寬葉獨行菜提取物對大鼠胃腸動力及SP和Ghrelin的影響

趙乙樺 鐘江斌 李威霖 祁得勝 孫士浩 鄒登朗 都玉蓉 馬建濱

摘要：為研究寬葉獨行菜（Lepidium latifolium L.）提取物對胃腸動力障礙大鼠的影響，并初步探討其作用機制，選取24只SPF級SD大鼠，體重180～200g，隨機分成空白組、模型組和受試藥物組，每組8只，雌雄各半，各組大鼠灌胃給予相應(yīng)的藥物，受試藥物組每只大鼠灌胃2mL寬葉獨行菜提取物溶液（0.36g/mL），空白組和模型組每只大鼠灌胃等體積去離子水。每天1次，連續(xù)灌胃6d后禁食不禁水24h，第7天正常給藥lh后，模型組和受試藥物組大鼠腹腔注射硫酸阿托品2mg/kg，空白組大鼠腹腔注射等體積的生理鹽水。20min后，所有大鼠均灌胃0.4mL 2%藍色憑聚糖-2000溶液30min后腹腔注射4mL/kg的10%水合氯醛溶液麻醉大鼠，取材測定胃排空率和小腸推進率，ELISA法測定胃和十二指腸勻漿中P物質(zhì)（SP）和饑餓素（Ghrelin）濃度。結(jié)果表明，與空白組比較，模型組大鼠胃排空率和小腸推進率極顯著降低（P<0.01），胃、十二指腸中SP濃度和胃中Ghrelin濃度無明顯變化（P>0.05），十二指腸中Ghrelin濃度極顯著降低（P<0.01）。與模型組比較，受試藥物組大鼠胃排空率和小腸推進率均極顯著升高（P<0.01），胃中SP濃度顯著升高（P<0.05）;胃中Ghrelin濃度和十二指腸中SP、Ghrelin濃度均極顯著升高（P<0.01）。表明寬葉獨行菜提取物能改善硫酸阿托品致胃腸動力障礙大鼠的胃腸動力，提高其胃和十二指腸中SP和Ghrelin濃度可能是其發(fā)揮促胃腸動力作用的機制之一。

關(guān)鍵詞：寬葉獨行菜（Lepidium latifolium L.）;大鼠胃腸動力;P物質(zhì)（SP）;饑餓素（Ghrelin）

中圖分類號：S567.23+9;R915 文獻標識碼：A

文章編號：0439-8114（2020）09-0130-03

DOI：10.14088/i.cnki.issn0439-8114.2020.09.027

寬葉獨行菜（Lepidaum latifolium L.）系十字花科獨行菜屬多年生草本植物，又稱大辣辣、止痢草，世界各地均有分布，在中國主要產(chǎn)于內(nèi)蒙古、西藏、青海等地海拔1800～4250m的村旁、田邊、山坡及鹽化草甸;全草人藥，有清熱燥濕，治菌痢、腸炎作用[1]。本研究選用寬葉獨行菜提取物作為受試藥物，研究其對胃腸動力障礙大鼠胃排空和腸推進的影響，并觀察其對大鼠胃、腸組織勻漿中P物質(zhì)（SP）和饑餓素（Ghrelin）的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 SPF級SD大鼠，24只，體重180～200g，雌雄各半，購自西安交通大學醫(yī)學部實驗動物中心，許可證號為SCXK（陜）2017-003。

1.1.2 藥物與試劑 寬葉獨行菜（采自青海省海西州德令哈市郊，由中國科學院西北高原生物研究所吳玉虎研究員鑒定）;2%藍色葡聚糖-2000溶液（上海源葉生物科技有限公司，批號W29N8E49020）;硫酸阿托品注射液（天津金耀藥業(yè)有限公司，批號1611231）;RAT SP ELISA KIT、RAT Ghrelin ELISAKIT（武漢基因美生物科技有限公司，批號GR201812-1）。

1.1.3 儀器 752型紫外可見分光光度計（上海菁華科技儀器有限公司）;S-35K型手持勻漿機（萊普特科學儀器有限公司）：xMark^TMMicroplate Spectro-photometer酶標儀（BIO-RAD美國伯樂）。

1.2 方法

1.2.1 寬葉獨行菜提取物的制備 寬葉獨行菜全草陰干后粉碎，按料液比1：12（g/mL），浸提溫度80℃，浸提時間1h，浸提2次，濃縮、干燥[2]。

1.2.2 造模與給藥 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7d后隨機分成3組，即空白組、模型組和受試藥物組，每組8只，雌雄各半。各組大鼠稱重后灌胃給予相應(yīng)的藥物，受試藥物組每只大鼠灌胃2ml，寬葉獨行菜提取物溶液（0.36g/mL），空白組和模型組每只大鼠灌胃等體積的去離子水，每天1次，連續(xù)灌胃6d后禁食不禁水24h，第7天正常給藥1h后，模型組和受試藥物組腹腔注射硫酸阿托品2mg/kg[3]，空白組腹腔注射等體積的生理鹽水。

1.2.3 胃排空和腸推進試驗 造模20min后，所有大鼠均灌胃0.4mL 2%藍色葡聚糖-2000溶液[4]，30min后腹腔注射4mL/kg的10%水合氯醛溶液麻醉大鼠，開腹，結(jié)扎賁門、幽門和回盲部，取全胃和小腸。沿胃大彎剪開胃，用10mL去離子水將胃內(nèi)容物沖洗于巧mL離心管中，3500r/min離心15min，取上清液，用紫外分光光度計于620nm處測吸光度。另取0.4mL 2%藍色葡聚糖-2000溶液，溶于10mL去離子水，用紫外分光光度計于620nm處測得的吸光度為標準吸光度。將小腸平鋪于用生理鹽水潤濕的試驗臺上，自然拉直，測量小腸全長和幽門至藍色前沿距離。胃內(nèi)色素排空率=（1-胃內(nèi)殘留色素吸光度標準吸光度）×100%，小腸推進率=（幽門括約肌至色素前沿距離/小腸全長）×100%[5]。

1.2.4 SP和 Ghrelin含量測定 取大鼠胃和十二指腸組織，用PBS液洗凈后稱重，按1：10（g/mL）的比例加入預冷的PBS液，勻漿。將勻漿液轉(zhuǎn)移至離心管，3000r/min離心20min，取上清液-20℃保存?zhèn)溆?。取待測組織勻漿液，按照試劑盒說明書操作，檢測大鼠胃和十二指腸組織勻漿中SP和Ghrelin的含量。

1.2.5 統(tǒng)計學方法 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 21.0進行單因素方差分析，處理后的數(shù)據(jù)均用“x±s”表示，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 寬葉獨行菜提取物對大鼠胃排空和腸推進的影響

由表1可見，模型組大鼠與空白組比較，其胃排空率和小腸推進率極顯著降低（P<0.01）。受試藥物組大鼠胃排空率雖還未恢復至空白組水平，但與模型組相比極顯著升高（P<0.01）;受試藥物組大鼠小腸推進率與模型組相比極顯著升高（P<0.01），與空白組相比差異不顯著（P>0.05）。

2.2 寬葉獨行菜提取物對大鼠胃腸激素的影響

由表2可見，模型組大鼠胃和十二指腸中SP濃度與空白組比較無顯著差異（P>0.05）;模型組大鼠胃中Ghrelin濃度與空白組比較無顯著差異（P>0.05），十二指腸中Ghrelin濃度與空白組比較極顯著降低（P<0.01）。受試藥物組大鼠與模型組比較，胃中SP和Ghrelin濃度顯著升高（P<0.05，P<0.01）;十二指腸中SP和Ghrelin濃度均極顯著升高（P<0.01）。受試藥物組大鼠與空白對照組比較，胃中SP和Ghrelin濃度顯著升高（P<0.05，P<0.01）;十二指腸中SP濃度極顯著升高（P<0.01），十二指腸中Ghrelin濃度無顯著差異（P>0.05）。

3 小結(jié)與討論

近年來，隨著生活節(jié)奏的加快，人們的飲食和生活規(guī)律發(fā)生了巨大改變，胃腸動力障礙疾病發(fā)病率也顯著提高，嚴重影響了人們的生活質(zhì)量。硫酸阿托品是M膽堿受體阻斷劑，腹腔注射硫酸阿托品是經(jīng)典的胃腸動力障礙模型造模方法，成功率高[6]。SP是一種重要的胃腸膚，廣泛分布于整個胃腸道和腸神經(jīng)系統(tǒng)，是調(diào)節(jié)胃腸運動的主要神經(jīng)遞質(zhì)之一[7，8]。Ghrelin是一種由28個氨基酸組成的多膚，整個胃腸道均有分布[9]。研究表明，Ghrelin參與體內(nèi)食欲、胃腸運動和胃酸分泌等的調(diào)控[10]。本研究采用腹腔注射硫酸阿托品制造胃腸動力障礙模型大鼠，以胃排空率和小腸推進率為指標檢測寬葉獨行菜提取物對胃腸動力障礙大鼠的影響，并取胃和十二指腸組織，以SP和Ghrelin為指標初步探討其作用機制。試驗結(jié)果顯示，受試藥物組大鼠胃排空率和小腸推進率與模型組比較均顯著升高，表明寬葉獨行菜提取物能改善硫酸阿托品致胃腸動力障礙大鼠胃腸動力。受試藥物組大鼠胃和十二指腸中SP、Ghrelin濃度與模型組比較均顯著升高，胃和十二指腸中SP濃度、胃中Ghrelin濃度與空白組比較也顯著升高，表明寬葉獨行菜提取物可提高胃和十二指腸中SP、Ghrelin濃度。綜上，寬葉獨行菜提取物能有效改善硫酸阿托品致胃腸動力障礙大鼠的胃腸動力，提高胃和十二指腸中SP和Ghrelin濃度可能是其發(fā)揮作用的機制之一，其起效成分和具體機制還有待進一步研究。

參考文獻：

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[10]王宏波，呂杰.Ghrelin與胃癌關(guān)系的研究進展[J].重慶醫(yī)學，2014，43（30）：4110-4113.

收稿日期：2019-07-16

基金項目：青海省基礎(chǔ)研究計劃項目（2019-ZJ-916）;青海省重點研發(fā)與轉(zhuǎn)化項目（2019-SF-124）

作者簡介：趙乙樺（1993-），女，江蘇鹽城人，在讀碩士研究生，研究方向為應(yīng)用植物學，（電話）18862005520（電子信箱）2973976914@qq.com;通信作者，馬建濱（1965-），男，青海西寧人，教授，碩士生導師，碩士，主要從事青藏高原特色生物資源應(yīng)用與開發(fā)研究，（電子信箱）mjb_117@163.com;都玉蓉（1968-），女，青海西寧人，教授，碩士生導師，博士，主要從事生理生態(tài)學研究，（電子信箱）xndyr@163.com。