牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞治療慢性移植物抗宿主病的機(jī)制分析

李紅瑛 XI DANG

（1 古巴哈瓦那醫(yī)科大學(xué) 古巴 哈瓦那 999075）

（2 羅西奧大學(xué) 西班牙 塞維利亞 999023）

器官移植是目前很多疾病治療的重要方法，能夠代替衰竭器官維持正常功能。慢性移植物抗宿主病是器官移植術(shù)后常見并發(fā)癥，常規(guī)免疫抑制藥物在該病治療中的效果不夠理想，甚至增加了患者身體的負(fù)擔(dān)[1]。慢性移植物抗宿主病的發(fā)病時(shí)間常見于術(shù)后3 個(gè)月之后，除了T 細(xì)胞激活外，還伴隨B 細(xì)胞以及體液免疫激活[2]。間充質(zhì)干細(xì)胞能夠分泌多種生長因子以及免疫保護(hù)細(xì)胞因子，對于促進(jìn)組織修復(fù)、抑制免疫細(xì)胞活化具有較好的效果，隨著臨床研究的深入，發(fā)現(xiàn)其在細(xì)胞移植、器官移植等領(lǐng)域有著較高的應(yīng)用價(jià)值[3]。文章主要針對牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞治療慢性移植物抗宿主病的機(jī)制展開分析，報(bào)道如下。

1. 資料與方法

1.1 材料與試劑

本次研究實(shí)驗(yàn)小鼠由醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室提供，相關(guān)試劑為美國Gibco 公司進(jìn)口。

1.2 方法

從人牙齦組織中采集牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞，通過建立慢性移植物抗宿主病小鼠樣本，并分為觀察組與對照組，然后將牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞注入觀察組慢性移植物抗宿主病小鼠模型。

牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞采集方法：牙齦組織剪碎并使用PBS 緩沖液沖洗，然后放在0.4% 分散酶的PBS 緩沖液中，置于37℃孵育箱中30min，剝離牙齦上皮組織并加入I 型膠原酶靜置50min，然后使用70mm 濾網(wǎng)過濾并加入培養(yǎng)液，使用DMEM 培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。使用顯微鏡進(jìn)行單細(xì)胞采集并轉(zhuǎn)移至生長培養(yǎng)基。

慢性移植物抗宿主病小鼠樣本建立方法：第1 天從小鼠尾靜脈注射60mg/kg 環(huán)磷酰胺，第2 天全身照射200cGy 放射線，觀察組小鼠第3 天尾靜脈注射間充質(zhì)干細(xì)胞（2×106）,。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察兩組小鼠模型的病情變化，從而分析其治療機(jī)制。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS16.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用t值檢驗(yàn)，P＜0.05 時(shí)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2. 結(jié)果

觀察組小鼠IL-4、IL-6、IFN-γ 以及TNF-α 水平明顯低于對照組小鼠（P＜0.05），見表1。

表1 兩組小鼠炎癥因子指標(biāo)差異（±s）

表1 兩組小鼠炎癥因子指標(biāo)差異（±s）

組別 IL-4（pg/ml） IL-6（pg/ml） IFN-γ（ml/U） TNF-α（pg/ml）觀察組 122.5±23.6 88.6±14.8 65.8±11.5 74.6±11.5對照組 145.6±36.5 110.6±25.6 86.9±16.4 94.2±17.8 t 5.485 5.201 5.124 5.220 P 0.044 0.042 0.041 0.042

3. 討論

目前臨床研究證實(shí)了牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞在多種免疫性疾病臨床治療中具有較好的應(yīng)用效果，本次研究主要針對其在慢性移植物抗宿主病中的治療機(jī)制展開分析。目前牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞主要是通過口腔組織獲取，創(chuàng)口較小且采集難度低，具有較好的擴(kuò)增能力，在保持一定數(shù)量的前提下具有較好的免疫調(diào)節(jié)效果，能夠通過控制細(xì)胞數(shù)量來減小成瘤風(fēng)險(xiǎn)[4]。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究的深入，發(fā)現(xiàn)牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞能夠有效抑制B 細(xì)胞分泌免疫球蛋白，從而減少自體免疫性疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，例如IgG可引起慢性免疫相關(guān)炎癥，IgM 可引起風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等，因此通過抑制B 細(xì)胞的表達(dá)能力能夠減輕自體免疫疾病的發(fā)生率。B 細(xì)胞主要在機(jī)體中起到介導(dǎo)體液免疫的作用，成熟的B 細(xì)胞能夠分化增殖為漿細(xì)胞，合成抗體，從而達(dá)到免疫的效果。

白細(xì)胞介素（IL）是多種細(xì)胞產(chǎn)生的一類細(xì)胞因子，功能復(fù)雜，在免疫細(xì)胞成熟、活化、增殖以及免疫調(diào)節(jié)中起到了重要的作用，同時(shí)參與人體多種生理與病理反應(yīng)。IL-4 能夠促使B 細(xì)胞分裂防止，增強(qiáng)B 細(xì)胞的抗原遞呈能力，還能夠促使B 細(xì)胞分泌IgE。IL-6 能夠促使B 細(xì)胞繁殖，參與炎癥反應(yīng)，作用靶細(xì)胞較多，包括巨噬細(xì)胞、B 細(xì)胞以及漿細(xì)胞等[5]。TNF 是由巨噬細(xì)胞分泌的一種小分子蛋白，TNF-α 主要是由單核巨噬細(xì)胞分泌，能夠刺激IL-1 的表達(dá)，其與感染性休克、病毒復(fù)制以及惡液質(zhì)的發(fā)生有密切的相關(guān)性，健康人血清TNF 水平較低，但在風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腎移植以及硬化癥患者中可檢測到TNF 水平升高，且與患者的病情水平呈正相關(guān)性，由此可見TNF 水平升高與患者病情發(fā)展有密切的相關(guān)性。本次研究中觀察組小鼠IL-4、IL-6、IFN-γ 以及TNF-α 水平明顯低于對照組小鼠（P＜0.05），這說明通過注射牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞能夠有效降低小鼠炎癥因子水平，通過抑炎效果來治療慢性移植物抗宿主病。牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞具有采集方法簡單、創(chuàng)口小、數(shù)量穩(wěn)定的特點(diǎn)，因此在牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞中具有較好的應(yīng)用價(jià)值，能夠有效改善患者的炎癥因子水平，從而改善患者的臨床癥狀。

綜上所述，牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞能夠通過抑制炎癥因子表達(dá)從而達(dá)到治療慢性移植物抗宿主病的效果。