復(fù)發(fā)機制的同時，為臨床上喉癌的復(fù)發(fā)提供高危預(yù)測性指標(biāo)。

本次研究重點探討了COX-2 蛋白在喉癌患者中的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)在復(fù)發(fā)的喉癌患者病灶組織中，COX-2 蛋白的表達(dá)陽性率水平明顯上升，高于未復(fù)發(fā)的喉癌患者，統(tǒng)計學(xué)差異顯著，表明COX-2蛋白的高表達(dá)能夠影響到喉癌的術(shù)后復(fù)發(fā)過程。COX-2 蛋白的高表達(dá)對于喉癌復(fù)發(fā)影響的機制，主要在于COX-2 蛋白能夠通過影響到殘留癌細(xì)胞染色體末端結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性,提高氧化應(yīng)激環(huán)境中癌細(xì)胞基因突變的風(fēng)險,最終促進(jìn)殘留癌細(xì)胞的異常增殖和異常分化過程。 有其他研究者也認(rèn)為，在喉癌患者病灶組織中，COX-2 蛋白的表達(dá)陽性率水平可隨著患者臨床預(yù)后的惡化而明顯上升，特別是在合并有遠(yuǎn)期復(fù)發(fā)或者遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者中，COX-2 蛋白的高表達(dá)態(tài)勢更為明顯[13]。 對于復(fù)發(fā)及未復(fù)發(fā)喉癌患者進(jìn)行臨床病理特征的對比，發(fā)現(xiàn)在復(fù)發(fā)組喉癌患者中,其癌細(xì)胞分化程度往往較低，同時癌細(xì)胞低分化的占比更高，提示了癌細(xì)胞分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移對于喉癌術(shù)后復(fù)發(fā)的影響。分析其原因,考慮由于低分化的癌細(xì)胞，其生物學(xué)行為的惡化較為明顯，浸潤及轉(zhuǎn)移的風(fēng)險較高，從而增加了喉癌復(fù)發(fā)的可能； 而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者,其癌細(xì)胞播散的風(fēng)險也往往較高，癌細(xì)胞的過度播散影響到了手術(shù)根治性切除的效果,導(dǎo)致喉癌術(shù)后復(fù)發(fā)的發(fā)生[14,15]。 但本次研究并未發(fā)現(xiàn)喉癌臨床分期或者喉癌位置對于喉癌復(fù)發(fā)的影響,提示臨床分期的改變并不會影響到殘留癌細(xì)胞的復(fù)發(fā)風(fēng)險。 危險因素分析可見，分化程度越低、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、COX-2 陽性表達(dá)是喉癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的獨立危險因素,提示臨床上對于相關(guān)高危因素的患者，應(yīng)采用綜合性的治療措施，進(jìn)而改善喉癌患者的臨床結(jié)局。 術(shù)后復(fù)發(fā)的喉癌患者生存期降低的重要原因,但臨床并無有效的喉癌術(shù)后復(fù)發(fā)預(yù)測指標(biāo)。 而本組研究通過檢測研究發(fā)現(xiàn)，術(shù)后復(fù)發(fā)的喉癌患者中，COX-2 蛋白的表達(dá)陽性率較高, 同時COX-2 高表達(dá)、癌細(xì)胞低分化或者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，是影響喉癌復(fù)發(fā)的獨立風(fēng)險因素，COX-2 等指標(biāo)或可能成為喉癌術(shù)后復(fù)發(fā)預(yù)測指標(biāo)。

綜上所述, 本次研究對于喉癌患者中COX-2蛋白的表達(dá)分析,能夠為臨床上喉癌的治療提供高危預(yù)測性指標(biāo)。