白化黃喉擬水龜人工培育研究①

任鎮(zhèn)明 任科明 任紹明 劉冰晶

(1 山月龜谷龜鱉飼養(yǎng)場 廣東佛山528000;2 贛南醫(yī)學院 江西贛州341000)

黃喉擬水龜（Mauremys mutica）隸屬地龜科（Geoemydidae）擬水龜屬（Mauremys）［1-3］，有中華亞種（M.m.mutica）和琉球亞種（M.m.kami）2個不同的亞種。中華亞種廣泛分布于中國南方地區(qū)及越南北部，琉球亞種分布于琉球群島西部的八重山列島［4-6］。黃喉擬水龜是我國名優(yōu)水產(chǎn)，也是本草綱目記載的12 種龜鱉類中藥之一，被廣泛養(yǎng)殖，至2007年，我國飼養(yǎng)量就近千萬只［7］。

白化是生命體中的黑色素細胞缺乏酪氨酸酶，不能使酪氨酸變成黑色素，皮膚呈白色或淺紅色，因為虹膜和脈絡膜都不含色素，所以虹膜呈現(xiàn)紅色，并且透明［8-9］。自然界中鮮見白化個體［10］。通常，經(jīng)過人工選育，可以培育出少量白化動物個體［11-12］，但白化黃喉擬水龜?shù)娜斯づ嘤匆妶蟮馈Ｉ皆慢敼蕊曫B(yǎng)場于2000 年收購得到1 只成熟雌性白化黃喉擬水龜（P），試驗擬通過雜交進行白化黃喉擬水龜人工繁育。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 母本與父本

母本為白化黃喉擬水龜（P），于2000 年9 月購自廣州清平市場，約10 歲齡，背甲長21.8 cm，腹甲長19.8 cm，體重1 347 g。父本為黃喉擬水龜普通個體，由山月龜谷飼養(yǎng)場自繁自養(yǎng)，體色較淺，年齡9 歲，背甲長24.9 cm，腹甲長21.3 cm，體重1 204 g。普通黃喉擬水龜與白化黃喉擬水龜個體見圖1。

1.1.2 飼養(yǎng)環(huán)境

飼養(yǎng)池為長方形白色PVC水池，面積1 m×2 m，其中水域面積1.5 m2，沙池0.5 m2，陸地建于水面之上，上部為陸地，下部為躲避洞，面積0.5 m2。水源為自來水，水位30 cm，水呈淡綠色，放養(yǎng)水浮蓮，透明度30 cm左右。

1.2 方法

1.2.1 生物學觀察及飼養(yǎng)

白化黃喉擬水龜（P）通體乳白色，盾片連接處為粉白色，頭頂、尾正面、指甲和四肢鱗片為乳黃色，臉頰、尾和四肢腹面為白色。眼球及虹膜為血紅色，并且透明。

白化黃喉擬水龜（P）水棲性強，白天多棲息在水中，晴天在陸地上曬太陽的時間少于普通個體。天氣炎熱時，躲在洞內(nèi)避暑，活動較少。每年的4 月底至9 月底氣溫較高的時候，活動量和攝食量較大，投喂鮮魚肉塊，顆粒浮水飼料，以及葡萄、木瓜等水果。最適環(huán)境水溫為25～30℃，每2～3 天投喂一次。20℃左右基本停食，15℃左右逐步進入冬眠，10℃左右進入深度冬眠。翌年3月底，水溫15℃左右時逐漸蘇醒，此時只爬動，不吃食，到4月份水溫升至20℃左右才采食。

2 結果與分析

2.1 F1子代培育

將白化雌龜（P）與一只體色較淺的普通雄龜混養(yǎng)于飼養(yǎng)池，4～10 月底有交配現(xiàn)象，白化雌龜（P）于2001 年4 月24 日產(chǎn)卵6 枚，受精5 枚；5 月12 日產(chǎn)卵5 枚，全受精；6 月21 日產(chǎn)卵6 枚，5 枚受精。

2002年4月20日，白化雌龜（P）產(chǎn)卵6枚，5枚受精；5 月9 日產(chǎn)卵5 枚，全受精；5 月30 日產(chǎn)卵7枚，5枚受精；6月17日產(chǎn)卵5枚，全受精。

2003年4月22日，白化雌龜（P）產(chǎn)卵7枚，6枚受精；5 月5 日產(chǎn)卵5 枚，全受精；5 月29 日產(chǎn)卵7枚，5枚受精。

將受精卵平行擺放到蛭石中，每個間隔2 cm，保持孵化介質(zhì)的濕度在9%左右，空氣濕度80%～90%，溫度28～30℃，孵化期55～60 d。卵呈白色，長橢圓形，長徑41.2～44.3 mm，短徑31.2～36.4 mm，重12～16.3 g。2001 年得苗13 只，3 雄10 雌；2002 年得苗17 只，5 雄12 雌；2003 年得苗14 只，4 雄10 雌。稚龜重7～11 g。2001～2003 年未得到白化個體。

2.2 F2子代培育

2003 年8 月，將白化雌龜（P）與F1 子代3 只雄龜中體色最淡的一只進行混養(yǎng)，棄去原普通雄龜。

白化雌龜（P）于2004 年4 月10 日產(chǎn)卵6 枚，受精3 枚；5 月13 日產(chǎn)卵5 枚，受精3 枚；6 月2 日產(chǎn)卵6枚，2枚受精。

2005年4月16日，白化雌龜（P）產(chǎn)卵4枚，3枚受精；5月7日產(chǎn)卵5枚，受精4枚；5月31日產(chǎn)卵5枚，4枚受精；6月16日產(chǎn)卵5枚，受精4枚。

2006年4月12日，白化雌龜（P）產(chǎn)卵7枚，6枚受精；5 月6 日產(chǎn)卵6 枚，全受精；6 月23 日產(chǎn)卵6枚，全受精。

將受精卵按照3.1 步驟進行孵化，2004 年得苗8 只，3 雄5 雌；2005 年得苗14 只，5 雄9 雌；2006 年得苗17 只，5 雄12 雌。2004～2006 年仍未得到白化個體。

2.3 F3子代培育

2006 年8 月，將白化雌龜（P）與2004 年培育的F2 子代3 只雄龜中體色最淡的一只進行混養(yǎng)，棄去原F1子代雄龜。

白化雌龜（P）于2007 年4 月5 日產(chǎn)卵7 枚，受精3 枚；4 月28 日產(chǎn)卵5 枚，受精3 枚；5 月22日 產(chǎn) 卵4 枚，3 枚 受 精；6 月18 日 產(chǎn) 卵6 枚，4 枚受精。

2008 年4 月8 日，白化雌龜（P）產(chǎn)卵6 枚，5枚受精；5月1日產(chǎn)卵5枚，受精4枚；5月22日產(chǎn)卵4枚，3枚受精；6月17日產(chǎn)卵5枚，受精3枚。

2009年4月6日，白化雌龜（P）產(chǎn)卵6枚，全受精；4 月21 日產(chǎn)卵7 枚，全受精；5 月16 日產(chǎn)卵7枚，6枚受精。

將受精卵按照3.1 步驟進行孵化，2007 年得苗13 只，3 雄10 雌，其中白化苗3 只，1 雄2 雌；2008 年得苗14 只，3 雄11 雌，其中白化苗4 只，1雄3 雌；2009 年得苗18 只，5 雄13 雌，其中白化苗4 只，2 雄2 雌。截止到2007 年F3 子代，終于得到白化個體，白化苗率為21.4%～28.8%。

2.4 F4子代培育

2.4.1 P×F3培育F4子代

2010 年8 月，將白化雌龜（P）與2007 年培育的F3 子代中的一只白化雄龜進行混養(yǎng)，棄去原F2子代雄龜。

2011 年4～6 月白化雌龜（P）共產(chǎn)卵4 次，總計21 枚，受精卵12 枚，得苗11 只，其中白化苗6只（2雄4雌）。

2012 年4～6 月白化雌龜（P）共產(chǎn)卵4 次，總計23 枚，受精卵18 枚，得苗17 只，其中白化苗9只（3雄6雌）。

2013 年4～6 月白化雌龜（P）共產(chǎn)卵4 次，總計22 枚，受精卵19 枚，得苗17 只，其中白化苗8只（2雄6雌）。

2.4.2 F3×F3培育F4子代

將2007 年，2008 年，2009 年獲得的F3 子代白化苗分別飼養(yǎng)在3 個不同的飼養(yǎng)池中培育F4 子代，產(chǎn)卵數(shù)及得苗率見表1。

由表1可知，F(xiàn)4子代已經(jīng)可以較穩(wěn)定的繁育出白化個體。F3×F3 培育的F4 子代白化率為47.1%～54.5%，P×F3 培育的F4 子代白化率為48.4%～63.9%。由此可見，人工培育的F3 子代與親本P 的白化基因數(shù)趨于相似。

表1 F4子代培育一覽表

2.5 F5子代培育

2.5.1 同窩F4代培育F5代

將2013 年獲得的2007 年F3 子代繁殖的F4 子代（圖2），2008年F3子代繁殖的F4子代，取同窩1雄2雌，各取3組，共6組，將同窩個體分別放入6 個飼養(yǎng)池中培育F5 子代（圖3），產(chǎn)卵數(shù)及得苗率見表2。

2.5.2 不同窩F4代培育F5代

將2013 年獲得的2007 年F3 子代繁殖的F4 子代，2008 年F3 子代繁殖的F4 子代，各取3 雄6 雌，將2007 年F3 子代繁殖的F4 子代雄龜與2008 年F3子代繁殖的F4子代雌龜混養(yǎng)，將2008年F3子代繁殖的F4 子代雄龜與2007 年F3 子代繁殖的F4 子代雌龜混養(yǎng)，放入6 個飼養(yǎng)池中培育不同窩F5 子代，產(chǎn)卵數(shù)及得苗率見表2。

由表2 可知，同窩個體與不同窩個體產(chǎn)卵數(shù)，受精率較為接近，但白化苗率有很大差別，同窩個體2017 年，2018 年白化苗率為80.0%～95.8%，平均白化苗率大于85%，個別一窩白化苗率100%；不同窩個體白化苗率明顯偏低，2017 年，2018 年白化苗率為61.5%～86.9%，明顯低于同窩個體的白化苗率，而且白化苗率波動很大。

3 討論與結論

3.1 討論

3.1.1 子代數(shù)越大白化率越大

常染色體隱性遺傳病、環(huán)境誘導的基因突變或近親繁殖可能導致白化個體的出現(xiàn)［13，14］。白化種源不易獲得。以2000 年獲得的白化個體作為種源進行白化種群培育，發(fā)現(xiàn)在培育過程中，子代數(shù)越高，白化率就越高。

F1、F2 子代未見白化個體出現(xiàn)，F(xiàn)3 子代的白化率分別為21.4%～28.8%，F(xiàn)3×F3 培育的F4 子代白化率為47.1%～54.5%，P×F3 培育的F4 子代白化率為48.4%～63.9%，F(xiàn)4×F4 培育的F5 子代白化率為61.5%～95.8%，平均白化苗率大于85%，個別一窩白化苗率100%。從F1～F5，白化率明顯的呈現(xiàn)出階梯式增大，從F3 子代開始，每增加一個子代，其白化率增加20%～30%。

3.1.2 親緣更近的親本培育的子代白化率更大

近親繁殖可能導致白化個體的出現(xiàn)［13，14］。以F5 為例，同窩與不同窩F4 個體繁殖的白化苗率有很大差別，同窩F4 個體培育的F5 子代白化苗率為80.0%～95.8%，平均白化苗率大于85%，個別一窩白化苗率100%；不同窩F4 個體培育的F5 子代白化苗率明顯偏低，白化苗率為61.5%～86.9%，明顯低于同窩F4 個體的白化苗率，而且白化苗率波動很大。由此推理，近親的白化個體要比遠親的白化個體培育的子代白化率更大。

表2 F5子代培育一覽表

3.1.3 白化個體與普通個體的比較

白化個體的成熟時間、生長速度、產(chǎn)卵窩數(shù)，產(chǎn)卵個數(shù)、產(chǎn)卵時間、發(fā)情/交配時間、受精率、孵化率與普通個體相同，無明顯差異。一般2～3齡的雄龜即有繁殖能力，但受精率較低，4 齡的雌龜就可產(chǎn)卵，普通個體，F(xiàn)1～F5 年產(chǎn)卵數(shù)為20～28枚，5齡的雌龜普通個體，F(xiàn)1～F5子代產(chǎn)卵數(shù)為32 枚左右。無論雌雄龜，受精率與雙方親本的年齡都有關系，總體來看，2～3齡的雄龜配7齡以上完全成熟的雌龜，受精率在30%左右，若配4 齡剛剛成熟的雌龜則受精率極低，甚至無受精卵。同樣，4 齡剛成熟的雌龜配6 齡以上成熟雄龜，受精率也在30%左右，若配2～3 齡的雄龜則無受精卵。由此可見，無論普通個體還是F1～F5子代雄龜2～3 齡有繁殖能力，6 齡以上完全成熟；雌龜4 齡可以產(chǎn)卵，7 齡以上完全成熟。在平常培育中盡量用完全成熟的雌雄個體作為親本，若實在條件限制，則完全成熟壯年雄龜配剛成熟的雌龜或者完全成熟壯年雌龜配剛成熟的雄龜也可得到少量子代，弱嫩公配嫩母一般無法得到龜苗。

白化個體也會像普通個體上岸曬太陽，但時間少于普通個體，這可能與白化個體缺乏黑色素，無法長期抵擋大量的紫外線有關。

3.2 結論

自2000 年收購得到1 只成熟雌性白化黃喉擬水龜（P），經(jīng)過五代18 批人工培育，可以穩(wěn)定地獲得白化黃喉擬水龜個體，子代數(shù)越大，白化率越大，第五代白化黃喉擬水龜?shù)某雒缏室呀?jīng)達到85%以上，個別一窩可達100%。親緣近的的同窩個體繁殖的白化苗率大于不同窩的個體。總體看來，子代越大的個體眼球虹膜更紅、更透明，這可能與其所帶的白化基因數(shù)有關，將在后續(xù)的研究中報道出來。