CXCR4表達(dá)與三陰性乳腺癌的相關(guān)性研究

唐超莉

[摘要]目的 探討趨化因子受體4（CXCR4）在三陰性乳腺癌中的表達(dá)及與復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移預(yù)后的關(guān)系。方法 收集我院2015年5月～2018年1月的160例三陰性乳腺癌患者的組織，利用免疫組化法對CXCR4的表達(dá)進(jìn)行分析，對其臨床病理特征及CXCR4與無疾病進(jìn)展時間、總生存時間的關(guān)系進(jìn)行分析。結(jié)果 三陰性乳腺癌患者的年齡、腋窩淋巴結(jié)、CXCR4組間無病生存期（DFS）比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。年齡≤45歲、腋窩淋巴結(jié)陽性、CXCR4陽性有較短的DFS。CXCR4陽性較CXCR4陰性有更短的總生存期（OS）。結(jié)論 CXCR4過表達(dá)不僅是腫瘤侵襲性的標(biāo)志，也可能是三陰性乳腺癌患者預(yù)后不良的標(biāo)志。

[關(guān)鍵詞]三陰性乳腺癌;趨化因子受體4;無疾病進(jìn)展期;總生存期

[中圖分類號] R737.9? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1674-4721（2020）7（a）-0118-04

Correlation study between CXCR4 expression and triple negative breast cancer

TANG Chao-li

Department of Oncology， Chongzuo People′s Hospital， Guangxi Zhuang Autonomous Region， Chongzuo? ?532200， China

[Abstract] Objective To investigate the expression of the chemokine receptor 4 （CXCR4） in triple negative breast cancer and its relationship with the prognosis of recurrence and metastasis. Methods A total of 160 cases of triple negative breast cancer from May 2015 to January 2018 in our hospital were collected， immunohistochemistry was used to analyze the expression of CXCR4. The clinicopathological features and the relationship between CXCR4， time of disease progression and total survival were analyzed. Results There were significant differences in the age， axillary lymph nodes and disease-free survival （DFS） of CXCR4 group （P<0.001）. There were shorter DFS with age ≤ 45 years old， axillary lymph node positive and CXCR4 positive. The overall survival （OS） of CXCR4 positive patients was shorter than that of CXCR4 negative patients. Conclusion CXCR4 overexpression is not only a marker of tumor invasiveness， but also a marker of poor prognosis in triple negative breast cancer patients.

[Key words] Triple negative breast cancer; Chemokine receptor 4; Disease free survival; Overall survival

三陰性乳腺癌是指缺乏雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）和人類表皮生長因子受體2（HER2）的表達(dá)，占乳腺癌總數(shù)的15%～20%[1]。三陰性乳腺癌即使早期治療復(fù)發(fā)的可能性也較高，尤其是遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，這種表型的轉(zhuǎn)移進(jìn)展通常以早期復(fù)發(fā)和肝、肺和中樞神經(jīng)系統(tǒng)轉(zhuǎn)移為主[2]。因此，找尋三陰性乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的靶點(diǎn)尤為重要。趨化因子受體4（chemokine receptor 4，CXCR4）是一種進(jìn)化高度保守的G蛋白偶聯(lián)受體，表達(dá)于外周血單核細(xì)胞、B細(xì)胞和幼稚T細(xì)胞。其配體CXCL12是一種穩(wěn)態(tài)趨化因子，能夠控制造血細(xì)胞的運(yùn)輸、黏附、免疫監(jiān)視和發(fā)育[3]。CXCR4在三陰性乳腺癌中的表達(dá)鮮少報道。本研究對三陰性乳腺癌組中的CXCR4基因表達(dá)水平進(jìn)行分析，旨在探討CXCR4表達(dá)與患者臨床病理特征、疾病復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系。

1資料與方法

1.1一般資料

收集我院2015年5月～2018年1月收治的160例三陰性乳腺癌患者，年齡21～75歲，中位年齡51.6歲。160例三陰性乳腺癌病例為治療過程中或治療完成后發(fā)生首次復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的三陰乳腺癌患者，復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的部位包括胸壁（52例）、腦（36例）、肺（89例）、肝（103例）、骨轉(zhuǎn)移（78例）、其他轉(zhuǎn)移（41例），其他單個部位轉(zhuǎn)移62例，多個部位轉(zhuǎn)移98例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①曾行乳腺癌改良根治術(shù)，術(shù)后免疫組化證實(shí)為三陰性乳腺癌，術(shù)后病理證實(shí)為乳腺浸潤性導(dǎo)管癌、髓樣癌、其他類型癌;②術(shù)后經(jīng)病理活檢或臨床證實(shí)出現(xiàn)胸壁復(fù)發(fā)或其他器官的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移;③根治性手術(shù)前未行任何抗腫瘤治療;④女性，漢族，年齡21～75歲;⑤臨床病理資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他部位惡性腫瘤或重要臟器嚴(yán)重疾病者;②乳腺癌根治術(shù)前已出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者;③年齡>75歲，不能耐受放療、化療者;④臨床資料不完整者。本研究經(jīng)崇左市人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，患者或其家屬知情。所有病例均行乳腺癌改良根治術(shù)，其手術(shù)切除標(biāo)本常規(guī)石蠟包埋、固定后行HE染色，經(jīng)2名病理科醫(yī)生按世界衛(wèi)生組織（WHO）《乳腺病理組織學(xué)分類》（2003新版）標(biāo)準(zhǔn)讀片確認(rèn)其病理類型。

1.2免疫組化及結(jié)果判定

對每位患者的石蠟包埋塊進(jìn)行相應(yīng)處理，進(jìn)行IHC染色及免疫組化染色。計(jì)數(shù)4個不同高倍視野下200個癌細(xì)胞，計(jì)算陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)為0%～49%計(jì)為陰性，陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)>50%計(jì)為強(qiáng)陽性（+）。腫瘤細(xì)胞核著色<1%，則ER、PR定義為陰性。HER-2免疫組化的判讀標(biāo)準(zhǔn)：無著色或≤10%的浸潤癌細(xì)胞呈現(xiàn)不完整的、微弱的細(xì)胞膜染色為陰性（0）;>10%的浸潤癌細(xì)胞呈現(xiàn)不完整的、微弱的細(xì)胞膜染色為陰性（1+）;>10%的浸潤癌細(xì)胞呈現(xiàn)不完整的和（或）弱～中等強(qiáng)度的細(xì)胞膜染色，或≤10%的浸潤癌細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)而完整的細(xì)胞膜染色為不確定（2+）;>10%的浸潤癌細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)、完整、均勻的細(xì)胞膜染色為陽性（3+）。對于免疫組化不確定的病例（陽性2+）需進(jìn)行熒光原位雜交（FISH）進(jìn)一步檢測。

1.3觀察指標(biāo)與療效判定

采集所有患者的人口統(tǒng)計(jì)學(xué)、病理特征及臨床癥狀等相關(guān)信息。此外，所有患者的腫瘤分期根據(jù)第7版美國癌癥聯(lián)合委員會發(fā)布的癌癥分期手冊（AJCC 7.0）進(jìn)行評估。隨訪截止日期為2019年6月31日，中位隨訪時間為16.8個月?？偵嫫冢╫verall survival，OS）和無病生存期（disease free survival，DFS）的時間分別是從手術(shù)日期至由任何原因引起的死亡之間的時間以及手術(shù)時間開始到出現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)或由任何原因引起死亡之間的時間。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料采用中位數(shù)表示，計(jì)數(shù)資料采用頻數(shù)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，采用Kaplan-Meier計(jì)算患者的生存時間，采用Logrank法進(jìn)行組間比較，采用多因素Cox回歸分析對疾病無病生存期的獨(dú)立影響因素進(jìn)行分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1三陰性乳腺癌患者臨床病理特征及CXCR4與DFS的關(guān)系

對160例三陰性乳腺癌患者進(jìn)行長期隨訪，患者無疾病進(jìn)展時間為4.0～13.0個月，中位時間為9.7個月。對三陰性乳腺癌的臨床病理特征進(jìn)行分析，經(jīng)過Logrank檢驗(yàn)分析，組間比較結(jié)果顯示，患者絕經(jīng)狀態(tài)、病理分類、腫瘤大小、輔助治療方式與無疾病進(jìn)展時間無關(guān)（P>0.05）。年齡、腋窩淋巴結(jié)狀態(tài)、CXCR4表達(dá)的組間無病生存期比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）（表1）。多因素回歸分析結(jié)果顯示，年齡、腋窩淋巴結(jié)狀態(tài)、CXCR4表達(dá)均為影響無進(jìn)展生存期的獨(dú)立影響因素，其中，腋窩淋巴結(jié)陽性、CXCR4陽性均為獨(dú)立危險因素（表2）。

2.2 CXCR4表達(dá)與三陰乳腺癌患者預(yù)后的關(guān)系

三陰乳腺癌患者的總生存時間為9.1～20.1個月，中位總生存時間為15.6個月。隨訪分析結(jié)果顯示，三陰乳腺癌CXCR4陽性組中位總生存時間為14.90個月，顯著短于CXCR4陰性組的17.80個月，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。

3討論

乳腺癌主要分為三種治療亞型，分別為雌激素和/或黃體酮受體陽性（ER+，PR+）、HER2+、三陰性乳腺癌。三陰性乳腺癌是世界上最復(fù)雜、最具侵襲性的乳腺癌[4-7]，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的風(fēng)險性高，預(yù)后較差，死亡風(fēng)險較高。轉(zhuǎn)移性三陰性乳腺癌越來越引起人們的注意。由于乳腺癌細(xì)胞缺乏激素受體，因此化療成為唯一的治療方案。除了預(yù)后差和存活率低外，其轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的高傾向促使找尋有效的靶點(diǎn)。CXCR4是一個高度保守的七跨膜G蛋白偶聯(lián)受體，與配體基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1（SDF-1，也稱為CXCL12）相結(jié)合能夠形成反映軸CXCL12-CXCR4，而針對CXCL12-CXCR4軸的靶向治療可能對治療癌癥有效，目前抗CXCL12適配體、CXCR4拮抗劑和抗CXCR4單克隆抗體已被開發(fā)出來[8]。CXCL12信號通過CXCR4和CXCR7受體在癌細(xì)胞中上調(diào)，并激活多種分子通路，如絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）、肌醇1，4，5-三磷酸腺苷（IP3）和磷酸肌醇肽3-激酶（PI3K）[9]。與CXCR4結(jié)合的CXCL12能夠啟動各種信號通路，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣、基因轉(zhuǎn)錄、趨化、細(xì)胞存活和增殖的增加，其與腫瘤細(xì)胞向區(qū)域和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的能力有關(guān)[10]。CXCL12-CXCL4異源二聚阻止了CXCL12驅(qū)動的乳腺癌細(xì)胞遷移[11]。相關(guān)研究顯示，浸潤性乳腺癌樣本中CXCR4-CXCL12趨化軸與正常鄰近組織相比升高。在晚期轉(zhuǎn)移的腫瘤樣本中，CXCR4-CXCL12軸的表達(dá)水平與轉(zhuǎn)移相關(guān)基因（E-cadherin和MMP2）之間也存在顯著的相關(guān)性[12]。對人乳腺腫瘤的分析顯示，在不同的分子亞型中，三陰性乳腺癌細(xì)胞中CXCR4的表達(dá)水平最高[13]。Shanmugam等[14]的研究表明胸腺醌（TQ）主要發(fā)揮其對趨化因子受體CXCR4表達(dá)下調(diào)的影響，具有抗乳腺癌轉(zhuǎn)移的潛力，靶向CXCR4可以提高轉(zhuǎn)移性乳腺癌的療效。Yang等[15]的研究表明通過CXCR4或CXCR7基因的單次敲除能夠顯著降低三陰性乳腺癌細(xì)胞增殖、生長、遷移和侵襲，延緩G1/S周期的轉(zhuǎn)化，而共敲除對這些生物學(xué)能力的抑制作用更顯著。Guembarovski等[16]的研究提示CXCL12、CXCR4多態(tài)性和CXCR4免疫染色可能在三陰性乳腺癌發(fā)病機(jī)制中具有易感性和預(yù)后作用。

本研究結(jié)果顯示，CXCR4過表達(dá)的三陰性乳腺癌患者獲得較短的OS及DFS，發(fā)生復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的風(fēng)險明顯更高，預(yù)后更差。多因素分析顯示，CXCR4蛋白過表達(dá)是三陰性乳腺癌患者DFS差的獨(dú)立危險有因素。目前的研究顯示，CXCR4蛋白的過表達(dá)增加了三陰性乳腺癌患者發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和生存不良的風(fēng)險，有可能成為控制三陰性乳腺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的新靶點(diǎn)。其可能的機(jī)制為CXCR4-LASP1-eIF4F軸的激活可能有助于致癌mRNA的優(yōu)先翻譯，從而導(dǎo)致乳腺癌的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移[17]，也可能是三陰型乳腺癌細(xì)胞通過激活CXCL12/CXCR4/MMP-2信號通路，抑制CXCR4表達(dá)，進(jìn)而抑制乳腺癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為如增殖和遷移[18]，進(jìn)一步的機(jī)制需要去探索。本研究的數(shù)據(jù)與Guembarovski等[16]近期報道的數(shù)據(jù)一致。對三陰性乳腺癌組織進(jìn)行免疫組化檢測，結(jié)果顯示53.12%的三陰性乳腺癌組織中CXCR4蛋白表達(dá)量較高，提示CXCR4可能在具有侵襲表型的乳腺癌細(xì)胞中特別高表達(dá)。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)三陰性乳腺癌患者的DFS與患者絕經(jīng)狀態(tài)、病理分類、腫瘤大小、輔助治療方式無關(guān)，而在年齡分組、腋窩淋巴結(jié)方面CXCR4表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。

綜上所述，本研究中超過一半的三陰性乳腺癌組織標(biāo)本中CXCR4表達(dá)上調(diào)。CXCR4過表達(dá)不僅是腫瘤侵襲性的標(biāo)志，也可能是三陰性乳腺癌患者預(yù)后不良的標(biāo)志。對CXCR4的進(jìn)一步研究有助于明確三陰性乳腺癌復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，為控制三陰性乳腺癌復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移提供可能的新策略。

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（收稿日期：2020-02-24）