沙苑子總黃酮對雄性生殖功能障礙模型大鼠的改善作用及機制研究

劉雯 侯晨輝 李江

摘 要 目的：研究沙苑子總黃酮（TFA）對腺嘌呤誘導的雄性生殖功能障礙模型大鼠的改善作用及機制。方法：將雄性SD大鼠分為空白組、模型組、陽性組（五子衍宗丸，2 g/kg）和TFA低、中、高劑量組（0.05、0.1、0.2 g/kg），每組12只。各組雄性大鼠每日早上9：00灌胃相應藥物，并于同日下午3：00灌胃腺嘌呤混懸液以復制生殖功能障礙模型（空白組除外），連續(xù)給藥35 d。給藥結束后，將各組雄性大鼠與雌性大鼠按1 ∶ 1合籠交配7 d后取出，檢測致雌鼠受孕率;采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測雄性大鼠血清中睪酮（T）、雌二醇（E2）、促卵泡激素（FSH）、促黃體激素（LH）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）水平;摘取雄性大鼠睪丸、附睪、精囊腺、胸腺、腎，并計算其臟器指數(shù);采用蘇木精-伊紅（HE）染色法觀察雄性大鼠睪丸、附睪及腎組織的病理學變化;采用免疫組織化學染色檢測雄性大鼠腎組織中B細胞淋巴瘤/白血病2（Bcl-2）、Bcl-2相關X蛋白（Bax）、胱天蛋白酶3（Caspase-3）、Caspase-9的蛋白表達水平。結果：與空白組比較，模型組雄性大鼠致雌鼠受孕率，睪丸、附睪、精囊腺、胸腺指數(shù)，血清中T、E2、SOD、GSH-Px水平，腎組織中Bcl-2蛋白表達水平均顯著降低（P<0.01）;腎指數(shù)和血清中FSH、LH、MDA、Scr、 BUN水平，腎組織中 Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表達水平均顯著升高（P<0.01）;睪丸組織中生精小管直徑變細、間距較寬，生精細胞排列紊亂;附睪管管壁增厚、排列疏松、間質(zhì)增大，管腔增生萎縮、腔內(nèi)精子聚集成團;腎組織中腎間質(zhì)纖維增生，腎小管內(nèi)可見大量黃色結晶。與模型組比較，陽性組和TFA中、高劑量組雄性大鼠致雌鼠受孕率，睪丸、附睪、精囊腺、胸腺指數(shù)，血清中T、E2、SOD、GSH-Px水平，腎組織中Bcl-2蛋白表達水平均顯著升高（P<0.05或P<0.01），腎指數(shù)和血清中FSH、LH、MDA、Scr、 BUN水平，腎組織中 Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表達水平均顯著降低（P<0.05或P<0.01）;TFA低劑量組上述指標變化趨勢相同，且大部分有顯著性差異（P<0.05或P<0.01）;各給藥組雄性大鼠睪丸、附睪、腎組織病理學變化均明顯減輕。結論：TFA對腺嘌呤誘導的雄性大鼠的生殖障礙具有顯著改善作用，其機制可能與降低性激素FSH、LH水平和下調(diào)腎組織中凋亡相關蛋白表達，升高性激素T、E2水平和改善機體氧化應激水平有關。

關鍵詞 沙苑子總黃酮;生殖功能障礙;性激素;氧化應激;機制;大鼠

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To study the improvement effects of Astragalus complanatus total flavonoids （TFA） on adenine-induced reproductive dysfunction model male rats and its mechanism. METHODS： Male SD rats were divided into blank group， model group， positive group （Wuzhi yanzong pill， 2 g/kg）， TFA high-dose， medium-dose and low-dose groups （0.05， 0.1， 0.2 g/kg）， with 12 rats in each group. Male rats in each group were given the corresponding drugs intragastrically at 9：00 a.m. every day， while the model of reproductive dysfunction was reproduced by intragastric administration of adenine suspension （except for blank group） at 3：00 p.m. on the same day， for consecutive 35 days. After medication， male rats in each group were mated with female rats by ratio of 1 ∶ 1 in cages; 7 days later， inducing-pregnancy rate of male rats were measured. ELISA assay was used to detect the serum levels of T， E2， FSH， LH， GSH-Px， SOD， MDA， Scr and BUN in male rats; the testis， epididymis， seminal vesicle， thymus and kidney of male rats were extracted and the organ index was calculated; HE staining was used to observe the pathological changes of testis， epididymis and kidney; the protein expression of Bcl-2， Bax， Caspase-3 and Caspase-9 in the renal tissue of male rats were detected by immunohistochemistry. RESULTS： Compared with blank group， the inducing-pregnancy rate of male rats， the testis， epididymis， seminal vesicle gland， thymus indexes， the serum levels of T， E2， SOD and GSH-Px， the protein expression levels of Bcl-2 in renal tissue were reduced significantly in model group （P<0.01）; the renal index， the serum levels of FSH， LH， MDA， Scr and BUN， the protein expression levels of Bax， Caspase-3 and Caspase-9 in renal tissue were increased significantly （P<0.01）; the diameter of seminiferous tubules in testis became thinner， the spacing was wider， and the arrangement of seminiferous cells was disordered; the wall of epididymis was thickened， the arrangement was loose， the stroma was enlarged， the lumen was proliferated and atrophied， and the sperm in the lumen wass aggregated; in renal tissue， interstitial fibers was proliferated， and a large number of yellow crystals were seen in renal tubules. Compared with model group， the inducing-pregnancy rate， the testis， epididymis， seminal vesicle gland， thymus indexes， the serum levels of T， E2， SOD and GSH-Px， the protein expression levels of Bcl-2 in renal tissue of male rats were increased significantly in the positive group， TFA medium-dose and high-dose groups （P<0.05 or P<0.01）， while the renal index， the serum levels of FSH， LH， MDA， Scr and BUN， the protein expression levels of Bax， Caspase-3 and Caspase-9 in renal tissue were decreased significantly （P<0.05 or P<0.01）; there was the same chage trend and most with significant difference in above indexes of TFA low-dose group （P<0.05 or P<0.01）; the pathalogic changes of testis， epididymis and renal tissue were improved significantly. CONCLUSIONS： TFA can significantly improve adenine-induced reproductive dysfunction model male rats. The mechanism may be associated with reducing hormone FSH and LH level， the expression of apoptosis-related proteins in renal tissue， while increasing the level of hormone T and E2 and improving oxidant stress level.

KEYWORDS? ?Astragalus complanatus total flavonoids; Reproductive dysfunction; Horone; Oxidant stress; Mechanism; Rat

近年來，隨著環(huán)境污染加劇、生活節(jié)奏加快及生育年齡延遲，不育癥患者數(shù)量急劇增加，發(fā)病率逐年上升，對人類生殖繁衍造成巨大影響[1]。據(jù)統(tǒng)計，男性不育癥占所有不孕不育癥的35%～50%，其中弱精子癥是導致男性不育癥的重要因素，其病因機制尚未完全明確，且治療手段與可選擇的藥物較少[2]，因此，研發(fā)防治男性生殖功能障礙的新型藥物是目前的熱點之一。

目前，西醫(yī)在治療弱精子癥方面雖有一定成果，但仍有部分患者的治療效果不盡人意，尚缺乏特效藥物[3]。中醫(yī)理論認為，腎藏精而主生殖，當腎精腎氣充足、精室充盈，方能孕育生命，因此在治療男性不育時，當先從腎著手[4-5]。沙苑子為豆科植物扁莖黃芪（Astragalus complanatus R. Brown.）的干燥成熟種子，性味甘、溫，歸肝、腎經(jīng);具有溫補肝腎、固精、縮尿、明目之功效，其腎助陽之功效頗為顯著;主要用于治療腎虛腰痛、遺精早泄、遺尿尿頻、白濁帶下、眩暈、目暗昏花等[6]?，F(xiàn)代藥學研究發(fā)現(xiàn)，其化學成分主要有黃酮類、三萜皂苷類、脂肪酸、氨基酸、揮發(fā)油、甾醇類等，對血壓、腦血流量、免疫功能和血液流變均有影響，且具有解熱鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、耐寒、抗疲勞、抗炎和降脂保肝的作用[7]。陳勤[8]研究發(fā)現(xiàn)，沙苑子總黃酮（TFA）能顯著升高酗酒模型小鼠睪丸、附睪指數(shù)，并增加其精子數(shù)量和活力，降低精子的畸變率，這提示TFA對酗酒模型小鼠的生精功能和精子細胞損傷有一定的改善效果。本研究采用腺嘌呤灌胃雄性大鼠復制生殖功能障礙模型，探討TFA對雄性生殖障礙模型大鼠精子質(zhì)量、生育能力的影響，并通過檢測大鼠血清中性激素雌二醇（E2）、睪酮（T）、促卵泡激素（FSH）、促黃體激素（LH）水平，氧化應激相關指標谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平，腎功能指標肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）水平，腎組織中凋亡蛋白B細胞淋巴瘤/白血病2（Bcl-2）、Bcl-2相關X蛋白（Bax）、胱天蛋白酶3（Caspase-3）、Caspase-9蛋白表達水平等指標變化，以期為治療男性生殖功能障礙的新藥研發(fā)及臨床應用提供參考。

1 材料

1.1 儀器

BS-490型全自動生化分析儀（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）;H1850R型高速冷凍離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司）;JJ-12J型脫水機（武漢俊杰電子有限公司）;RM2016型病理切片機（上海徠卡儀器有限公司）;Eclipse E100型正置光學顯微鏡（日本Nikon公司）;BSA2245型電子天平（德國Sartorius公司）;HM-SY96A型全自動酶標儀（山東食安生物科技有限公司）;Aperio A72數(shù)字病理系統(tǒng)[徠卡顯微系統(tǒng)（上海）貿(mào)易有限公司]。

1.2 藥品與試劑

TFA[南京澤郎生物科技有限公司，含量：47.28%（即每100 g沙苑子提取物含總黃酮47.28 g）];五子衍宗丸（江西藥都樟樹制藥有限公司，批號：20180415，規(guī)格：6 g/袋）;E2、T、FSH、LH、GSH-Px、SOD、MDA、Scr、BUN酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）試劑盒（蘇州卡爾文生物科技有限公司，批號分別為：E20181012A、E20181017A、E20181003A、E20181019A、E20181024A、E20181028A、E20180922A、E20181018A、E20181016A）;兔抗大鼠 Bcl-2多克隆抗體、兔抗大鼠Bax單克隆抗體、兔抗大鼠Caspase-3單克隆抗體、兔抗大鼠Caspase-9多克隆抗體（美國Abcam公司，批號分別為：ab32124、ab32503、ab13847、ab32539）;辣根過氧化物酶標記的羊抗兔免疫球蛋白G二抗（北京力高泰科技有限公司，批號：ab205718）;其余試劑均為分析純或?qū)嶒炇页Ｓ迷噭?，水為純凈水?/p>

1.3 動物

清潔級雄性、雌性SD大鼠各72只，體質(zhì)量180～220 g，購于濟南朋悅實驗動物繁育有限公司，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（魯）20190003。

2 方法

2.1 分組、造模與給藥

取雄性大鼠適應性喂養(yǎng)7 d后，分為空白組（生理鹽水）、模型組（生理鹽水）、陽性組（五子衍宗丸，2 g/kg，按人與大鼠體表面積折算，相當于人臨床用藥劑量的10倍）和TFA低、中、高劑量組（0.05、0.10、0.20 g/kg，給藥劑量參考文獻方法[9]設置），每組12只。采用邊給藥邊造模的方式，各組大鼠于每日上午9：00灌胃相應藥物（生理鹽水配制）;于同日下午3：00，除空白組不作處理外，其余各組大鼠灌胃腺嘌呤混懸液（200 mg/kg，以0.5%羧甲基纖維素鈉配制，臨用現(xiàn)配）復制雄性大鼠生殖功能障礙模型，連續(xù)給藥35 d[10-11]。大約第30天時模型組大鼠出現(xiàn)反應遲鈍、弓背、畏冷豎毛、尿量增加等情況時，表明模型建立成功。

2.2 各組大鼠精子質(zhì)量評價

末次給藥后，取雌性大鼠按1 ∶ 1比例與各組雄性大鼠合籠交配，7 d后取出雄性大鼠。雌性大鼠繼續(xù)飼養(yǎng)14 d，并檢測受孕率（受孕率=受孕雌鼠數(shù)量/雌鼠總數(shù)量），以評價雄性大鼠的精子質(zhì)量。

2.3 各組大鼠血清中性激素、氧化應激、腎功能相關指標檢測

各組雄性大鼠交配完畢取出后，腹腔注射10%水合氯醛麻醉，腹主動脈取血3 mL，于4 ℃條件下以3 000? ?r/min離心15 min。取上清液，按ELISA試劑盒說明書方法操作，檢測各組大鼠血清中E2、T、FSH、LH、GSH-Px、SOD、MDA、Scr、BUN水平。

2.4 各組大鼠臟器指數(shù)的檢測

各組雄性大鼠取血后，摘取其胸腺、睪丸、附睪、精囊腺、腎并稱定質(zhì)量，計算各臟器指數(shù)（臟器指數(shù)=臟器濕質(zhì)量/體質(zhì)量）。

2.5 各組大鼠睪丸、附睪、腎組織病理學觀察

取“2.4”項下各組雄性大鼠的睪丸、附睪、腎組織適量，置于10%甲醛溶液中固定，脫水，石蠟包埋，切片（3～5 ?m），然后進行蘇木精-伊紅（HE）染色，在顯微鏡下觀察上述組織的病理學變化。

2.6 各組大鼠腎組織中凋亡相關蛋白表達水平的檢測

采用免疫組織化學法檢測。取“2.5”項下各組雄性大鼠的腎組織切片，進行脫蠟，水化，抗原修復，以10%山羊血清封閉抗原，加入Bax、Caspase-3單克隆抗體和Bcl-2、Caspase-9多克隆抗體（稀釋比例分別為1 ∶ 250、? ?1 ∶ 250、1 ∶ 500、1 ∶ 250），置于4 ℃條件下孵育18～24 h;以PBS洗滌2 min×3次，加入二抗（稀釋比例為1 ∶ 2 000），室溫孵育10 min;以PBS洗滌10 min×2次，二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色，在顯微鏡下觀察顯色程度;以PBS洗滌5 min×3次，蘇木精復染，1%鹽酸中分化，自來水沖洗，乙醇梯度脫水，干燥，中性樹脂封片。Aperio數(shù)字病理系統(tǒng)掃描切片并拍照，利用Image-Pro Plus 6.0軟件分析陽性染色部分的光密度值，用來表示Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9蛋白表達水平。

2.7 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以x±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD檢驗。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

3 結果

3.1 各組大鼠精子質(zhì)量評價結果

與空白組比較，模型組雄性大鼠致雌鼠受孕率顯著降低（P<0.01）;與模型組比較，陽性組和TFA低、中、高劑量組雄性大鼠致雌鼠受孕率均顯著升高（P<0.05或P<0.01）。各組大鼠精子質(zhì)量評價結果見表1。

3.2 各組大鼠血清中性激素、氧化應激、腎功能相關指標檢測結果

與空白組比較，模型組大鼠血清中E2、T、SOD、GSH-Px水平均顯著降低（P<0.01），F(xiàn)SH、LH、MDA、Scr、 BUN水平均顯著升高（P<0.01）。與模型組比較，陽性組和TFA中、高劑量組大鼠血清中E2、T、SOD、GSH-Px水平均顯著升高（P<0.05或P<0.01），F(xiàn)SH、LH、MDA、Scr、BUN水平均顯著降低（P<0.05或P<0.01）;TFA低劑量組上述指標呈同樣變化趨勢，且大部分差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05或P<0.01）。各組大鼠血清中相關指標檢測結果見表2。

3.3 各組大鼠臟器指數(shù)的檢測結果

與空白組比較，模型組大鼠腎指數(shù)顯著升高（P<0.01），睪丸、附睪、精囊腺、胸腺指數(shù)均顯著降低（P<0.01）。與模型組比較，陽性組和TFA低、中、高劑量組腎指數(shù)均顯著降低（P<0.05或P<0.01），睪丸、附睪、精囊腺、胸腺指數(shù)均顯著升高（P<0.05或P<0.01）。各組大鼠臟器指數(shù)的檢測結果見表3。

3.4 各組大鼠睪丸、附睪、腎組織病理學觀察結果

空白組大鼠睪丸組織生精小管基膜完整，生精細胞排列規(guī)則，血管豐富，間質(zhì)細胞發(fā)育良好，近管腔處可見大量精子;附睪組織中附睪管排列緊密規(guī)則，管腔內(nèi)精子含量豐富、分布均勻;腎組織中腎小管內(nèi)無異物，腎單位清晰 。模型組大鼠睪丸組織生精小管直徑變細，間距較寬，生精細胞排列紊亂，生精上皮變薄且層次和數(shù)量均減少;附睪組織中附睪管管壁增厚、排列疏松、間質(zhì)增大，管腔增生萎縮、腔內(nèi)精子聚集成團;腎組織中腎間質(zhì)纖維增生，腎小管內(nèi)可見大量黃色結晶，腎小管上皮細胞變性、壞死、呈灶狀萎縮。陽性組和TFA低、中、高劑量組睪丸組織生精小管基膜和生精上皮變薄，生精細胞排列規(guī)則，少數(shù)生精上皮與基底部分離;附睪組織中附睪管管壁變薄、排列緊密，管腔內(nèi)精子數(shù)量增多、分布均勻;腎組織中腎小管內(nèi)結晶減少，上皮細胞萎縮、間質(zhì)纖維化情況明顯減少。各組大鼠睪丸、附睪、腎組織病理學觀察結果見圖1～圖3。

3.5 各組大鼠腎組織中Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表達水平測定結果

與空白組比較，模型組大鼠腎組織中Bcl-2蛋白表達水平顯著降低（P<0.01），Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表達水平均顯著升高（P<0.01）。與模型組比較，陽性組和TFA中、高劑量組大鼠腎組織中Bcl-2蛋白表達水均顯著升高（P<0.05或P<0.01），Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表達水平均顯著降低（P<0.05或P<0.01）;TFA低劑量組上述指標呈同樣變化趨勢，且大部分差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05或P<0.01）。各組大鼠腎組織中Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表達免疫組織化學染色顯微圖見圖4，蛋白水平檢測結果見表4。

4 討論

目前對男性生殖功能障礙的治療主要是通過藥物進行干預，包括抗雌激素藥物、抗氧化劑、左旋肉毒堿等，雖取得了一定療效，但也存在一定副作用[12]。弱精子癥屬于中醫(yī)“精少”“精薄”“精冷”等范疇，中藥治療多以補腎陽為主，如五子衍宗丸[由枸杞子、菟絲子（炒）、覆盆子、五味子（蒸）、車前子（鹽炒）等5味中藥組成]具有補腎益精的功效，臨床主要用于男性腎虛精虧所致不育癥[13]，基于此，本研究選擇其作為陽性藥物。

相關研究發(fā)現(xiàn)，TFA對大鼠生殖功能障礙具有一定的改善作用[8]，基于此，本研究通過灌胃腺嘌呤復制雄性大鼠生殖功能障礙模型，探討TFA對其生殖功能障礙的改善作用及可能機制。

精子的發(fā)生、成熟及睪丸的生精功能均受到下丘腦-垂體-性腺軸的調(diào)節(jié)和控制，性腺軸分泌的 FSH、LH和T直接調(diào)節(jié)人體性功能與生殖功能，以維持整個生育期的動態(tài)平衡[14]。FSH是由垂體分泌并唯一作用于睪丸支持細胞的生殖激素，在男性成年期，F(xiàn)SH和抑制素B的分泌形成負反饋調(diào)節(jié)機制[15]。因此，血清中FSH水平高低可反映睪丸內(nèi)支持細胞的成熟狀態(tài)及其功能，當FSH水平高于正常機體水平時，提示睪丸支持細胞功能異常。睪丸細胞受損首先會導致睪丸支持細胞-生精小管小管嵌合體受損，從而介導血清FSH水平升高，使血清中LH水平隨之代償性升高，影響精子密度[16]。本研究結果顯示，與空白組大鼠比較，模型組大鼠血清中FSH、LH水平升高，T水平降低，表明模型大鼠睪丸細胞受損;當給予五子衍宗丸和TFA后發(fā)現(xiàn)，大鼠血清中FSH、LH水平降低，T水平升高，提示TFA對生殖障礙模型大鼠睪丸受損及性激素紊亂具有一定干預作用。

氧化還原系統(tǒng)動態(tài)平衡調(diào)控對精子的產(chǎn)生和男性生育力維持具有重要的調(diào)控作用，精原干細胞的自我更新需要活性氧（ROS）來維持，二倍體的精原細胞分化為單倍體精子細胞的過程也需要一定濃度的ROS[17]。當機體內(nèi)ROS堆積時，會增加氧自由基含量，產(chǎn)生各種毒性作用，從而損害精子質(zhì)膜，導致精子質(zhì)量下降[18]。SOD水平的高低可反映機體清除氧自由基的能力，而MDA水平的高低又反映了機體細胞受氧自由基攻擊的嚴重程度;GSH-Px是抗氧化酶類，為ROS的清除提供還原力，保護細胞免受傷害[19-20]。因此，檢測生殖障礙模型大鼠血清中SOD、GSH-Px及MDA水平具有一定的意義。本研究結果顯示，與空白組比較，模型組大鼠血清中SOD、GSH-Px水平均顯著降低，MDA水平顯著升高，表明模型組大鼠抗氧化能力下降;當給予五子衍宗丸和TFA后發(fā)現(xiàn)，大鼠血清中SOD、GSH-Px水平顯著升高，MDA水平顯著降低，提示TFA可能通過增加機體抗氧化能力，改善生殖障礙模型大鼠的生精功能。

ROS大量產(chǎn)生還會增加正常組織細胞損傷及細胞凋亡的風險[21]。本研究通過檢測細胞凋亡相關蛋白，探討TFA對生殖障礙模型大鼠腎組織的改善作用。Bcl-2與Bax是最早被發(fā)現(xiàn)參與細胞凋亡的正負調(diào)節(jié)因子，Bcl-2是抑制細胞凋亡因子，Bax是促進細胞凋亡因子[22]。Caspase是細胞凋亡的核心，在死亡受體（Fas、DR4和DR5等） 介導的細胞凋亡途徑即外源性激活途徑中，其效應物Caspase-3被激活后將產(chǎn)生生物效應。目前普遍認為Caspase-9是凋亡的啟動子，是線粒體凋亡途徑的關鍵蛋白酶，處于Caspase“瀑布式”激活鏈的頂端，而Caspase-3是凋亡的主要執(zhí)行者[23]。本研究結果顯示，TFA中、高劑量組大鼠Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表達水平顯著降低，Bcl-2蛋白表達水平顯著升高，表明TFA可能通過調(diào)節(jié)凋亡蛋白表達，從而改善腎損傷。

睪丸是產(chǎn)生精子和分泌生殖激素的重要器官，附睪的主要功能是存儲精子并促進其功能成熟。本研究通過病理學觀察發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠睪丸生精上皮變薄，生精細胞排列紊亂、層次和數(shù)量均減少; 附睪管管壁增厚、排列疏松，管腔增生萎縮，管腔內(nèi)精子聚集成團，由此推測雄性大鼠性激素的紊亂可能與睪丸、附睪病變有關。經(jīng)TFA干預后，以上病理變化均有所改善，表明TFA可減輕雄性大鼠生殖功能損傷。相關研究發(fā)現(xiàn)，生殖障礙患者多伴隨腎組織病理損傷，表現(xiàn)出腎功能不全[24]。本研究也發(fā)現(xiàn)，模型組雄性大鼠腎組織出現(xiàn)大量棕黃色結晶;同時，腎功能指標檢測結果顯示，模型組大鼠血清中Scr、BUN水平也顯著升高。經(jīng)TFA干預后，大鼠腎組織病理損傷有所改善，血清中Scr、BUN水平顯著降低，表明TFA可明顯減輕大鼠腎組織病理學變化。

綜上所述，TFA對雄性大鼠生殖功能障礙具有一定的改善作用，其機制可能與降低性激素FSH、LH水平和下調(diào)腎組織中凋亡相關蛋白表達，升高性激素T、E2水平和改善機體氧化應激水平有關。

參考文獻

[ 1 ] ESTEVES SC，HAMADA A，KONDRAY V，et al. What every gynecologist should know about male infertility：an update[J]. Arch Gynecol Obstet，2012，286（1）：217-229.

[ 2 ] 吳艷婷，劉敏，金志春，等.中醫(yī)藥治療少弱精子癥研究進展[J].中西醫(yī)結合研究，2017，9（4）：213-216、218.

[ 3 ] 郭雪華，鄭連文.弱精子癥的研究進展[J].中國男科學雜志，2008，22（6）：54-56.

[ 4 ] 張艷，沈楠，齊玲，等.五味子多糖對環(huán)磷酰胺致生精障礙大鼠的治療作用及對生殖激素的影響[J].中國中西醫(yī)結合雜志，2013，33（3）：361-364.

[ 5 ] 畢煥洲，徐世杰.微波輻射性雄小鼠生殖功能障礙的中醫(yī)證候研究[J].中國性科學，2015，24（5）：68-74.

[ 6 ] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S]. 2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：183.

[ 7 ] 許夢瑩，郭日新，張曉，等.沙苑子化學成分研究[J].中國中藥雜志，2018，43（7）：1459-1466.

[ 8 ] 陳勤.沙苑子總黃酮對酗酒模型小鼠生精功能和DNA損傷的影響[C]//中國藥理學會第八屆全國生殖藥理學術研討會論文匯編.北京：中國藥理學會生殖藥理學專業(yè)委員會，2013：27.

[ 9 ] 李程錦，李明鵬，張東陽，等.沙苑子總黃酮對去勢大鼠骨質(zhì)疏松模型血清鈣、血清磷、骨代謝及生物力學特征的影響[J].中醫(yī)學報，2020，35（2）：1-5.

[10] 黃麗輝，黃日荷，鄧麗萍，等.金匱腎氣丸對比生精膠囊治療行為干預下少弱精子癥的臨床觀察[J].中國藥房，2016，27（30）：4230-4232.

[11] 童駿峰，徐志偉，楊元宵，等.腺嘌呤與氫化可的松所致大鼠腎陽虛證模型比較研究[J].中華中醫(yī)藥雜志，2015，30（11）：3901-3904.

[12] 劉紹明，張岳陽，郭軍，等.現(xiàn)代醫(yī)學對弱精子癥的研究概況[J].中國性科學，2018，27（11）：5-8.

[13] 王慧慧，張莉，徐瑞豪，等.杜仲補天素膠囊對白消安誘導的生精障礙小鼠的影響[J].中藥新藥與臨床藥理，2020，31（2）：169-178.

[14] 張盼盼，劉鳳霞，阿地力江·伊明，等.少弱精癥動物模型建立的研究進展[J].新疆醫(yī)科大學學報，2014，37（8）：974-976、980.

[15] 王彬，馬健雄，馬凰富，等.左歸丸對少弱精子癥大鼠模型生殖內(nèi)分泌激素的作用研究[J].中國性科學，2017，26（11）：78-81.

[16] 丁勁，張耀圣，商建偉，等.益腎健脾方對少弱精子癥小鼠模型睪丸生精功能和血清性激素水平的影響[J].環(huán)球中醫(yī)藥，2016，9（11）：1310-1314.

[17] CONRAD M，INGOLD I，BUDAY K，et al. ROS，thiols and thiol-regulating systems in male gametogenesis[J]. Biochim Biophys Acta，2015，1850（8）：1566-1574.

[18] 張開舒，周芳，安琪，等.麒麟丸對少弱精子癥模型雄性大鼠生殖功能的保護作用研究[J].中華男科學雜志，2017，23（9）：821-827.

[19] 耿強，歐陽斌，郭軍，等.加味天雄散對少弱精子癥模型大鼠附睪氧化損傷的保護作用[J].中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志，2016，22（1）：122-124.

[20] 林俊卿，黃薔如，王弼思，等.槲皮素對HaCat細胞增殖及β-防御素和谷胱甘肽過氧化物酶表達的影響[J].中國病原生物學雜志，2017，12（12） ：1161-1164.

[21] 周茜，楊林，張文靜，等.薯蕷皂苷元對少弱精子癥小鼠精子質(zhì)量和生殖系統(tǒng)氧化應激損傷的影響[J].湖北文理學院學報，2017，38（5）：85-88.

[22] 董雅潔，高維娟. Bcl-2、Bax、Caspase-3在細胞凋亡中的作用及其關系[J].中國老年學雜志，2012，32（21）：4828- 4830.

[23] 范春玲，胡丹，蘭明慧，等.牛化膿隱秘桿菌病腎臟Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax和Bcl-2的表達[J].中國獸醫(yī)學報，2017，37（12）：2266-2269、2274.

[24] 劉芳.真武湯對腎陽虛腎衰模型大鼠腎組織AQP1表達影響研究[D].沈陽：遼寧中醫(yī)藥大學，2010.

（收稿日期：2020-04-07 修回日期：2020-05-13）

（編輯：唐曉蓮）