兒茶素對腦膠質瘤細胞U251增殖的抑制作用及機制初探

董建將，閆 磊，梁 軍，劉 陽

（1.牡丹江醫(yī)學院組胚教研室，黑龍江 牡丹江 157011；2.牡丹江醫(yī)學院教務處，黑龍江 牡丹江 157000）

神經(jīng)膠質瘤是一種惡性腫瘤，其發(fā)病部位主要為中樞神經(jīng)系統(tǒng)，本病通過手術治療后生長更快，患者死亡率更高。因此，臨床中多采用藥物化療、放療等方式進行治療，通過藥物殺滅腫瘤細胞。但多數(shù)化療藥物存在較大的毒性，患者治療過程中副作用發(fā)生率非常高，給患者帶來的痛苦和負擔較大[1]。且部分腫瘤細胞對化療物質以及放射線的敏感度較低，導致治療效果并不理想，因此，需要采取其他方式進行治療[2]。兒茶素是茶葉中提取的多酚物質，近年來研究發(fā)現(xiàn)，兒茶素能夠對腫瘤細胞的增殖進行抑制。為此，本次研究將針對兒茶素對腦膠質瘤細胞U251增殖的抑制機理進行分析。

1 資料與方法

1.1 一般材料

標本：U251細胞株系采購于中山大學并于本實驗室內冷凍保存；兒茶素（95.0%）選購于南京清澤科技有限公司。將兒茶素用完全培養(yǎng)基配置成8個不同的濃度，初始濃度為500 μg/ml，而后每個培養(yǎng)基以50.0%濃度遞減，最終培養(yǎng)基濃度為3.90625 μg/ml。

儀器：顯微鏡（德國萊卡）；壓力鍋；CO2培養(yǎng)箱；流式細胞儀；酶標儀（Multiskan MK3）。

試劑：胎牛血清；胰酶；甲基噻唑藍；液體培養(yǎng)基；臺盼藍；碘化丙錠；RnaseA；枸櫞酸鈉。

1.2 一般方法

細胞培養(yǎng)：將U251細胞株培養(yǎng)于含有胎牛血清、青霉素、鏈霉素培養(yǎng)基中，隔天換液，培養(yǎng)條件為5% CO2、37攝氏度。

試劑配制：兒茶素通過完全培養(yǎng)基配置成8個不同的濃度；臺盼藍用無菌水配置成濃度為0.4%的溶液。

增殖抑制：收集對數(shù)期生長細胞將其接種在96孔板中，通過8個不同濃度兒茶素處理24 h，而后計算細胞成功率。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

采用SPSS 21.0軟件處理文中數(shù)據(jù)，計量資料以（±s）表示，t/F為檢驗值，計數(shù)資料采用%表示，x2檢驗，P＜0.05視為具有統(tǒng)計學差異。

2 結 果

2.1 細胞形態(tài)變化

腦膠質瘤細胞U251在兒茶素的作用下會發(fā)生顯著的形態(tài)變化，且其變化與兒茶素濃度成正比。隨著兒茶素濃度不斷遞增，腦膠質瘤細胞U251細胞體積不斷增加、細胞核輪廓逐漸模糊，細胞處于S期時開始出現(xiàn)增大表現(xiàn)。而對照組則無明顯變化，細胞生理形態(tài)基本完整。

2.2 細胞凋亡率

當兒茶素濃度為62.5～125 mg/ml時腦膠質瘤細胞U251凋亡情況非常明顯，而在低于10μg/ml濃度中腦膠質瘤細胞U251的凋亡情況并不明顯。兒茶素不同濃度下作用24 h的細胞凋亡率均高于作用12 h（P＜0.05）；相同作用時間下兒茶素濃度越高細胞凋亡率越高（P＜0.05），詳見表1。

表1 細胞凋亡率（±s）

表1 細胞凋亡率（±s）

兒茶素濃度（μg/ml） 作用時間為12 h 作用時間為24 h 31.3 9.21±1.63 13.63±1.45 62.5 51.86±2.46 53.94±1.17 125 83.51±1.35 88.75±0.68對照組（0） 0.41±0.03 0.18±0.02

3 討 論

惡性腫瘤患者死亡率非常高，臨床治療多以手術、放化療等方式為主，但由于常規(guī)放化療藥物毒性較大，其不僅會殺滅腫瘤細胞同時也會殺滅機體正常細胞，因此所產生的副作用非常大，患者通常存在明顯的毒副反應，嚴重影響患者治療效果[3]。加之部分細胞對放化療的敏感度非常低因此急需采取其他的方式開展治療，降低患者治療副作用，提升患者治療安全性。

兒茶素是一種茶葉中的多酚物質，兒茶素能夠清除自由基，因此具有抗衰老的作用，其抗衰老作用甚至超過維生素E[4]。兒茶素具有類氟作用，能夠減少牙菌斑、延緩牙周病的發(fā)生；兒茶素還能夠改善腸道內維生素的分布，抑制致病菌的同時不會損傷益生菌生態(tài)[5]。其同時具有除臭、抗菌、抑制血壓等作用。在近年來研究中發(fā)現(xiàn)，兒茶素具有抑制癌細胞增殖的作用，早期已經(jīng)證實其能夠誘發(fā)白血病Molt4B細胞凋亡。

在本次研究中可見，兒茶素能夠誘發(fā)腦膠質瘤細胞U251細胞凋亡，且隨著兒茶素濃度的升高，腦膠質瘤細胞U251凋亡率也持續(xù)提升。此外，兒茶素作用時間不斷延長腦膠質瘤細胞U251的凋亡率也呈現(xiàn)上升趨勢，證明了兒茶素確實能夠對腦膠質瘤細胞U251細胞增殖進行抑制。在實驗中發(fā)現(xiàn)，腦膠質瘤細胞U251在S期時開始增大，細胞比例不斷下降，證明細胞抑制從S期開始。

總的來說，兒茶素能夠抑制腦膠質瘤細胞U251增殖，可作為臨床治療新方向。